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本文应用二氢叶酸(DHFA)和辅酶Ⅱ(NADPH)的荧光性质,建立了二氢叶酸还原酶(DHFR)活力测定的反应体系,并对酸度等反应条件进行了优化。在该体系中,用双倒数作图法分别测定了二氢叶酸还原酶对二氢叶酸和辅酶Ⅱ的表观米氏常数。将所建立的体系应用于氨甲喋呤,甲氧苄氨嘧啶等已知抑制剂的抑制率的测定,结果满意。 相似文献
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毛细管电泳法研究中草药有效成分对二氢叶酸还原酶的抑制作用 总被引:2,自引:0,他引:2
利用已建立的二氢叶酸还原酶抑制剂的毛细管电泳法筛选模型,研究了10种中草药有效成分对二氢叶酸还原酶的抑制作用.经实验测定发现木樨草素、表儿荼素、紫杉醇和槲皮素对二氢叶酸还原酶(DHFR)有抑制作用,且抑制效果为木樨草素>紫杉醇>表儿荼素>槲皮素.通过对产物NADP(氧化型辅酶Ⅱ)峰面积的定量测定,计算了4种抑制剂的抑制率. 相似文献
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通过检测体系中游离Ca2+离子浓度及草酸钙(CaOxa)的粒径随时间的变化,研究了CaOxa的结晶动力学及3种羧酸盐对CaOxa结晶动力学的影响,这些羧酸盐为:一元羧酸盐甘氨酸钠(NaGlu)、二元羧酸盐酒石酸钠(Na2Tart)和三元羧酸盐柠檬酸三钠(Na3Cit)。在生理盐水中CaOxa的结晶动力学方程为r=kc3.3±0.3,平均反应速率常数(k)为(3.1±1.8)×109;3种抑制剂对k的影响程度从大到小为:Na3Cit>Na2Tart>NaGlu,但其平均反应级数(α)相差不大,α=3.2±0.1。Na3Cit、Na2Tart可抑制CaOxa晶体的生长和聚集过程,是潜在的肾结石抑制剂。 相似文献
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建立了超高效液相色谱串联质谱仪(UPLC-MS/MS)检测酶促反应体系中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)浓度变化,快速筛选3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)抑制剂的方法。优化了HMGCR酶促反应体系和检测NADPH的色谱-质谱条件,探讨了NADPH的离子化试剂的作用和质谱碎裂机理。采用ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以三乙胺/六氟异丙醇缓冲液(pH=8.0)为流动相,流速0.3 mL/min,柱温30℃,电喷雾离子源-多反应监测模式,对酶促反应体系中的NADPH进行分析。NADPH的峰面积与其浓度在0.05~50μmol/L范围内呈良好的线性关系(r>0.9996),定量限(S/N=10)为0.05μmol/L。 相似文献
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天冬酰胺合成酶B抑制剂高效液相色谱筛选方法的建立与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
建立了一种快速、高效测定天冬酰胺合成酶B(AS-B)酶活性的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。酶反应体系中的氨基酸经2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生,通过RP-HPLC测定酶反应体系前后底物及产物的变化来分析酶的活性。采用的色谱柱为Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以50 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 6.2)-乙腈(体积比为15:85)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃,检测波长365 nm,于6 min内实现了各组分的基线分离。通过该方法测定反应动力学参数进行AS-B的抑制定量分析。将已知AS-B抑制剂L-谷氨酸-γ-甲酯作用于酶反应体系,测得的抑制剂的抑制常数与文献值相接近,证明该方法可用于AS-B抑制剂的筛选。 相似文献
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采用实验与数学模拟相结合的方法,研究了明胶层中释放显影抑制剂型成色剂与彩色显影剂氧化产物(QDI)的反应动力学,由实验测量的反应动力学结果与模拟动力学结果基本吻合,证明了明胶层中释放显影抑制剂型成色剂与QDI的反应,主要是发生在油-水界面上,反应速率与油珠大小、比速率常数、成色剂在油相中的浓度以及QDI的扩散系数有关。通过数值分析得到明胶层中DIR(Ⅰ)和DIAR(Ⅱ)分别与QDI反应的表观速率常数和比速率常数。 相似文献
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溴离子是振荡反应的抑制剂,其浓度减小的速率决定了振荡周期中自催化诱导期持续的时间,而振荡周期的总时长则取决于自催化诱导期,因此,溴离子能够影响体系振荡周期。而体系初始存在溴离子时,体系振荡频率与光强的动力学关系尚未研究。因此,在这项工作中,建立了Ru(bpy)32+催化Belousov-Zhabotinsky(BZ)均相封闭体系,研究溴离子存在时,体系振荡频率与光强的动力学关系,探究BZ反应物浓度对体系振荡频率曲线的影响。研究发现,初始存在溴离子时,体系振荡频率与光强之间仍然存在非单调关系。反应溶液中初始溴化钠浓度对于各反应物调制“振荡频率-光强”的效应起到不同作用:随着NaBrO3浓度和MA浓度增高,体系振荡频率整体上向高频区域移动;随着HNO3浓度的增加,体系振荡频率先向低频区域移动再向高频区域移动;随着NaBr浓度的增加,体系振荡频率向低频区域移动。这一研究为非线性系统的基础研究提供理论参考。 相似文献
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毛细管胶束电动色谱法测定血管紧张素转化酶的活性 总被引:6,自引:1,他引:6
建立了应用毛细管胶束电动色谱 (MECC)灵敏、快速的测定血管紧张素转化酶 (ACE)活性的方法。通过对电压、上样时间、电极缓冲液体系等影响因素的优化 ,探讨了方法的可行性 ,确立了最佳测定条件 (电压 :8 1kV ;上样时间 :1s;电极缓冲液 :2 0mmol/L硼酸盐缓冲液 (pH 9 0 ,含 5 0mmol/LSDS) ;检测波长 :2 2 8nm)。方法的最低ACE活性检测限为 5pmol/min(以 2倍的信噪比计 )。 相似文献
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建立了一种高效、快速的毛细管电泳分离-激光诱导荧光(CE-LIF)检测卡托普利(CAP)和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)的分析方法。采用1,3,5,7-四甲基-8-溴甲基-二氟二硼-二吡咯甲川(TMMB-Br)为柱前衍生试剂,在50 mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=8.5)中,40℃下进行衍生反应10min。以荧光素为内标,25mmol/L硼酸盐缓冲溶液(pH=9.5)为电泳背景电解质,14min内达到基线分离。CAP和NAC的检出限分别为0.65nmol/L、0.76nmol/L。将该方法应用于人体尿液和血清中这两种物质的测定,回收率在97.0%~105.7%之间。 相似文献
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建立了基于毛细管电泳技术的新疆紫草指纹图谱的质量控制方法.优化后的电泳条件:分离柱为50μm×40 cm未涂层毛细管柱,运行缓冲液为pH 8.0、100 mmol/L硼酸盐缓冲液(含25 mmol/L SDS及20%(V/V)无水乙醇),进样量0.5 psi×5 s,分离电压25 kV,检测波长214 nm.应用此条件,35 min内可实现新疆紫草有效成分的高效分离.在方法学验证的基础上,建立了新疆紫草指纹图谱.以新疆紫草对照药材指纹图谱为对照图谱,通过特征指纹峰、SFˊ相似度评价、聚类分析对不同购买地的新疆紫草进行质量评价和鉴别.此研究结果与其它中药鉴定方法对照结果一致.本方法准确、可靠、用时短,且具有良好的重现性,为新疆紫草的质量控制与评价提供了一种新的快速有效的鉴别方法. 相似文献
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胶束电动毛细管电泳同时测定饮料中的多种添加剂 总被引:4,自引:0,他引:4
建立了分析饮料中山梨酸,苯甲酸,10-羟基基癸烯酸,咖啡因和糖精钠五种添加剂的胶束电动细管电泳法。讨论了电压,缓冲溶液浓度和PH值,胶束浓度对分析结果的影响。5种添加剂的迁移时间和测定回收率的变异系数分别小于1.5%和5%,检测限分别为10,10,5,10,20μg/kg。 相似文献
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毛细管区带电泳法测定尿中甲酸含量 总被引:1,自引:0,他引:1
采用高效毛细管区带电泳法测定人体尿中甲酸含量,尿样经过滤后直接进样,方法简单、快速,测定结果令人满意。电泳电解质体系采用5mmol/L邻苯二甲酸氢钾,0.5mmol/L十六烷基三甲基溴化铵,pH6,50cm×50μmi.d.熔融石英毛细管(有效长度48.5cm),检测波长210nm,负电源,分离电压30kV,压力进样,恒温25℃,每次电泳前用0.1mol/LNaOH及缓冲溶液对毛细管各冲洗5min。同时,采用检测波长与参比波长对调的方法使负峰转变为正峰。 相似文献
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建立了毛细管区带电泳-间接紫外检测快速测定食品中乳糖、蔗糖、葡萄糖和果糖的方法。以水或5 mmol/L醋酸为样品提取液,未涂层熔融石英毛细管(30.2 cm(有效长度20 cm)×50 μm)为分离柱,4 mmol/L山梨酸钾+10 mmol/L磷酸钠+30 mmol/L NaOH(pH 12.56)+0.5 mmol/L十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为分离缓冲液,在-8 kV下分离,于254 nm波长下检测,10 min内实现了食品中上述4种糖的同时分离与测定。乳糖、蔗糖、葡萄糖和果糖的检出限(S/N=3)分别为50、75、25和25 mg/L,定量限(S/N=10)分别为150、225、75和75 mg/L,回收率在87.0%~107.0%之间,相对标准偏差在1.2%~4.7%之间。整个实验过程未使用有机溶剂。用该法测定了9种食品样品及1个质控样品,结果表明该法简单、快速、准确,适用于食品中乳糖、蔗糖、葡萄糖和果糖的日常测定。 相似文献
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A micellar electrokinetic capillary chromatographic method is presented which enables quantification of dexamethasone, polymyxin B and trimethoprim in synthetic mixtures and pharmaceutical products. Separation was carried out at 25 degrees C and 30 kV, with 10 mmol L(-1) borate-phosphate buffer adjusted to pH 8 as electrolyte, with 50 mmol L(-1) sodium dodecyl sulfate. Under these conditions separations were performed in 10 min. The limits of detection and quantification were approximately 2 mg L(-1) for each component, except for polymyxin B. The method was applied to different commercial formulations. 相似文献