高效液相色谱-质谱联用法分析3-氨基-9-乙基咔唑柱前衍生化壳寡糖

以3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethylcarbazole, AEC)为衍生化试剂对壳寡糖进行柱前衍生,壳寡糖(COS)的还原端与AEC的伯氨基反应生成烯胺,再被硼氢氰化钠(NaBH3CN)还原为二级胺。采用反相C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),乙腈和乙酸铵水溶液为流动相(pH 4.5),梯度洗脱,在254 nm波长处检测,建立了一套壳寡糖衍生物的高效液相色谱(HPLC)分离分析、电喷雾质谱(ESI-MS)及液相色谱-电喷雾质谱联用(LC-ESI-MS)的分析方法。该方法操作简单、灵敏度高、重复性好,在COS的组分分析、质量控制及构效关系研究方面有潜在的应用价值。     

柱前衍生-荧光检测-高效液相色谱-质谱法测定尿中游离多胺

用新型荧光试剂1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙基氯甲酸酯作为柱前衍生化试剂,在乙腈中,以pH 9的硼酸钠缓冲溶液为催化剂,40℃下衍生反应10 min后获得稳定的荧光产物.在Eclipse XDB-C8色谱柱上,通过梯度洗脱对5种多胺进行了分离和在线质谱定性.激发波长(λex)和发射波长(λem)分别为333 nm和390 nm.采用大气压化学电离源(APCI)正离子模式,实现了人尿中游离多胺的质谱定性及荧光定量测定.检出限(3S/N)在4.98～9.31 fmol.此方法应用于尿样中多胺的测定,并测得回收率在94%～98%之间.     

甲基原薯蓣皂苷静脉注射给予大鼠后体内代谢物的LC-MS~n分析

采用液相色谱-多级离子阱质谱法(LC-MSn)法,检测大鼠生物样本中的甲基原薯蓣皂苷(MPD)及其代谢产物,以推测MPD在大鼠体内的代谢途径。对大鼠静脉注射给予40 mg/kg的MPD,并收集尿液、血浆、胆汁和粪便等样本,经固相萃取(SPE)净化提取后,采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,以甲醇(B)-水(A)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min。采用正负离子检测。在生物样本中共检测到14个代谢产物。通过与对照品的色谱行为和多级质谱特征相比对,鉴定了其中6个代谢产物,分别为Protodioscin(M3),26-O-β-D-Glucopyrannosyl-(25R)-furan-5-ene-3β,22α,26-trihydroxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2 or 4)-β-D–glucopyranoside(M5),MPD(M0),Pseudoprotodioscin(M7),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside(M9),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside(M10)和Dioscin(M11)。根据已有对照品的质谱裂解规律,用LC-MSn法推测了另外5个代谢物。其中Protodioscin(PD)和Dioscin是两个主要的代谢产物,其对应的生成途径是MPD在大鼠体内的主要代谢途径。代谢反应总体以一相代谢为主,主要是水解脱糖,同时检出2个二相代谢产物;代谢物结构变化主要发生在糖上,母核均无明显变化。     

柱前衍生HPLC-MS法测定黑果枸杞果实中脂肪酸

采用柱前衍生荧光检测高效液相色谱-大气压化学电离源/质谱联用技术对黑果枸杞果实中的脂肪酸成分进行分析。经2-(11-H-苯-a-咔唑)乙基对甲苯磺酸酯荧光衍生试剂对脂肪酸进行柱前衍生,梯度洗脱分离,荧光检测,外标法定量和在线质谱鉴定,建立了同时测定20种脂肪酸含量的方法,并运用此方法对黑果枸杞果实中的脂肪酸进行了分析。结果表明。检测限可以达到0.42~1.84 ng/mL。黑果枸杞果实中主要含有不饱和脂肪酸,其含量约占整个脂肪酸总量的64%,其中不饱和脂肪酸种类主要是C18∶1(油酸),C18∶2(亚油酸)和少量的C18∶3(亚麻酸);饱和脂肪酸主要是以C16(棕榈酸),C18(硬脂酸),C20(花生酸)和C22(山嵛酸)为主,另外还含有少量的C12(月桂酸),C14(肉豆蔻酸),C17(珠光脂酸),C23(二十三酸)和C24(木蜡酸)。本研究可以为黑果枸杞在食品、医药和保健方面的进一步开发应用提供可靠的科学依据。     

柱前衍生化液相色谱-串联质谱法测定茶叶中草铵膦的残留量

建立了茶叶中草铵膦残留检测的液相色谱-串联质谱分析方法。样品经水超声提取,C18固相萃取小柱净化,9-芴基氯甲酸酯(FMOC-Cl)溶液在硼酸盐缓冲溶液下衍生2 h后,用Kinetex C18色谱柱分离,以乙腈和5 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.2%(v/v)甲酸)作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾负离子模式电离(ESI~),多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。方法的线性范围为2.5～50.0 μg/L,相关系数r2大于0.999;定量限为0.10 mg/kg。在不同基质中,草铵膦在0.10、0.50、1.00 mg/kg添加水平下的平均回收率为61.6%～81.4%,相对标准偏差为3.2%～8.4%。该方法具有快速简便、灵敏度高、准确性强等特点,适用于茶叶中草铵膦残留量的检测。     

柱前荧光衍生脂肪醇的高效液相色谱分离及质谱鉴定

利用新型荧光试剂1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙酸（BCAA）作为柱前衍生化试剂,以乙腈为溶剂,1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）环己碳二亚胺（EDAC）作为缩合剂,4-二甲氨基吡啶（DMAP）为催化剂,55℃下衍生反应25 min后获得稳定的荧光产物。在Eclipse XDB-C8色谱柱上,通过梯度洗脱对12种游离脂肪醇进行了分离和在线质谱定性。激发和发射波长分别为λex=333 nm,λem=390nm。采用大气压化学电离源（APCI）正离子模式,对洗发水（含十二烷基硫酸钠）中游离脂肪醇进行定性及测定。脂肪醇的线性回归相关系数大于0.9997,检出限在9.40-25.32 fmol。     

柱前荧光衍生-高效液相色谱法测定尿中雌二醇

建立了对硝基苯甲酰氯柱前荧光衍生 高效液相色谱法测定尿中 1 7α 和 1 7β 雌二醇的方法。尿样经盐酸水解、固相萃取柱浓缩、净化分离后 ,在无水条件下与对硝基苯甲酰氯反应生成荧光产物 ,再用高效液相色谱 荧光检测器测定。流动相为乙腈 水 (5 5∶45 )。线性范围为 7.0× 1 0 - 3～ 1 0mg L ,检出限均为 7.0× 1 0 - 3mg L,相对标准差分别为 0 .93 %～ 1 .5 %和 0 .88%～ 1 .3 %。平均回收率分别为 83 .5 %和 88.2 %。     

柱前衍生-高效液相色谱分离测定及质谱鉴定脂肪胺

采用新型荧光衍生试剂2-(2-苯基-1-氢-菲[9,10-d]咪唑)-乙酸(PPIA)进行柱前衍生,经荧光检测实现了脂肪胺的高效液相色谱(HPLC)分离测定及柱后质谱鉴定。60℃下在乙腈溶剂中用N-乙基-N′-[(3-二甲氨基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)做缩合剂,衍生反应15min可获得稳定的荧光产物。脂肪胺衍生物荧光检测波长为380nm(激发波长为260nm)。在EclipseXDB-C8色谱柱上,采用梯度洗脱对12种脂肪胺衍生物进行了优化分离,测定了造纸厂废水、大鼠端脑和酸奶中脂肪胺的含量。经柱后在线质谱大气压化学电离源(APCISource)正离子模式实现了各种脂肪胺衍生物的质谱鉴定,借助对活性中间体的质谱解析确定了衍生反应的反应机理。该方法具有良好的重现性和回收率,多数脂肪胺的线性回归系数大于0.9996;检出限为3.1~18fmol(S/N=3∶1)。     

柱前衍生高效液相色谱-质谱法测定水稻中尼克烟酰胺含量

建立了柱前衍生高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)测定水稻中尼克烟酰胺含量的方法.样品中尼克烟酰胺经水提取后,与9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC-Cl)衍生,采用液相色谱质谱联用仪测定.系统研究了衍生剂浓度和衍生介质等条件对衍生效率的影响.通过优化流动相酸度和梯度洗脱等条件,提高了方法灵敏度.尼克烟酰胺在0.1～5.0 mg/L范围内呈良好的线性关系(r=0.9983),对水稻的根、茎、叶及大米的标准加入实验表明,方法的添加回收率在72.0%～89.2%之间; 相对标准偏差为2.3%～9.6%; 方法检出限为0.05 mg/kg.方法简便、准确可靠,可以满足水稻中生理水平尼克烟酰胺的定性定量分析.     

高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法研究人尿中毛果芸香碱代谢产物

本文采用高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法对人口服毛果芸香碱后的尿样的代谢产物进行了研究.     

尿液中1,3-丁二烯代谢产物的液相色谱-串联质谱法检测

建立了人体尿液中1,3-丁二烯的代谢产物--丁烯醇巯基尿酸(MHBMA)和丁烯二醇巯基尿酸(DHBMA)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法.以DHBMA-D7、MHBMA-D6作内标,尿液酸化离心后采用反相固相萃取柱Isolute ENV+净化和富集.分析样品以无水甲醇和pH 2.5的0.1%甲酸水溶液为流动相,经Agilent Extend C18柱梯度洗脱,流速1 mL/min,柱后以三通分流,分流比约为3:1,柱温40 ℃.在多离子监测模式下进行定性和定量分析,采用负离子扫描模式.2种代谢物的精密度为1.02% ～7.79%,回收率为97% ～112%.用该方法同时测定了吸烟者和非吸烟者尿液中2种代谢物的平均质量浓度,结果表明,对于抽吸相同品牌相同支数的卷烟的吸烟者,由于吸烟行为和代谢途径不同,其尿中DHBMA和MHBMA的质量浓度存在着较大差异,而对于吸烟者尿液,其DHBMA、MHBMA的质量浓度分别是非吸烟者的5.1倍和9.1倍.因此,DHBMA和MHBMA有可能作为人体尿液中鉴别吸烟者和非吸烟者的生物标记物.     

Analysis of Anisodine and Identification of Twenty of Its Metabolites in Rat Urine by Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry

A simple and rapid high-performance liquid chromatographic-electrospray ionization (ESI) tandem mass spectrometric method has been developed for elucidation of the structures of the metabolites of anisodine in rat urine after administration of a single dose (20 mg). Different extraction techniques (free fraction, acid hydrolysis, and enzyme hydrolysis) were compared for investigation of the metabolism of anisodine. After extraction the pretreated samples were injected into a reversed-phase C₁₈ column with 60:40 (v/v) methanol–0.01% triethylamine solution (2 mM, adjusted to pH 3.5 with formic acid) as mobile phase. Detection was by on-line MS-MS. Identification of the metabolites and elucidation of their structure were performed by comparing changes in molecular masses (ΔM), retention-times, and spectral patterns of product ions with those of the parent drug. At least twenty metabolites (norscopine, scopine, α-hydroxytropic acid, aponoranisodine, apoanisodine, noranisodine, anisodine N-oxide, hydroxyanisodine, hydroxyanisodine N-oxide, methoxyanisodine, hydroxymethoxyanisodine, trihydroxyanisodine, dihydroxymethoxyanisodine, hydroxydimethoxyanisodine, glucuronide conjugates, and sulfate conjugates of noranisodine, hydroxyanisodine and the parent drug) and the parent drug were found in the urine after ingestion of 20 mg anisodine by healthy rats. Anisodine N-oxide, hydroxyanisodine, and the parent drug were detected in rat urine for up 120 h after ingestion of the drug.     

人体毛发中氯胺酮及其代谢物的超高效液相色谱-串联质谱法检验及含量统计分析

建立了一种高动能研磨结合超高效液相色谱－串联质谱（UPLC－MS/MS）快速检验毛发中氯胺酮及其代谢物的方法,并考察了清洗程序和提取方法对氯胺酮及其代谢物检出效果的影响。确定最佳实验方法为：50 mg头发经0.1%十二烷基硫酸钠、超纯水和丙酮清洗2次后取20 mg置于专用研磨管内,加入1 mL甲醇,使用球磨仪以3 000 r/min研磨3 min,超声2 h,离心过膜进样。结果显示：毛发中氯胺酮、去甲氯胺酮和羟基去甲氯胺酮含量分别在0.01～5.0、0.01～5.0、0.05～5.0 ng/mg范围内线性关系良好,相关系数（r）均大于0.99,回收率为86.7%～106%,基质效应为88.1%～99.6%,日内及日间精密度分别为0.72%～4.1%和1.9%～6.3%。采用该方法检测了50份实际毛发样本,并对氯胺酮、去甲氯胺酮和羟基去甲氯胺酮在阳性毛发中的含量数据进行统计,分析了毛发中氯胺酮及其两种主要代谢物的含量分布情况及原药与代谢物的含量关系,50份真实毛发样本中氯胺酮的最低含量为0.30 ng/mg,羟基去甲氯胺酮与氯胺酮的含量相近且去甲氯胺酮与氯胺酮之间的含量比率为0.05～0.60。该研究结果可为禁毒人员处理涉毒案件提供理论支撑与方法参考。     

高效液相色谱-质谱联用技术同时测定人体尿液中11种代谢物

采用高效液相色谱-质谱联用技术定量检测人体尿样中丙烯醛、苯、1,3-丁二烯、苯乙烯、巴豆醛的巯基尿酸类代谢物及氰化氢代谢物。将解冻后的尿样经高速离心后,取100μL上清液,加入50μL内标溶液及850μL水后上样分析。色谱分析采用XSELECT HSS T3 C18色谱柱(150 mm×2.1 mm i.d,2.5μm),以乙腈-15 mmol醋酸铵溶液梯度洗脱,流速250μL/min,柱温40℃,在多反应监测模式(MRM)下采用负离子扫描模式进行定量分析。本方法共检测了16名吸烟者和6名非吸烟者的尿样,发现日吸烟量大于25支的吸烟者尿样中的烟气成分代谢物浓度高于非吸烟者。     

固相萃取-液相色谱-串联质谱法同时测定尿液中9种多环芳烃代谢物

建立了固相萃取-液相色谱-串联质谱同时测定尿中2-羟基萘、1-羟基萘、2-羟基芴、3-羟基菲、1-羟基芘等9种多环芳烃代谢物的液相色谱-串联质谱测定方法。尿样中结合态的多环芳烃代谢物在β-葡萄糖苷酸酶-芳基硫酸酯酶缓冲液(pH 5.0)作用下,于37℃水浴中避光水解4 h后,以C18固相萃取小柱富集、净化,以甲醇洗脱,采用Waters Symmetry C18色谱柱,流动相为乙腈-0.2%氨水(72∶27,V/V)等度淋洗分离后进入质谱测定。在喷雾电压4 kV,毛细管温度300℃下,以3-羟基菲13C为内标,采用SRM模式负离子扫描方式测定,内标法定量。9种多环芳烃代谢物在尿中的线性范围为0.90～100μg/L;相关系数为0.9970～0.9990;回收率为79.0%～119.8%;相对标准偏差为4.3%～12.4%;检出限为0.04～0.90μg/L;结果表明,本方法可用于尿中9种多环芳烃代谢物的测定。     

Analysis of Arecoline in Rat Urine, and Identification of its Metabolites, by Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry

A simple and rapid high-performance liquid chromatographic–electrospray ionization (ESI) tandem mass spectrometric method has been developed for elucidation of the structures of the metabolites of arecoline in rat urine after administration of a single dose (20 mg kg^?1). The urine samples were purified on a C₁₈ solid-phase extraction cartridge and analysis was then performed on a reversed-phase C₁₈ column with 60:40 (v/v) methanol–0.01% triethylamine solution (2 mmol L^?1, adjusted to pH 3.5 with formic acid) as mobile phase and detection by on-line MS–MS. Identification of the metabolites and elucidation of their structures were performed by comparing molecular masses (ΔM), retention-times, and product ion spectra with those of the parent drug. The parent drug arecoline, four phase-I metabolites, and one phase-II metabolite were identified in rat urine.     

液质联用检测人体血浆中的阿奇霉素

采用高效液相色谱串联质谱技术(HPLC-MS/MS)测定人体血浆中阿奇霉素的浓度. 选用Lichrospher CN 柱, 流动相为V(乙腈)∶V(水)=40∶60(水中含体积分数为0.1%的甲酸和质量分数为0.1%的醋酸铵), 电喷雾离子源正离子方式检测. 该方法在2.34~600 ng/mL范围内线性关系良好, 定量下限为2.34 ng/mL(S/N>10), 回收率94.13%~97.42%, 基质效应92.50%~107.87%, 日内和日间测定药物浓度的相对标准偏差(RSD)均小于10.0%. 用该方法测定了24名男性健康志愿者单剂量口服500 mg阿奇霉素试剂和参比制剂于192 h内的血药浓度, 并进行了生物等效性研究.     

Detection of Stanozolol and Its Major Metabolites in Human Urine by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

The determination of stanozolol and its metabolites in human urine has been of particular interest in sports drug testing due to its frequently revealed misuse. A simple and rapid sample preparation procedure based on consecutive solid-phase and liquid–liquid extraction with subsequent re-extraction followed by liquid chromatography and electrospray ionization tandem mass spectrometry was established. It allowed the determination of stanozolol and its metabolic products 16β-OH-stanozolol and 4β-OH-stanozolol in human urine at detection limits of 0.1, 0.2 and 0.2 ng mL⁻¹, respectively, with recoveries ranging from 5 to 38%. The robust nature of the assay and the efficient removal of interfering biological matrix provides excellent signal-to-noise ratios, and, thus, a rapid alternative to established procedures utilizing multiple solid-phase extraction or immunoaffinity chromatography strategies. More than 15 doping control urine specimens tested positive for stanozolol during the last 12 months have been confirmed using the described approach.     

液相色谱/串联质谱法测定芹菜中甲拌磷及其代谢物残留

建立了芹菜中甲拌磷及其代谢物(甲拌磷亚砜和甲拌磷砜)残留的液相色谱/串联质谱检测方法。样品以乙腈提取,采用电喷雾正离子源(ESI+)和多重反应监测(MRM)模式测定,基质匹配标准曲线定量。结果表明:芹菜基质中甲拌磷、甲拌磷亚砜和甲拌磷砜在0.01~0.1mg/L范围内线性关系均较好(r0.995),方法检出限和定量限分别为0.42~1.10μg/kg和1.4~3.6μg/kg;在5、50和100μg/kg三个添加水平下,甲拌磷、甲拌磷亚砜和甲拌磷砜的回收率为71.9%~90.2%,相对标准偏差为5.8%~9.9%。该法简单、准确、快速、灵敏,符合法规残留限量监测要求。