耐高温酿酒酵母的选育’出发菌株的选择及发酵特性分析

本文报道了经过对我国四株常用的酒精发酵菌株，K氏酵母(Saccharomyces cere-visiae Haasen var. ellipsoideus(Hansea)Dekk)、1038(Saccharomyces cerevi-siae Haasen)、Rasse j(Saccharomyces cerevisiae Hsanen)、Rasse皿(Sac-charomyces cerevisiae Hansen)的发酵效率和耐热性能等生理特性的分析比较，发现虽然1038的耐热性能比其它三个菌株强(42℃时发酵效率为77.16劣)，但鉴于它发酵效率下降幅度远大于K氏酵母(在40℃发酵效率下降13,53劣，而K氏酵母下降9.21男一，据此，从既具一定的耐热性，又具较高的产酒率这点出发，拟尽 K氏酵母菌株作为选育耐高温产酒酵母的出发菌株.     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究——Ⅲ.种间融合杂种HU-KDF-185发酵能力的生产性鉴定试验

从原生质体融合获得的K氏酵母(Saccharomyces cerevisiae var.ellipsoideus)和糖化酵母(Saccharomyces diastalicus)的种间融合杂种中筛选到一株酒精高产菌株HU-KDF-185,它在番薯渣糖化液(约5.0—5.5Brix)的工厂生产性发酵试验中,原料的酒精得率平均是30.77％;而当前使用的酒精生产菌株K氏酵母(对照1)则是29.71％,新市一号菌株(对照2)则是29.54％.试验结果表明,种间杂种HU—KDF-185比K氏酵母和新市一号菌株分别增产酒精3.56％和4.16％.由此可以确定,杂种HU-KDF-185是一株具有生产价值的酒精高产菌株.     

耐高温酿酒酵母的选育Ⅱ菌株的选育及产酒发酵特性初探

本文报道了用紫外线(ultra violet raps)、氯化今里(LiCI})处理K字酵母(Sac-charomyces cerevisiae var. ellipsoideus)结合温度驯化等手段,选育适应高温生产高产酒率的酿酒酵母菌株,并模拟大生产的工艺条件对选育菌株进行初、复筛‘通过上述方法选有出了六株能在40℃正常生长,且发酵强度较好的菌株,其中E,-FE,-UV 1菌株发酵力比对照株K字酵母提高11.2%,劳萄糖利用率提高1300; E;一26-NS19-25菌株发酵力比对照株K字酵母提高8.7/,葡萄糖利用率提高17.5%,并且对选育株的某些发酵特性做了初步的探讨.     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究Ⅱ，酿酒酵母与糖化酵母种间融合杂种的发酵生物学研究

本文研究了酿酒酵母与糖化酵母的种间融合杂种HU-KDF-185在不同温度条件下发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和工厂番薯干糖化液的酒精生成率、发酵强度和发酵速率。实验结果表明,种间融合杂种HU-KDF-185在所试条件下的发酵力均超过两融合亲株,并优于酒精生产菌株K氏酿酒酵母。例如,在30℃、32℃和35℃发酵葡萄糖时,它比对照株K氏酵母分别增产酒精3.0％、1.93％和1.85％;其中在32℃发酵时,各菌株可获得最高的酒精生成率。而在32℃发酵麦芽糖、蔗糖和工厂番薯干糖化液时,杂种HU-KDF-185也比K氏酵母分别增产2.0％、9.71％和5.26％。     

SPSS正交设计优化琼胶酶产生菌的发酵条件

实验以从海洋环境中分离获得的一株琼胶酶产生菌Halomonas sp.DT-3为出发菌株,研究其发酵产酶的最佳培养基组成和发酵条件.以琼胶、蛋白胨、酵母膏、NaCl、K2HPO4、MgSO4、CaCl2为考察因素,发酵液中琼胶酶活力为指标,通过SPSS软件设计L27(37)正交试验.结果表明:通过正交实验得出菌株发酵产酶最佳培养基组成为琼胶0.5%、NaCl3.5%、蛋白胨0.3%、酵母膏0.2%、K2HPO4 0.1mmol·L-1、MgSO4 0.3mmol·L-1、CaCl2 1mmol·L-1,菌株发酵琼胶酶活力稳定在191U·mL-1左右.     

PHB高产菌株的选育和发酵条件研究

采用化学诱变剂(亚硝基胍)对积累聚β-羟基丁酸酯(PHB)的蜡状芽孢杆菌产生菌13进行诱变处理,筛选突变株,通过比较PHB产量,获得了两株高产菌株分别命名为蜡状芽孢杆菌13(3)和13(5),其PHB产量分别为29.58,29.29g/L,与出发菌株相比较,PHB产量提高了17.8%和16.6%.对出发菌株13和突变菌株13(3)的生长曲线和产PHB进程曲线进行了测定,在37℃培养条件下出发菌株13和突变菌株13(3)的PHB产量均在16h时达到最大.在32℃培养条件下出发菌株13培养80h和诱变菌13(3)培养60h时PHB产量达到最大,该突变株在37℃比在32℃培养时发酵周期缩短了73.3%,而PHB的积累量相当.正交实验结果表明,突变菌株13(3)产生PHB的最佳发酵条件为:碳源为葡萄糖、氮源为硫酸铵,碳氮比为2∶1时,pH值为7.5,培养温度为37℃,发酵周期为16h.     

培养条件对嗜酸乳杆菌发酵产亚油酸异构酶的影响

以1株经自然分离的嗜酸乳杆菌经化学诱变筛选得到的产亚油酸异构酶高产突变株(Lac.Nb1)为出发菌株,以亚油酸底物为诱导剂,考察了培养条件对其产亚油酸异构酶的影响,得到最佳发酵培养条件:菌龄15 h,接种量2%,温度37℃,初始pH 5.5,装液量80 mL(250 mL三角瓶),摇床转速100 r·min-1,经发酵培养条件优化后其产量比优化前提高了38.8%.     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究IV.原生质体融合技术在酵母育种上的应用

HU-KDF-lay菌株是通过原生质体融合并经筛选而获得的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae var, ellipsoideus H UK-1> aa, his一)与糖化酵一母(Saccharomyces dia-staticus, a, arg')的种间三倍体融合杂种.作者在实验室条件下刘一其发酵生物学进行比较研究后，在仙居酒厂对该融合杂种发酵不同淀粉质原料的适应性及其酒精产量作了生产规模的比较试验结采表明，种间融合杂种HU-KDF-185对番薯渣原料的酒精产量平均为30.77男，这比我国目前广为应用的酒精生产菌株K氏酵母(29.71 0o)和新市一号(29.54落)分别增产3.56%和4.16劣。在大米原料的发酵中，其酒精产量平均为35.38不，比大米酒精生产菌株M-85(32.87男)相对增产酒精7.64形，而番薯丝原料的酒精产量平均为30.20男，比生产菌株新市一号(28.70男)相对增产酒精5.23男.由此可见，种间融合杂种HU-KDF-ls5在不同类型的淀粉质原料的发酵中，其酒精增产效果显著而稳定，这也证明了我们通过原生质体融合技术所获得的种间融合杂种将是一株较优良的酒精高产菌株.同时也表明原生质体融台技术对酒精酵母的选育，特别是对那些在其生活周期中缺乏或失去有性过程的工业酵母更为有用.     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究——Ⅳ.原生质体融合技术在酵母育种上的应用

HU-KDF-185菌株是通过原生质体融合并经筛选而获得的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae var. ellipsoideus HUK-1,(1a,his~-)与糖化酵母(Saccharomyces diastaticus, a, arg~-)的种间三倍体融合杂种.作者在实验室条件下对其发酵生物学进行比较研究后,在仙居酒厂对该融合杂种发酵不同淀粉质原料的适应性及其酒精产量作了生产规模的比较试验。结果表明,种间融合杂种HU-KDF-185对番薯渣原料的酒精产量平均为30.77％,这比我国目前广为应用的酒精生产菌株K氏酵母(29.71％)和新市一号(29.54％)分别增产3.56％和4.16％;在大米原料的发酵中,其酒精产量平均为35.38％,比大米酒精生产菌株M-85(32.87％)相对增产酒精7.64％,而番薯丝原料的酒精产量平均为30.20％,比生产菌株新市一号(28.70％)相对增产酒精5.23％.由此可见,种间融合杂种HU-KDF-185在不同类型的淀粉质原料的发酵中,其酒精增产效果显著而稳定,这也证明了我们通过原生质体融合技术所获得的种间融合杂种将是一株较优良的酒精高产菌株.同时也表明原生质体融合技术对酒精酵母的选育,特别是对那些在其生活周期中缺乏或失去有性过程的工业酵母更为有用.     

解脂耶氏酵母W29产脂肪酶最佳条件

优化了解脂耶氏酵母W29的产酶条件,了解了解脂耶氏酵母W29的产酶能力。研究结果表明,该菌株产脂肪酶的最佳条件为:发酵温度30℃、起始pH 7.0、摇床转速150r.min-1、橄榄油含量7.0g.L-1、接种量2.5%、培养时间60h。在该条件下,解脂耶氏酵母W29所产脂肪酶的活性为7.7μ.mL-1。结果提示,解脂耶氏酵母W29在处理油脂废水时能产生较高活性的脂肪酶,可进一步实现废水处理的资源化利用。     

降解甘薯生淀粉黑曲霉菌株的选育及降解条件的初步研究

在酒精发酵中为了节能,国内外都在进行生淀粉糖化和酒精发酵试验.我们进行了降解生淀粉黑曲霉菌株的选育工作,通过自然选育和紫外线、氯化锂(LiCl)等诱变剂的诱变处理,选育出一株降解生淀粉能力强的As.54(u)菌株.1 材料和方法1.1 出发菌株:As、45(u)菌株.是从黑曲霉As、3、4309菌株的麸曲中自然选育而来.1.2 初筛培养基:用2%可溶性淀粉取代蔗糖,其余成份和含量同于察氏培养基,琼脂2%.1.3 活化单孢子悬液的制备:将单孢子液接入孢子活化培养基(即察氏培养基补加0.2%蛋白胨)中,30℃振荡(200r.p.m)培养12小时,即为活化的单孢子悬液.1.4 紫外线、氯化锂诱变处理:按常规方法.1.5 甘薯生淀粉糖化酶活力测定.     

特香型白酒大曲中酵母菌的筛选及产香性能

采用传统纯培养方法从秋季特香型白酒大曲中分离出40株酵母菌,对其菌落形态、细胞形态、子囊孢子进行观察分类,并结合26S rRNA分子学鉴定筛选出8株酵母菌,分别命名为阿萨丝孢酵母（Trichosporon asahii）NCUF 301.1、库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）NCUF 302.1、酿酒酵母（Saccharomyces cersvisiae）NCUF 303.1、异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）NCUF 304.1、戴尔凯氏有孢圆酵母（Torulaspora delbrueckii）NCUF 305.1、光滑假丝酵母（Candida glabrata）NCUF 306.1、粉状毕赤酵母（Millerozyma farinose）NCUF 307.1及异常毕赤酵母（Pichia anomala）NCUF 308.1。对这8株酵母菌发酵力、酯化力和挥发性代谢产物进行系统分析后发现S.cersvisiae NCUF 303.1发酵力(5.22 U·g-1)显著高于其它酵母菌,W.anomalus NCUF 304.1酯化力(60.00 U·g-1)和挥发性代谢产物含量(7.73 mg·kg-1)最高。本研究结果可为筛选具有高发酵性能的酿酒酵母及产香酵母用于实际酿酒生产提供理论依据。     

中性蛋白酶产生菌0031菌株的筛选及其产酶特性的初步探索

我们从9株水解圈比值(水解圈直径/菌落直径)较大的(一般在7以上)初筛株中,经摇瓶复筛,筛选出一株中性蛋白酶产生菌0031菌株.经初步观察其培养特征较接近于枯草芽孢杆菌(A.S.1398),但其发酵液在盘状电泳上的酶谱,有别于枯草芽孢杆菌,其产酶的摇瓶发酵培养基为:豆饼粉3%,玉米粉2%,麸皮3%,KH_2PO_40.03%,Na_2HPO_40.4%,pH 8.0(消毒前).在50 ml(每500 ml 三角烧瓶)的装量,旋转式摇床(转速220次/分偏距2.5cm)温度28℃的条件下发酵,经34—38小时,酶效价稳定在2000单位左右(测定反应温度30℃)最高效价可达2330单位.在该菌株的产酶特性的探索过程中,我们发现1.适当的加大通气量和提高 pH 能提高产酶量和缩短发酵周期,但美中不足的是酶高峰期较短促,较不利于在发酵过程中控制产酶高峰点.2.提高发酵温度(30℃以上)略有抑制产酶的趋势或有明显的酶高峰期推迟的现象.3.Zn~艹和 Ca~艹(试验浓度分别为 ZnSO_40.005%和 CaCl_2 0.3%)对产酶无促进作用.根据目前所表现的生产性能,0031筛选株是理想的,值得联系实际目的,进一步研究提高其产酶能力.     

气单胞菌几丁质酶的性质与发酵条件

从浙江省土样中分离出一株产几丁质酶的好氧菌,经鉴定该菌属于气单胞菌属(Aeromonas sp.),命名为CJ-5菌株.经研究发现,CJ-5菌产生的几丁质酶是一种诱导、分泌型酶,其产酶的最佳发酵条件为起始pH7.0,温度为30℃,几丁质底物质量浓度为2%～2.5%,培养基装量为三角烧瓶总体积的20%.在3 L发酵罐中进行了扩大培养,发酵液的最高几丁质酶活力为0.41 U·mL-1.该酶的酶促反应最适温度为36℃,最适pH为7.0.在进一步的研究中,还发现CJ-5菌株是一株产双酶的菌株,既产几丁质酶,又产壳聚糖酶.     

一株嗜温高效产氢细菌Clostridium sp.08-1的分离鉴定与产氢特征

从10L连续搅拌式罐式反应器(CSTR)中分离得到1株嗜温高效产氢菌株08-1.根据菌株的形态特征和16S rDNA序列结果分析,初步鉴定菌株08-1属于Clostridium sp..同时还进一步研究了温度、pH值控制、底物浓度和种类对菌株08-1产氢的影响.结果表明.该菌株更适合利用蔗糖或成分复杂的生物质木薯粉以及废弃物厨余垃圾生长及产氢,最适产氢温度为40℃,产氢系统pH值控制在5.5时获得最大产氢量.在间歇发酵中,蔗糖浓度为20 g/L,控制温度40℃,pH值5.5,搅拌速度100 r/min时实现最大产氢速率为245 mL·(L·h)~(-1),最大产氢量达到3.06 mol.该菌株在生物制氢中具有潜在的应用价值.     

甲壳素脱乙酰酶产生菌的筛选及产酶条件

采用固体平板培养和液体发酵筛选产生甲壳素脱乙酰酶的真菌,并且研究了产酶条件.结果显示在42株真菌中有26株有甲壳素脱乙酰酶活性,最终确定了构巢曲霉和蓝色犁头霉两株产酶活性较高的菌株,它们产生的酶活性分别是343U.mL-1和289U.mL-1.不同的菌株的产酶培养基中的碳源均为含乙酰基的碳源,最适氮源分别为酵母粉和蛋白胨,产酶能力都受Mn2 和Co2 促进,受Cu2 、Fe2 、Fe3 的抑制;构巢曲霉的最适温度、最适pH分别为29℃,7.0~7.5,蓝色犁头霉的最适温度、最适pH分别为31℃,6.5~7.0,最适发酵时间均为96h.     

产凝乳酶乳酸菌的筛选及其在鲜奶酪中的应用

实验以脱脂乳为原料, 从20株源于新疆传统酸奶的乳酸菌中筛选出3株高产凝乳酶的乳酸菌. 以凝乳活性最高的菌株组合为发酵剂, 通过单因素及响应面实验, 优化鲜奶酪发酵的接种量、发酵时间、后熟时间. 结果表明, 以植物乳杆菌RC5为发酵剂, 其最适发酵工艺为: 接种量5%, 38℃发酵时间14.5h, 4℃后熟时间60min. 在该条件下发酵成的鲜奶酪凝乳效果好, 色泽均匀, 奶味浓郁, 口感细腻, 为以乳酸菌产凝乳酶代替凝乳酶粉的研究和应用提供基础.     

耐热酵母菌株HU-TY-1的耐热机理初探

以酿酒酵母耐热菌株HU-TY-1和亲株LK为材料,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术,对它们在热休克应答前后的耐热性及蛋白图谱进行了分析,发现两个菌株经温和高温(37 ℃)诱导后可大幅提高对致死温度(53 ℃)的耐受力,同时伴随着分子量为72 kD和84 kD的热击蛋白(HSP)的合成,其中耐热株HU-TY-1在常态时就有这两种热击蛋白的少量表达.由此表明:耐热酵母菌株HU-TY-1的高耐热性与HSP72和HSP84的组成性合成密切相关.     

己酸菌的自然选育及其生物学特性的初步研究

从大曲酒窖池底泥中分离到一株产己酸量较高的菌株.经初步鉴定，应归于梭状芽抱杆菌属，很可能是克氏梭状芽抱杆菌( Clostridium kluyveri ).其最适生长温度35'C最适pH为7.。左右.最适酵母提取物浓度在生长时为100、产酸时为0.100，乙醇浓度在100-4%范围内对生长和产酸影响不大·在醋酸钠培养基中生长10天，己酸产量最高可达380mg/100m1.这一菌株的获得为白酒增香工艺的研究奠定了基础.     

座壳孢菌对烟粉虱致病力的研究

座壳孢属(Aschersonia)是粉虱和介壳虫的一类重要病原真菌,可用于世界性害虫烟粉虱(Bemisiatabaci)的生物防治.本文对来自世界各地的15株座壳孢菌进行了产孢、萌发性状比较,在此基础上筛选出11株产孢、萌发能力较好的菌株测定其对烟粉虱的致病力.菌株Aa5、Ag1、Aa8、Aa7、Aa2和Aa1均表现出高致病性(＞60%),此外本研究还发现菌株的致病力与其萌发率成明显正相关(r=0.86),而与产孢量不相关.