肌球蛋白中金属离子与ATP相互作用及其催化ATP水解的研究进展

生物体内细胞在氧化物质的过程中释放出的大量自由能,这些能量先形成高能磷酸化合物三磷酸腺苷（adenosine 5′-triphosphate,ATP）,当ATP水解为ADP（二磷酸腺苷,adenosine 5′-diphosphate）和无机磷酸时.     

肌球蛋白中金属离子与ATP相互作用及其催化ATP水解的研究进展

生物体内细胞在氧化物质的过程中释放出的大量自由能,这些能量先形成高能磷酸化合物三磷酸腺苷（adenosine 5′-triphosphate,ATP）,当ATP水解为ADP（二磷酸腺苷,adenosine 5′-diphosphate）和无机磷酸时.     

荧光素酶法测定活性污泥中的ATP

选择了４种不同的提取剂，对曝气池活性污泥的腺苷三磷酸进行提取，并用荧光素酶法进行了测定。结果表明，不同提取剂所提取的ＡＴＰ量有很大不同；同一提取剂对不同水样ＡＴＰ的提取效果也不同。     

表皮生长因子受体的ATP竞争性抑制剂

综述了表皮生长因子受体酪氨酸激酶的ATP竞争性抑制剂的研究进展,介绍了抑制剂结合受体蛋白的方式及其作用机理,重点介绍了可逆抑制剂和不可逆抑制剂的作用机理及其构效关系.     

生物体内的能量使者——ATP

众所周知,生物体中许多生命活动过程都需要消耗能量。那么,生物体内的能量都怎样产生、释放、转移、贮存和利用的呢?     

ATP触发快速响应的线性DNA凝胶

设计了2条分别带有腺苷三磷酸(ATP)适配体序列和黏性末端的单链DNA,二者首先通过互补杂交形成一个双链DNA单体,再由此单体自组装形成长线性DNA多聚体并进一步通过物理交联形成DNA水凝胶.通过流变学测试表征了水凝胶的形成,并通过应力扫描观察了从凝胶状态到溶液状态的转变.使用亚甲基蓝(MB)分子作为标记,通过紫外吸收光谱表征了该DNA水凝胶对ATP的响应动态.在加入ATP的15 min以内,DNA水凝胶在664 nm处的吸光值迅速上升并达到平台,表明该DNA水凝胶可以快速响应ATP.该DNA水凝胶在664 nm处的吸光值与ATP的浓度具有很好的线性相关性.DNA水凝胶中分别加入ATP、胸苷三磷酸(TTP)、胞苷三磷酸(CTP)、鸟苷三磷酸(GTP)4种类似物,通过紫外吸收光谱的测试表明了只有加入ATP的DNA水凝胶发生了解聚,MB被释放出来,说明该DNA水凝胶具有较好的稳定性以及对ATP响应的特异性.     

亲水相互作用色谱高效分析人尿液中的ATP

建立了亲水相互作用色谱法高效分析人体尿液中三磷酸腺苷(ATP)的方法。ATP是高能磷酸盐化合物,一种不可替代的生物分子。在本文中,分别使用反相色谱柱和亲水相互作用色谱柱测定ATP。结果表明:在亲水相互作用(HILIC)色谱分离模式下,流动相为甲醇-0.1%的甲酸水溶液=10∶90(v/v)、柱温30℃、流速0.4 mL·min~(-1)、检测波长258 nm时,对ATP的分离效果最佳。在此条件下,测定人尿液中的ATP含量,并在部分样品中的检出1.04～1.65 mg·L~(-1)。进一步加标试验的回收率在77.09%～112.83%之间,相对标准偏差低于13.50%。     

基于纳米金的ATP检测体系的研究进展

ATP是机体代谢过程中不可或缺的能量物质，参与机体的各项重要的生理生化活动，在各方面起着至关重要的作用。因此，对ATP的快速精准检测具有重要的临床意义。纳米金（AuNPs）因优良的光学特性、催化活性、生物相容性等特点，被广泛应用于构建ATP检测体系。本文综述了目前AuNPs应用于ATP检测的研究进展，如比色检测、荧光分析、电化学检测、电化学发光检测、化学发光检测以及表面增强拉曼散射等，比较了各种检测方法的优点与不足，并对AuNPs在ATP检测应用中面临的挑战和机遇做了展望。     

心肌细胞膜ATP酶活性在线测定及变化规律研究

基于流动注射停流技术和软物质在线采集技术建立了一种快速磷钼染色法测定细胞膜三磷酸酰苷(ATP)酶活性的方法.与传统方法相比,该分析方法速度提高了7倍,而且操作简便,试剂消耗少.将该方法应用于兔心肌细胞膜ATP酶活性变化规律的研究,结果显示酶活性在研究时间内按一定规律递减.为细胞膜及其受体的纯度、活性等相关研究提供了重要信息.     

紫色酸性磷酸酯酶模型化合物水解ATP的研究

紫色酸性磷酸酯酶（PAPS）是含铁的糖蛋白，能够从植物和动物体内分离出来，在微酸性条件下，能催化水解磷酸酯阻］，该类酶具双核铁中心活性部位，每个蛋白有两个铁原子，两个铁原子以ellelll形式存在时，具有催化活性·近年来，人们对研究磷酸酯水解酶感兴趣，是因为这个课题     

基于核酸适体检测ATP的酶联分析新方法

基于核酸适体对靶标的特异性识别和辣根过氧化物酶(HRP)的高效催化反应, 发展了一种用于检测三磷酸腺苷(ATP)的酶联核酸适体分析新方法. 核酸适体和靶标的特异性结合导致与核酸适体杂交的短链DNA解链, 解离的DNA通过杂交被固定在另一酶标板的DNA捕获. 解离的DNA预先标记了异硫氰酸荧光素(FITC)基团, FITC特异性结合HRP标记的FITC抗体, HRP作为信号传导元素催化四甲基二苯胺(TMB)底物显色, 通过颜色变化及450 nm波长处吸光度的变化检测ATP. 该方法对ATP具有良好的选择性, 检测不受其它物质如GTP, UTP和CTP的干扰, 且检测能在较复杂的试样(体积分数10%和50%的血清)中进行. 实验结果表明, 在ATP浓度为50~400 nmol/L范围内, 具有良好的线性关系, 检出限为26 nmol/L.     

ATP与氨基酸弱相互作用的质谱与理论计算研究

利用电喷雾质谱、荧光、核磁和理论计算研究了ATP与19种氨基酸的弱相互作用.在质谱中发现除甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)外,其它氨基酸均可观测到与ATP因弱相互作用形成的复合物离子.利用不同质谱锥孔电压下复合物稳定性的不同,分析了侧链基团对ATP与19种氨基酸弱相互作用的影响.并利用荧光光谱和核磁共振波谱法研究了芳香性氨基酸与ATP的弱相互作用.结果表明,氨基酸与ATP的弱相互作用强弱顺序为:色氨酸(Trp)＞苯丙氨酸(Phe)＞具有R‖C-NH2的氨基酸＞具有-RCOOH、-R-NH2的氨基酸＞具有-RSH、-ROH的氨基酸＞R为长链的氨基酸＞R为短链的氨基酸.不同官能团的氨基酸与ATP的弱相互作用的模拟计算也证实了此结论,并发现氨基酸的主侧链基团与ATP分子基团间的多个分子间因氢键作用使复合物能稳定存在.这一结果将为预测蛋白与ATP结合位点及研究ATP的识别机理提供依据.     

高效液相色谱法测定棉籽中的ATP，ADP，AMP

测定生物组织中腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷一磷酸(AMP)的含量,在研究生物的一些生理生化现象中有重要意义。利用不同方法定量分析这三种腺苷酸的报道已有很多。本文所述是用反相高效液相色谱法,对棉籽中的ATP、ADP和AMP进行测定。     

非标记纳米银探针催化共振散射光谱检测痕量ATP

在pH 7.8 Tris-HCl缓冲液中, 三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)的核酸适体(Apt 1)与其互补链(Apt 2)结合生成双链DNA (double-strand DNA, dsDNA). 此dsDNA不能稳定纳米银(AgNP), NaCl可致AgNP聚集, 在500 nm波长处产生一个较强的共振散射峰. 加入ATP后, ATP与dsDNA中的Apt 1结合形成较稳定的发夹结构结合物并释放出可稳定AgNP的Apt 2. 随着ATP浓度(16.5～1650 nmol/L)增加, 生成的Apt 2增加, 被Apt 2稳定的AgNP即AgNP-Apt 2结合物增加, 聚集的AgNP减少, 500 nm处的共振散射值线性减小. 该适配体反应中的AgNP-Apt 2对葡萄糖-铜(II)微粒反应具有较强的催化作用, 其产物氧化亚铜微粒在610 nm处有一较强共振散射峰. 随着ATP浓度增大, 反应液中AgNP-Apt 2增多, 催化作用增强, 610 nm处的共振散射峰增强. ATP浓度在4.95～165 nmol/L范围内与共振散射增大值ΔI_{610 nm}呈线性关系, 检出限为1.8 nmol/L ATP. 据此建立了灵敏度高、选择性好、简便快速检测ATP的共振散射光谱新方法.     

ATP与Fe4S4*络合的31P-NMR研究

MgATP结合在铁蛋白的什么部位?众说纷芸,尚无定论。大多数研究者认为,MgATP不是与铁蛋白的活性中心Fe_4S_4原子簇络合,而是与它的非铁部位例如巯基或者外围组织络合。在上述作用模式中,ATP与铁蛋白键合的性质是不确定的。曾主张MgATP与铁蛋白的非铁部位结合的Mortenson等后来用~(31)P-NMR观察到,MgATP与还原态铁蛋白的结合,引起ATP的α-、β-和γ-~(31)P谱峰分别往低磁场漂移8.7、9和7.7ppm,这时他开始认为,这种变化可能是由于ATP与铁蛋白的某部位或者是与其活性中心Fe_4S_4原子簇的络合引起的。铁蛋白的活性中心与其模型化合物在化学性质上是基本相似的。通过化学模拟体系的~(31)P-NMR研究,有助于确定铁蛋白与MgATP的络合方式。     

A new protocol for predicting novel GSK-3β ATP competitive inhibitors

Glycogen synthase kinase 3β (GSK-3β) is a potential therapeutic target for cancer, type-2 diabetes, and Alzheimer's disease. This paper proposes a new lead identification protocol that predicts new GSK-3β ATP competitive inhibitors with topologically diverse scaffolds. First, three-dimensional quantitative structure-activity relationship (3D QSAR) models were built and validated. These models are based upon known GSK-3β inhibitors, benzofuran-3-yl-(indol-3-yl) maleimides, by means of comparative molecular field analysis (CoMFA) and comparative molecular similarity indices analysis (CoMSIA). Second, 28?826 maleimide derivatives were selected from the PubChem database. After filtration via Lipinski's rules, 10?429 maleimide derivatives were left. Third, the FlexX-dock program was employed to virtually screen the 10?429 compounds against GSK-3β. This resulted in 617 virtual hits. Fourth, the 3D QSAR models predicted that from the 617 virtual hits, 93 compounds would have GSK-3β inhibition values of less than 15 nM. Finally, from the 93 predicted active hits, 23 compounds were confirmed as GSK-3β inhibitors from literatures; their GSK-3β inhibition ranged from 1.3 to 480 nM. Therefore, the hits rate of our virtual screening protocol is greater than 25%. The protocol combines ligand- and structure-based approaches and therefore validates both approaches and is capable of identifying new hits with topologically diverse scaffolds.     

Cd(Ⅱ)和ATP的结合位点的NMR研究

用NMR方法研究了金属镉离子在ATP(嘌呤三磷酸腺苷)上的配位点.测量了不同pH值时由于Cd²⁺的存在而引起的¹H,¹⁵N及³¹P的化学位移和³¹P－³¹P中的偶合常数的变化以及由ATP的存在所引起的¹¹³Cd的化学位移的变化.结果表明,在pH＞4.5的条件下,ATP主要以磷酸根和N₇同时对Cd²⁺配位;在pH值2.5～4.5的条件下,ATP主要以磷酸根和N₁同时对Cd²⁺配位,还存在少量的磷酸根和N₇同时配位的模式;而在酸性非常强的条件下(pH＜2.5),ATP不再与Cd²⁺相互作用。     

化学位移估算研究ATP构象随溶液pH值的变化

利用Johnson和Bovey的理论和方法计算了不同扭曲角χ(O4′－C1′－N9－C4)的ATP(5′-三磷酸腺苷)分子中糖环质子H1′和H2′由于环流效应引起的化学位移.H1′的化学位移与扭曲角χ有较强的依赖关系,反映了ATP在溶液中细微的构象变化.将计算结果与实验结果比较,证明在本文讨论的pH值范围(1～10)内,Mg2＋加入后,ATP的扭曲角χ在230～360°范围内变化.随溶液的pH值减小,ATP分子的构象由trans 构象通过-gauche构象转变为cis构象. 从而证明在酸性条件下, ATP倾向于以cis构象存在,而在碱性条件下trans构象更为稳定,从另一方面支持了在酸性条件下N1参与配位而在碱性条件下N7参与配位的结论.在讨论中也考虑了由pH变化所引起的环流强度的变化.