酵母丙氨酸转移核糖核酸的人工全合成

核酸和蛋白质是生命活动的最基本物质,没有它们就没有生命。要了解生命现象的本质,就必须了解这两类生物大分子化合物的性质、结构和功能,以及它们之间的相互关系。用     

漫谈酵母丙氨酸转移核糖核酸的人工合成

1981年11月19日,由中国科学院上海生物化学研究所、细胞生物研究所、有机化学研究所、北京生物物理研究所、北京大学生物系和上海试剂二厂等六个单位共同协作完成了酵母丙氨酸转移核糖核酸(简称酵母丙氨酸 tRNA)的     

我国人工合成酵母丙氨酸转移核糖核酸获得成功

去年十一月,我国胜利地完成了酵母丙氨酸转移核糖核酸的合成。这是世界上第一次人工合成了一个具有明确生物活力的核糖核酸,是继我国在世界上首     

人工合成的酵母丙氨酸转移核糖核酸的生物活力测定

本文报道了用一种高灵敏度的方法测定人工合成的酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNA_y~(Ala))的生物活力。tRNA_y~(Ala)在大鼠肝氨酰基tRNA合成酶的催化下接受丙氨酸后,用操作简便而回收率较高的酒精沉淀法回收氨酰化产物,最后,在兔网织红细胞裂解液无细胞蛋白合成体系中,测定氨酰化产物中的丙氨酸转移到蛋白质中去的能力——参入活力。这方法不仅可以测定分离纯化的tRNA_y~(Ala)的活力,而且也可以测定经T_4RNA连接酶连接两个半分子后的反应混合物中产物tRNA_y~(Ala)的活力。利用这方法,已成功地测定了微至5—7 pmoles的人工全合成tRNA_y~(Ala)的接受活力和参入活力两组数据。测定结果表明,全合成tRNA_y~(Ala)的接受活力是天然分子的51.6—65.6％,是经拆合的天然分子的91.3—106.0％。其氨酰化产物中的[~3H]-Ala在兔网织红细胞裂解液中的利用率为61.6—63.1％,是天然分子的90.6—91.7％,是经拆合的天然分子的97.2—115.8％。     

酵母丙氨酸转移核糖核酸5′-半分子(1—35)的合成

本文报道了应用T_4RNA连接酶将酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNA_y~(Ala))5′-半分子中的三个寡核苷酸片段[—13(Ⅰ);14—22(Ⅱ);23—35(Ⅲ)]连接成5′-半分子的工作。由于寡核苦酸片段的纯度高,多核苷酸激酶和T_4RNA连接酶的质量好,采用连续反应的方法,简化了分离步骤,使产物的得率大大提高,二十二核苷酸的连接率是75％,三十五核苦酸的连接率是90％,以第一步反应原料为基数计算,最终产物的总得率是21％。经连接点和末端核苷酸分析,证明它的结构是正确的。将合成的5′-半分子与天然的3′-半分子在T_4RNA连接酶的催化下连接成人工半合成的完整tRNA_y~(Ala),具有接受[~3H]-丙氨酸和将[~3H]-丙氨酸转移到蛋白质中的生物活力。     

酵母丙氨酸转移核糖核酸3'-端十九核苷酸(58-76)的合成

研究了两个低聚核糖核苷酸的3′-端磷酸化方法.以3′-端带磷酸单酯的低聚核苷酸为供体,用T_4 RNA连接酶将AUUC,CGGA,CUCGUCCA和CCAp等按低的供受体摩尔配比(1∶1.1至1∶2),以87～90％的连接率合成了相应于酵母丙氨酸转移核糖核酸3′-端53～76核苷酸顺序的十九核苷酸AUUCCGGACUCGUCCACCAp.     

酵母丙氨酸转移核糖核酸3′-半分子(36—76)的合成

本文报告用T_4RNA连接酶将相应于酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNA_y~(Ala))3′-半分子(36—76)的三个寡核昔酸大片段——10(36—45)(Ⅰ),12(46—57)(Ⅱ)和19p(58—76)(Ⅲ)——从3′-端向5′-端延伸逐个连接合成了这个tRNA的3′-半分子(36—76)。首先在供受体配比为1:1.5的情况下,采取三步连续反应,即19p(Ⅲ)的5′-磷酸化,然后与12(Ⅱ)的连接和连接反应产物的5′-磷酸化等反应,一次制备分离的方法,以70％的总得率合成了5′-磷酸化的三十一核苷酸(46—76)(Ⅳ)。然后,以(Ⅳ)作为下一步反应的供体和三倍量的10(Ⅰ)连接,以67％的产率合成了具有四十一核苷酸的tRNA_y~(Ala)的3′-半分子(36—76)(Ⅴ)。将这个合成的3′-半分子,5′-磷酸化以后,与天然的5′-半分子连接,人工半合成了tRNA_y~(Ala)整分子,经生物活力测定,这个人工半合成的tRNA_y~(Ala)具有接受[~3H]-丙氨酸、并能将接受的丙氨酸转移到蛋白质分子中去的生物活力。     

核酸化学研究 Ⅲ.酵母丙氨酸转移核糖核酸TψC臂ApUpUpC、CpGpGpA和ApUpUpCp的合成

本文报道了带保护基的四核苷三磷酸(Bz)A_(bzp)~(bz)U_(bzp)U_(bzp)C_(Bz)~(bz),(9),(Bz)A_(bzp)~(bz)U_(bzp)C_(bzp)~(bz)U(Bz_2(15),C_(bzp)~(bz)G_(ibup)~(ac)G_(ibup)~(ac)A_((Bz)_2)~((bz)_2)(24)和四核苷酸(Bz)一A_(bzp)~(bz)U_(bzp)U_(bzp) Cv_(bzp)~(bz)(29)的合成。三个四核苷三磷酸均用相应的二核苷二磷酸和二核苷一磷酸,即化合物9由(Bz)A_(bzp)~(bz)U_(bzp)(4)和U_(bzp)C_((Bz)_2)~(bz)(8),化合物15由4和C_(bzp)~(bz)U(Bz)_2(14),化合物24由(McOTr)C_(bzp)~(bz)G_(ibup)~(ac)(19)和G_(ibup)~(ac)A_(Bz)_2~((bz)_2)(23)缩合而得。四核苷酸(Bz)A_(bzp)~(bz)U_(bzp)U_(bzp)C_(bzp)~(bz)(29)由化合物4和二核苷酸U_(bzp)~(bz)(28)缩合而成。四者均用二环己基碳二亚胺为缩合剂。化合物9、15、24和29在去保护基、纯化后分别得到纯的ApUpUpC(10)、ApUpCpU(16)、CpGpGpA(25)和ApUpUpCp(30)。在反应后处理条件和二乙基氯乙基纤维素柱层析条件下,对化合物G_p~(ac)、G_p~(ibu)、G_(acp)~(ac)、G_(ibup)~(ac)、G_(bzp)~(ac)和G_(ibup)~(ibu)上的酰基保护基的稳定性作了比较。     

酵母丙氨酸转移核糖核酸双氢尿核苷(D)环区九核苷酸(14-22)的合成

用有机合成或酶促合成的AGDCGG为受体,以过量的pDAGp为供体,应用T_4RNA连接酶,成功地合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNA_y~(Ala))的双氢尿核苷(D)环区九核苷九磷酸AGDCGGDAGp.在脱去3’-端磷酸基团后,得九核苷八磷酸.产物经序列分析证明,与AGDCGGDAG完全符合.本文也进行了相应于D环区九核苷酸的组成片段AG,AGDC,GG,GGp和DAG的5’-磷酸化和它们之间连接的条件探索,发现了3’-DMP和DAG的5’-磷酸化需在5～10℃下进行,可获近定量的产率. AGDCGGDAGp已用于tRNA_y~(Ala)的全分子合成.     

水杨酸荧光增强法测定酵母核糖核酸

核酸是生物体内重要的生物大分子,定量测定核酸是研究核酸的基础,由于核酸内源荧光很弱,直接利用荧光技术来研究核酸的结构和性质受到限制.     

吖啶橙共振光散射法测定酵母核糖核酸

在pH 11.2的B-R缓冲溶液中,吖啶橙与酵母核糖核酸形成缔合物,使酵母核糖核酸的共振散射增强。体系的最大散射波长为333nm,酵母核糖核酸的质量浓度在0.05~15.0mg·L-1范围内与共振散射增强强度(ΔI)呈线性关系,检出限(3s/k)为0.017mg·L-1。据此,提出了一种简单而快速测定酵母核糖核酸的方法。应用此方法测定2个空白合成样品中酵母核糖核酸的含量,测得平均回收率为99.0%,平均相对标准偏差(n=5)为1.3%。     

一种全合成型人工红血球的研究进展

一种全合成型人工红血球的研究进展;人工红血球;全合成型白蛋白－血红素载体;氧气输送;安全性;综述     

亚甲基蓝与酵母核糖核酸相互作用的电化学研究

亚甲基蓝(methylene blue,MB)是一种具有平面结构(结构式见图1)的碱性生物染色剂,在医学临床诊断及化学分析中已有较长的应用历史,可用于亚硝酸盐、磺氨类、氰化物及一氧化碳等中毒的解毒药。电分析化学中常被用作氧化还原指示剂或电子媒介体,其在水溶液中的电化学行为曾被深入地研究[1-2]。在水溶液中,MB的还原态为无色中性分子,而氧化态MB 为一价阳离子,由于分子中环平面和氮杂原子上甲基的存在而具有一定的疏水性。水溶液中MB容易形成二聚体,在电极上发生两个连续的1电子转移反应(EE mechanism)[1],其氧化还原电位的峰距ΔEp介于1电…     

酵母核糖核酸与中性红相互作用及电化学检测

采用循环伏安法对酵母核糖核酸与中性红的相互作用进行了研究。NR在玻碳电极上有一对氧化还原峰,加入yRNA后,氧化还原峰电流降低,但没有新的氧化还原峰出现,表明NR与yRNA发生了较强的相互作用,紫外光谱进一步证实该作用方式为静电作用。求得NR与yRNA的结合比为1∶2,建立了一种间接检测酵母核糖核酸的电化学方法,检测范围为5.0×10-3~0.25 g/L,检出限达1.0×10-5g/L。     

酵母核糖核酸的UV-Vis光谱探针反应的机理研究

采用UV－Vis分光光度法，研究在pH7－8的缓冲溶液中，酵母核糖核酸（RNA）与3－氨基－6－二甲氨基－2－甲基吩嗪盐酸盐（ZR）相互作用；反应生成红色配合物，该配合物的最大吸收波长为540nm；反应前后的吸收光谱变化明显，配合物的吸收峰与试剂本身比较红移90nm；研究了体系的酸度、温度、时间等基本反应条件以及不同类型的离子对体系的影响，发现离子强度的改变对体系的吸光度有明显的影响。     

酵母丙氨酸tRNA类似物的合成及其生物活力的测定

在体外系统中,T 7-RNA聚合酶转录编码酵母丙氨酸tRNA及其半分子的DNA,获得不含修饰核苷酸的酵母丙氨酸tRNA及其5’半分子(1-35位核苷酸)和3'半分子(37-75位核苷酸).在T4-RNA连接酶的催化下,不含修饰核苷酸的5'半分子(1-35位核苷酸)和3'半分子(37-75位核苷酸)分别与天然的3'半分子(36-75位核苷酸)和5'半分子(1-36位核苷酸)连接成tRNA类似物.用以上方法得到了酵母丙氨酸tRNA的3个类似物:(1)tRNA的5'半分子不含修饰核苷酸;(2)tRNA的3'半分子不含修饰核苷酸;(3)整个tRNA分子不含有修饰核苷酸.在鼠肝氨酰tRNA合成酶系统中测定tRNA接受丙氨酸的活力,在兔网质无细胞蛋白质合成系统中测定tRNA将丙氨酸参入蛋白质的活力.结果是:5'半分子不含修饰核苷酸者,其接受丙氨酸的活力降低52％,而参入丙氨酸的活力基本不变;3'半分子不含修饰核苷酸者,其接受丙氨酸的活力降低79％,参入活力降低57％;整个分子不含修饰核苷酸者接受丙氨酸的活力降低85％,参入活力降低47％.这些结果说明修饰核苷酸,尤其是3'半分子的修饰核苷酸与tRNA的接受活力和参入活力间有密切的关系.     

Phebalosin的全合成

以间苯二酚和D,L-苹果酸为原料,经Pechmann反应、Reimer-Tiemann反应、Darzens缩合反应及Wittig反应合成了Phebalosin,总收率1.3%,其结构经~1H NMR和~(13)C NMR表征.     

Astellatol的全合成

正Angew.Chem.Int.Ed.2018,57,3386～3390含有异丙基取代反式六氢茚满结构的二倍半萜在化学合成上极具挑战性,其左侧通常含有包括多个季碳/杂季碳在内的多手性中心的稠环体系,右侧则是高度取代的反式六氢茚满结构,迄今为止少有成功的全合成工作报道.Astellatol于近30年前分离鉴定,并以其独特精巧的结构成为二倍半萜中合成挑战最大的目标分子之一.近期南方科     

鹤草酚的全合成

用伪绵马酚(Ⅵ)、2,4-二甲基-6-(α-甲基丁酰)-间苯三酚(Ⅷ)与甲醛在酸性条件下缩合得到鹤草酚(I_a),因而完全证实了从仙鹤草根芽中分离得到的外消旋驱绦虫有效成分鹤草酚的化学结构.