鱼类粘孢子虫的体外培养

粘孢子虫可寄生于鱼类,两栖类和爬行类等动物,目前已发现700余种,其中大部分寄生在淡水鱼体内,可以说它是淡水鱼所特有的一种寄生虫.有关粘孢子虫的研究国内外虽有不少报道,但多集中在形态分类及新种鉴定,而对其体外培养尚未见报道.粘孢子虫病是养殖鱼类的主要寄生虫病,该病的流行和蔓延常常造成鱼类大量死亡.研究粘孢子虫的体外培养无论对查明粘孢子虫的生活史,还是对粘孢子虫病的防治,都具有十分重要的意义.本文报道了鲢碘泡虫(Myxobolus drjagini Achmerov,1954)体外培养的初步研究结果.     

人原始生殖细胞的分离和体外培养

从4～10周龄药物流产胚胎的生殖嵴和肠系膜组织中分离原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),培养在添加人重组白血病抑制因子(rh LIF)、人重组碱性成纤维细胞生长因子(rh bFGF)和Forskolin的小鼠饲养层细胞上.经过4～7 d培养,PGCs形成典型的鸟巢状集落.集落在传代过程中保持碱性磷酸酶活性,且胚胎阶段性特异抗原1(SSEA-1)、胚胎阶段性特异抗原3(SSEA-3)免疫荧光染色呈阳性.具有分化潜能的PGCs能在体外连续传代培养12代.结果表明从药物流产胚胎中分离的人类PGCs可以在体外培养成为具有分化潜能的多能性干细胞.     

三种药物对褶皱臂尾轮虫的急性毒性

研究了孔雀石绿、高锰酸钾和甲醛对褶皱臂尾轮虫的急性毒性.结果表明:孔雀石绿、高锰酸钾和甲醛溶液对褶皱臂尾轮虫的毒性作用随浓度的增加而变大,这三种药物对褶皱臂尾轮虫的急性毒性顺序为:孔雀石绿＞高锰酸钾＞甲醛;孔雀石绿、高锰酸钾和甲醛对褶皱臂尾轮虫24 h的LC50分别是0.613 mg·L-1、0.873 mg·L-1和11.277 mg·L-1,其相应的安全浓度分别为6.13 μg·L-1、8.73 μg·L-1和112.77 μg·L-1.     

三角帆蚌钩介幼虫体外培养及变态稚贝的形态变化

以超纯水为对照,利用普通温控培养箱,在(24.0±1.0)℃条件下对三角帆蚌钩介幼虫进行了15d的体外培养实验.结果显示:钩介幼虫排出体外24h内存活率显著下降为50.7%(p=0.006);A组(MEM高糖)、B组(RPMI1640)、C组(MEM 199)幼虫变态率分别为(7.5±3.9)%、(13.3±12.0)%、(42.1±10.0)%;D组(L-15)的幼虫变态率最高,为(66.1±3.8)%,极显著高于C组(p=0.007).相关分析表明,培养液中葡萄糖含量与钩介幼虫变态率存在显著负相关(r=-0.886).利用光镜和扫描电镜对体外培养变态发育的稚贝形态观察发现:稚贝双壳表面圆形凹陷数量和深度比幼虫显著减少,双壳边缘外套膜增厚,在外套膜、斧足表面分布有大量乳状突起,但形态不同.体外培养稚贝的外部形态和内部器官均发生了显著改变,完成了变态发育过程.     

几种理化因子对刺激隐核虫包囊及幼虫活力的影响

选择温度、盐度等环境因子和不同种类及浓度梯度的化学药剂进行单因素试验, 研究其对刺激隐核虫包囊孵化和幼虫活性的影响. 实验结果显示, 温度对刺激隐核虫包囊的孵化具有显著影响; 盐度对刺激隐核虫包囊的孵化和幼虫活性均有显著影响. 选择的高锰酸钾、双氧水、硫酸铜、盐水、福尔马林浸泡药物对包囊或幼虫也均有一定影响, 而采用福尔马林结合低盐度海水进行浸泡处理, 既可有效杀灭包囊和幼虫, 又可减少环境污染并降低生产成本.     

靶向二肽基肽酶维药体外筛选模型的建立及应用

二肽基肽酶IV（dipeptidyl peptidaseIV,DPPIV）是治疗Ⅱ型糖尿病的新靶点,糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1在体内有促进胰岛β细胞分泌胰岛素,胰岛素的生物合成,β细胞的生长并抑制其凋亡和抑制血糖升高等功能．二肽基肽酶Ⅳ可快速降解糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1,使其失去生物活性．本实验利用Caco-2细胞中所得到的二肽基肽酶IV,优化酶活筛选体系．确定了二肽基肽酶Ⅳ最适底物Gly-Pro-pNA浓度为0.064 mg/mL、反应温度37℃、反应时间30 min和竞争性抑制剂Ile-Pro-Ile浓度0.68 mmol/L,从而建立了靶向二肽基肽酶Ⅳ的快速筛选体系．应用该模型,对18种维药提取物进行了筛选．本研究结果将为维药的进一步开发和利用提供了理论依据.     

温泉瓶尔小草离体培养及种质试管保存培养基的筛选

以温泉瓶尔小草新生幼叶为外植体,应用均匀设计法筛选其最适宜的离体培养和种质试管保存各阶段培养基.结果表明,最适合愈伤组织诱导的培养基为WPM＋ZT0.50 mg·L-1＋2,4-D1.90 mg·L-1,诱导率为96.5%;芽苗分化的培养基为WPM＋ZT1.70 mg·L-1＋NAA0.10 mg·L-1,分化率为99.0%;生根培养基为1/4MS＋IAA0.05 mg·L-1＋IBA0.03 mg·L-1,生根率达97.8%以上;试管保存培养基为WPM＋KT1.10 mg·L-1＋根皮苷3.20 mg·L-1,通过24个月的保存,芽苗生长率仅在6.5%以下.试验结果证明,成功建立了温泉瓶尔小草离体培养体系,常温条件下利用延缓生长的方法在试管内保存温泉瓶尔小草种质是可行的.     

中国东海及南海近海4采样点海水可培养细菌的多样性研究

采用不同的培养方法从中国东海和南海近海海水样品中分离得到105株细菌,探讨了不同海区可培养细菌的物种多样性和群落组成特点.16SrDNA序列分析结果表明,东海分离菌株分属于2个细菌门的14个种,南海分离菌株分属于3个细菌门的19个种.其中,东海分离菌株中α-变形菌占33.3%,γ-变形菌占57.2%,厚壁菌门细菌占9.5%.南海分离菌株中α-变形菌占41.9%,γ-变形菌占35.5%,拟杆菌门细菌占17.7%,厚壁菌门细菌占4.8%.东海和南海样品的分离菌株在种属水平上的多样性差异明显,后者的多样性指数高于前者.     

荚膜红假单胞菌的自然选育及培养特性

从高产对虾塘底泥中分离到一株细胞产量较高的荚膜红假单胞菌（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃａｐｓｕｌａｔａ）茵株Ｊ３２５,光照厌氧培养生长,实验表明：Ｊ３２５菌株生长的最适温度为２７．５—３０℃,最适ｐＨ值为６．５—７．５,最适浓度为２．５％～５．０％．光照强度为２０００—５０００ｌｘ,培养基中添加０．２５％－０．３５％酵母提取物能明显地促进细胞生长．     

在“画法几何及机械制图”课程教学中如何培养学生的能力

本文从高等教育必须加强学生各种能力培养的观点出发，阐述了在“画法几何及机械制图”课程教学活动中如何培养大学生的自学能力、空间想象能力、逻辑思维能力、读图和绘图能力的途径和方法上所作的探索和体会。     

新型镁合金螺钉体外腐蚀降解及细胞活性研究

研究了基于NZ30K合金开发的新型Mg-3Nd-0.2Zn-0.4Zr-0.2Mn镁合金耐腐蚀性、体外降解行为特性及浸提液细胞生物毒性. 采用金相显微镜得到新型镁合金金相显微图, 采用扫描电镜(Scanning Electron Microscope, SEM)获取SEM图; 采用武汉科思特电化学工作站进行电化学测试, 并绘制动电位极化曲线, 以磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer Solution, PBS)模拟体液环境, 记录氢气析出体积并计算腐蚀速率; 利用细胞完全培养基测定pH值、重量变化曲线; 获取大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells, BMSCs), 并利用完全细胞培养基制作新型镁合金浸提液, 检测细胞生物活性, 以ZA75镁合金为基础添加0.3%Mn元素制成合金作为对照组, 比较腐蚀电位、体外降解情况以及细胞活性. 结果表明: 新型Mg-3Nd-0.2Zn-0.4Zr-0.2Mn镁合金横截面等轴晶体组织细小均匀性较好, 纵截面呈长条状组织均匀性稍差; 自腐蚀电位较高, 为-1.3912V; 自腐蚀电流密度较低, 为7.37×10-7 A?cm-2; 体外析氢量低, 失重量、pH值变化幅度相对较小; 降解速率下降后呈现小范围上升后趋于平缓; 具有良好的细胞相容性, 可以促进BMSCs细胞增殖分化.     

病毒体外诱导草鱼白细胞产生干扰素的研究

本文在草鱼白细胞分离、纯化的基础上 ,用病毒体外诱生出一种抗病毒因子,经理化和生物学性质鉴定表明,该因子是一种干扰素. 其特性与病毒体内诱导草鱼产生的干扰素相一致且具有相同的抗原性,表明两者是同一种干扰素. 提示白细胞是鱼体内产生干扰素的主要细胞.     

山荷叶离体培养和种质试管保存技术研究

摘要：以山荷叶新生嫩叶为外植体,基于均匀设计法筛选其最适宜的离体培养和种质试管保存各阶段培养基.结果表明,最适合愈伤组织诱导的培养基为MS+6 BA 1.00 mg·L-1+IBA 0.08 mg·L-1,诱导率为99.7%;愈伤组织再分化培养基为MS+6 BA 2.80 mg·L-1+IBA 0.02 mg·L-1+GA30.90 mg·L-1,分化率为99.5%;生根培养基为1/6MS+IAA 0.02 mg·L-1+IBA 0.04 mg·L-1,生根率达99.2%以上;试管保存培养基为1/4MS+6 BA 0.10 mg·L-1+根皮苷2.50 mg·L-1,通过27个月的保存,芽苗生长率仅在7.9%以下.试验结果证明,成功建立了山荷叶离体培养体系,常温条件下利用延缓生长的方法在试管内保存山荷叶种质是可行的.     

基于均匀设计优化深山草莓花瓣离体培养及植株再生体系

应用均匀设计法对深山草莓花瓣诱导愈伤组织和愈伤组织再分化芽苗的主要因子和水平进行了探讨.结果表明,深山草莓花瓣愈伤组织诱导的适宜培养基为LS+TDZ 2.06 mg.L-1+2,4-D 0.60 mg.L-1,诱导率为98%;愈伤组织再分化芽苗的适宜培养基为1/2 LS+TDZ 2.30 mg.L-1+NAA 0.10 mg.L-1+KT1.30 mg.L-1,分化率为96.3%.炼苗移栽后观察植株的形态、花、果及生长等特征,以筛选具有优良性状的株系.     

双氯芬酸钠缓释液体栓制备与体内外相关性研究

设计制备了以泊洛沙姆407/188为主要基质,卡波姆、氯化钠为添加剂,月桂酸二乙醇酰胺为增溶剂的双氯芬酸钠缓释液体栓,以凝胶温度、凝胶强度、生物黏附力和体外释放度为考察指标进行体外评价;测定双氯芬酸钠缓释液体栓在犬体内的血药浓度,进行体内筛选.采用3p97软件计算液体栓相关药动学参数,进行体内释药特性研究.加入0.9%月桂酸二乙醇酰胺使双氯芬酸钠增溶2.3倍.缓释液体栓体外释放符合零级模式,R20.9,释药时限大于6h;体内药物释放出现血药平台,具有良好的体内外相关性;体内过程为一室模型,t1/2(Ke)=5.553 3h,t1/2(Ka)=0.357 4h,cmax=7 712ng.mL-1,AUC0→∞=72 029ng.h.mL-1,MRT=7.61h.所制备的双氯芬酸钠缓释液体栓具有稳定的缓控释特性.     

黄瓜子叶身与子叶柄的生理特性差异及其不同培养反应

与黄瓜子叶身相比,无论是子叶离体培养前还是离体培养后, 在苗龄 3d～ 9d其间,子叶柄始终具有较低的呼吸强度和较大的 A260nm物质渗漏 ,而且,两者间差异随苗龄而改变,这表明子叶柄和子叶身的细胞透性、呼吸活性存在显著差异,这些差异可能与子叶离体培养时只有子叶柄部位才能分化花芽有某种联系.     

新型稀土镁合金螺钉体内促骨修复及体外生物相容性研究

为测试新型稀土镁合金的生物相容性及降解产物致敏性; 评价新型稀土镁合金螺钉对骨伤模型的治疗效果, 基于NZ30K镁合金添加Mn元素制成新型稀土镁合金, 并通过后期加工制成不同规格的螺钉. 将稀土镁合金螺钉浸入磷酸盐缓冲液中制作浸提液, 于大鼠后肢背部皮下注射, 观察浸提液皮下致敏性. 将螺钉打磨制成圆片植入到大鼠皮下, 观察皮下降解产气情况, 以可吸收骨蜡作为对照同位置皮下植入. 建立兔骨损伤模型, 将稀土镁合金植入, 定期拍摄X光检查螺钉降解情况, 按照时间顺序分别于8周、12周、16周处死实验兔制作肝肾切片、骨切片, 评价肝肾毒性及体内降解情况; 同期以ZA75镁合金为基础添加0.3% Mn元素制成新镁合金, 作为对照组对比稀土镁合金对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化效果. 将浸提液过滤稀释后添加至细胞培养板中, 加入成骨诱导液培养, Westernblot蛋白电泳实验测定骨保护蛋白(OPG)表达情况. 新型稀土镁合金浸提液未表现出致敏性, 皮下降解结果显示植入初中期有气腔产生, 中后期气腔消失, 镁合金完全降解; 组织切片显示, 兔股骨螺钉植入在前中期有一定肝肾毒性, 植入中期促骨生长效果相较于前期更为明显, 植入后期未见明显肝肾毒性, 螺钉降解完全, 植入部位骨质增强; 兔股骨植入降解结果显示植入前期未观察到明显的促进骨生长效果, 螺钉与骨质嵌合紧密, 植入中期促骨生长修复效果呈现, 局部骨组织出现膨隆包裹住螺钉降解产物, 植入后期螺钉完全降解, 植入位置有一小孔未闭合, 股骨近端明显膨隆; 蛋白电泳实验显示, 新型稀土镁合金浸提液可增加OPG表达, 具有良好的生物相容性. 基于NZ30K开发的新型稀土镁合金在动物实验及细胞实验阶段表现出良好的生物相容性, 可为临床应用提供一定参考.     

2020年宁波市主养海水鱼流行病学调查与药敏试验

为了解宁波地区水产养殖品种病害发生情况, 本研究于2020年通过定期抽检与应急检测相结合方式, 开展了地区性的主要海水鱼流行病学调查工作. 从大黄鱼、小黄鱼、七星鲈鱼、银鲳等海水鱼上共分离到细菌19株, 主要菌株为哈维氏弧菌和美人鱼发光杆菌; 检测出病毒阳性26批次, 主要为传染性脾肾坏死病毒和真鲷虹彩病毒; 镜检观察到寄生虫2例, 分别为东方鱼虱和梅氏新本尼登虫. 药敏试验结果显示: 从鱼体分离得到的致病菌对盐酸多西环素、氟甲喹敏感2种药物的最小抑菌浓度(MIC)普遍＜0.1 mg●L^-1, 因此其可作为优选药物进行细菌病的治疗. 另外发现在不同时间段, 大黄鱼上分离到的同种细菌对药物的敏感性并不一致. 药敏试验结果将有助于养殖户做到科学、精准用药, 同时也能为本地水产养殖动物病原菌的耐药性普查工作提供理论基础.