基因工程枯草杆菌生产中性蛋白酶的研究

使用一株基因工程枯草杆菌ＤＢ４０３（ｐＷＬ２６７）生产中性蛋白酶，其宿主ＤＢ４０３失去了野生菌株９９％的胞外蛋白酶生产能力，质粒ｐＷＬ２６７则带有野生菌株中性蛋白酶的全部结构基因。在分批培养中，中性蛋白酶的活性为２６２ｍｇ／ｍｉｎ·Ｌ左右，通过培养基改进达到３．２８６ｇ／ｍｉｎ·Ｌ。连续培养表明，中性蛋白酶的比生产速率在比生长速率为０．２ｈ￣（－１）时最大。在控制补加葡萄糖和其它培养基成分的补料分批培养中，中性蛋白酶活性达１７．６７０ｇ／ｍｍ·Ｌ。     

磁场影响枯草杆菌蛋白酶催化活性的研究

以DHT一酪蛋白为底物用分光光度法研究了磁场对枯草杆菌蛋白酶催化活性的影响。磁场分别作用于酶液,底物溶液均能不同程度地提高酶的催化活性,磁场作用时间和作用时的温度也对酶的催化活性有影响,磁场并不改变酶促反应的米氏常数Km,Vmax则有不同程度地增加。     

枯草杆菌蛋白酶水解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

采用改进的BAPNA法探讨了枯草杆菌蛋白酶对大豆胰蛋白酶抑制的水解作用,通过实验了最适反应条件为：反应温度40－60,PH值7．5－8．5,酶活力大于等于40000units/mL以及40min的反应时间。     

吸附树脂载体固定枯草杆菌蛋白酶的研究

以几种中性树脂和非极性树脂为载体,用先吸附,再以戊二醛溶液交联的方法固定枯草杆菌蛋白酶,考察了不同性质树脂作载体的固定化效果和最佳的固定化pH值,并比较了固定化前后酶的活性.     

吸附树脂载体固定枯草杆菌蛋白酶的研究

以几种中性树脂和非极性树脂为载体,用先吸附,再以戊二醛溶液交联的方法固定枯草杆菌蛋白酶,考察了不同性质树脂作载体的固定化效果和最佳的固定化pH值,并比较了固定化前后酶的活性。     

产中性蛋白酶的枯草杆菌478的发酵及其基本特性

枯草芽孢杆菌478是为生皮脱毛选育的一株中性蛋白酶产生茵。500 ml 摇瓶,装量50 ml 培养基,接种一小铲,31℃摇床培养40小时,产酶为5502 u/ml。BF—12—Ⅰ型罐发酵28小时,31℃产酶为5795 u/ml。酶的酪蛋白水解最适 PH 为7.0,活性范围为 PH 6.5～7.5,此间热稳定性较好,40℃两小时失活为12%。酪蛋白水解的最适温度为40～50℃。Fe ~(++)Hg~(++)与 Cu 对酶有抑制作用,Ca~(++)与 Mg~(++)则有激活作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析得到9条带。国内外一直沿用的硫化碱脱毛工艺对环境污染严重。酶法脱毛则是解决污染问题的可行途径。半个世纪以来人们对此作了积极的研究。然而,可用的产酶株仍是屈指可数,脱毛工艺的革新受到很大限制。为了推进酶法脱毛工艺向前发展,我们选育了脱毛效果较好的枯草芽孢杆菌478中性蛋白酶产生株。本文对该茵的发酵及其产生的中性蛋白酶的一些基木特性作一报导。     

枯草芽孢杆菌AS1.398中性蛋白酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

将编码枯草芽孢杆菌AS1.398 的中性蛋白酶功能区和包含前导区序列(“pro”序列)在内的全长基因克隆到酵母整合型质粒pPIC9K中,电转化His4 缺陷型巴斯德毕赤酵母SMD1168,通过MD-G418平板、PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDS-PAGE分析和酶活测定表明,枯草芽孢杆菌AS1.398的全长中性蛋白酶基因在毕赤酵母中获得了高效表达,表达产物分泌至培养基中,分子量约为43kD。经甲醇诱导培养后,发酵液中的中性蛋白酶活力达20000 U/mL。     

产蛋白酶菌株Bacillus subtilis GS-1发酵条件优化及蛋白酶水解应用初步研究

 利用Plackett-Burman (PB)试验和相应面优化方法对枯草杆菌GS-1菌株发酵产蛋白酶的条件进行优化,以期获得高活性的蛋白酶发酵液。同时,将发酵所产蛋白酶用于蛋白水解实验,以进一步考察蛋白酶的水解特性。首先,通过PB试验,筛选出3个影响菌株发酵过程中蛋白酶活力的主要因子(氯化铵、初始pH值及培养温度)。其次,通过响应面优化法,进一步探讨各参数之间的相互关系并最终拟合得出发酵产酶活的方程。结果表明,在氯化铵 (3.768 g/L), 初始pH (5.6) 以及培养温度 22.4 ℃的条件下,发酵液中蛋白酶的最高酶活力能达到372.814 U/mL。水解试验结果表明：相对于植物来源的蛋白,该蛋白酶粗提物对于动物来源的蛋白具有较大的水解偏好型。该蛋白酶粗提物对于由谷氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或精氨酸所组成的化学键有较强的水解偏好性。以上结果表明：该菌株发酵所产的蛋白酶在蛋白水解加工行业中具有潜在的开发应用价值。     

枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶在蟹壳几丁质上的固定化作用

1.蟹壳通过酸碱处理后,可制得白色的比较纯净的几丁质。2.用戊二醛把枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶共价结合到几丁质上,并探索了固定化条件。3.固定化的枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶和天然酶比较,最适温度向高温方向移动约3℃。最适pH基本上没有变化。底物为酪蛋白时的K_m值略变小。热稳定性和贮存稳定性明显增加,尤其在底物和Ca~存在条件下,这种稳定性更为加强。     

AS3．0事件机制研究

Flash技术发展到现在，不只局限于单纯的制作动画，而能通过ActionScript实现复杂、交互性强的功能，ActionScript3．0是全新的版本。具有与以往版本更先进的功能，特别是改良后的事件运行机制。     

枯草杆菌GMS7突变株肌苷发酵研究

以肌苷产生菌枯草杆菌7171—9—1为出发菌株,经物理、化学诱变剂连续处理,获得一株腺嘌呤营养缺陷型并对8—氮杂鸟嘌呤、磺胺胍、链霉素有三重抗性的突变株GMS7,在最佳摇瓶发酵条件下,平均产肌苷为21.35g/L,最高可达23.21g/L,比原菌提高了1.4倍。此外从形态学角度,跟踪观测了肌苷发酵过程中菌体形态的变化,并探讨了各种因素对发酵产苷的影响。     

枯草杆菌原生质体再生前后细胞壁的变化及其对酶渗透性的影响

报道了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BF—7658原生质体的制备、再生及其传代后的细胞的电镜观察;酶产量的变化;初步证明经原生质体再生所得到的α——淀粉酶高产菌株,同其细胞壁再生过程及细胞壁的渗透性有着密切关系.     

枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

利用PCR技术扩增得到来源于枯草芽孢杆菌的葡萄糖脱氢酶基因片段，并构建重组质粒pUC-T-GDH，然后将基因片段克隆于大肠杆菌表达载体pBV220中．得到表达质粒pBV-GDH．葡萄糖脱氢酶在含有表达质粒的基因工程菌株中得以诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳及薄层扫描结果表明，经诱导表达的葡萄糖脱氢酶约占基因工程菌株总蛋白的45％．葡萄糖脱氢酶活力测试表明，基因工程菌株无细胞抽提液中葡萄糖脱氢酶的活力为7.8U／毫克，约为对照组的30倍．实验结果初步说明，广泛应用于工业化生产的葡萄糖脱氢酶可以在基因工程菌株中得以大量表达并维持较高活力．     

枯草芽孢杆菌B29菌株对黄瓜植株的诱导抗性

对枯草芽孢杆菌B29菌株诱导黄瓜根系相关防御反应酶活性的变化趋势进行了研究,结果表明该菌株接种能够诱导黄瓜根系苯丙氨酸解胺酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）和过氧化物酶（POD）活性有不同程度的提高,尤其在挑战接种病原菌后,3种防御反应酶活性上升的幅度比单独接种要高,说明挑战接种有利于诱导抗性的表达。结合枯草芽孢杆菌B29菌株对黄瓜枯萎病的田间防效试验,可以说明诱导抗性是其生防作用机制之一。     

环状芽胞杆菌（Bacilluscirculans）的转化和中性蛋白酶基因的表达

用枯草芽胞杆菌质拉载体ｐＮＱ１２２和含有中性蛋白酶基因的重组质粒ｐＭＰＲ８转化环状芽胞杆菌Ｃ－２，转化频率为１．０×１０３转化子／μｇＤＮＡ．含有ｐＭＰＲ８的转化子能在酪蛋白平板上形成清晰的水解圈，其蛋白酶活性与相同质粒转化枯草杆菌ＤＢ１０４所得酶活性相近．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果证实了转化细胞中存在质粒ｐＮＱ１２２和ｐＭＰＲ８，两种质粒在该菌中的稳定性差别很大．     

一株产脱毛蛋白酶菌株（Bacillus sp.HX—318）的产酶发酵条件与特性研究

从自然界分离得到的产蛋白酶野生型芽孢杆菌菌株HX-318,其适宜的发酵培养基为(g/L)可溶性淀粉20.0,豆粉20.0,麸皮20.0,CaCO     

产耐热蛋白酶菌株的分离和酶性质的研究

从南汇县黄路乡一草堆下的土壤中分离到一株产耐热蛋白酶的链霉菌。该酶的最适反应温度为７０℃。在６０℃时稳定，当８０℃时处理１０ｍｉｎ，尚余８４％活性。在Ｃａ＾２＋存在的条件下，酶的热稳定性有显著提高。酶反应的最适ｐＨ为８．５，在ｐＨ５～９之间稳定，因此属于微碱性蛋白酶。通过抑制剂试验，该酶基本上被ＰＭＳＦ（苯甲基磺酰化合物）抑制，但不被金属螯合剂（ＥＤＴＡ，双吡啶）抑制。金属离子Ｃｕ＾２＋，Ｚｎ＾２     

黑曲霉HD－404酸性蛋白酶若干动力学性质的研究

研究金属离子、ＥＤＴＡ、表面活性剂、碘乙酸等对黑曲霉ＨＤ－４０４酸性蛋白酶活力的影响的结果表明：Ｃｕ２＋、Ｍｎ２＋对酶有明显的激活作用；Ｃｕ２＋、Ｍｎ２＋和Ａｌ３＋同时使用时，产生协同效应，显著提高酶活力；十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）、西湖高效洗洁剂对酶有明显的抑制作用；在以酪蛋白为底物时．ＡｇＮＯ３是酶的不可逆抑制剂．