离线二维反相液相色谱/超临界流体色谱在瓜蒌子分离中的应用

发展了离线二维反相液相色谱/超临界流体色谱(2D RPLC/SFC)分离瓜蒌子的方法。实验在第一维采用反相色谱,按色谱峰收集从瓜蒌子样品中制备得到的12个组分(F_1~F_(12)),并将得到的组分在第二维使用SFC分离。这些组分在RPLC和SFC的分离对比说明,该二维方法具有良好的分离正交性,可至少检测到150个色谱峰,对于解决结构相似物质的分离、微量成分的富集表现出了明显的优势。SFC方法采用了乙醇-正己烷(3∶7,v/v)的混合溶剂作为改性剂,既提供了适当的洗脱能力,也保证了在上样量增加时满足样品溶解的要求。此二维分离体系可放大到制备水平用于化合物的制备,为瓜蒌子化学成分的纯化制备提供技术支持,为其物质基础研究提供参考。     

高温二维液相色谱系统的构建及其评价

在二维液相色谱中, 第二维的分离速度是制约其发展的重要因素. 升高色谱柱温度可以有效降低流动相粘度, 加快溶质在两相间的传质速率, 有效加快分析速度. 以离子交换色谱法(WAX)为第一维分离模式和反相色谱法(RP)为第二维分离模式, 十通阀和两个捕集柱为接口, 通过将第二维色谱柱温度升高到80 ℃和提高流量到3 mL/min, 构建了高温WAX/RP二维液相色谱系统. 以4种标准蛋白的酶解物为样品评价系统的分离性能, 第一维共有33个馏分被捕集并导入到第二维分析, 高温二维液相色谱系统识别出187个色谱峰.     

反相高效液相色谱分离黄酮类化合物的研究

根据18种黄酮类化合物在C_3、C_(18)和CN三种固定相上的梯度洗脱反相高效液相色谱分离的研究,建立了一种连续快速分离植物提取物中黄酮类化合物的方法。此法可在55 min内完成一个样品的分离及柱平衡。最佳波长和温度分别是280nm和35℃。     

亲水/反相二维制备液相色谱法分离纯化络石藤中的化学成分

建立了亲水/反相二维制备液相色谱(Pre-2D-HILIC/RPLC)分离纯化络石藤中化学成分的分析方法。络石藤药材经醇提、活性炭脱色后用反相固相萃取柱除去色素和强极性物质,最终得到干燥的浅黄色粉末。一维亲水色谱选择Click XIon色谱柱(250 mm×20 mm,10μm)作为固定相,水和乙腈作为流动相,进行梯度洗脱,以紫外触发模式收集馏分,共得到15个组分。二维反相色谱选择C18色谱柱(250 mm×20 mm,5μm)作为固定相,水和乙腈作为流动相,进行梯度洗脱,最终得到14个高纯度化合物,并通过质谱和核磁共振对其进行确认。实验结果表明,该法具有良好的正交选择性,可以有效提高分离度和峰容量,对于分离络石藤等复杂样品具有重要意义。     

六昧地黄丸组分的二维液相色谱分离

以1个常规六通阀直接连接两支常规尺寸的色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.),构建简单的SCX/RP在线二维液相色谱系统,对中成药六味地黄丸组分进行了优化分离.样品经过第一维阳离子交换色谱(Hypersil SCX),洗脱产物分离后通过六通阀直接富集到反相分析柱(C18)顶端,被转移到第二维色谱柱上继续进行分离.经过11步不连续的线性梯度洗脱,二维分离系统出峰数量达到550多个,峰容量达到2266.构建的二维液相色谱系统结构简单,与一维色谱相比,具有分辨率高、峰容量大的特点.     

六味地黄丸组分的二维液相色谱分离

以1个常规六通阀直接连接两支常规尺寸的色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.),构建简单的SCX/RP在线二维液相色谱系统,对中成药六味地黄丸组分进行了优化分离。样品经过第一维阳离子交换色谱(Hypersil SCX),洗脱产物分离后通过六通阀直接富集到反相分析柱(C18)顶端,被转移到第二维色谱柱上继续进行分离。经过11步不连续的线性梯度洗脱,二维分离系统出峰数量达到550多个,峰容量达到2266。构建的二维液相色谱系统结构简单,与一维色谱相比,具有分辨率高、峰容量大的特点。     

二维液相色谱接口技术

二维液相色谱具有峰容量大、分辨率高、分析速度快等优点,已经成为复杂样品分离分析的重要工具。两种分离模式的转换通常需要经过一个特殊接口来完成,接口是二维液相色谱系统的核心,也是限制二维液相色谱应用的瓶颈;两种流动相不互溶时,接口尤为重要。本文针对二维液相色谱接口技术近期的发展和应用进行总结。引用文献51篇。     

反相液相色谱中同族化合物作用指数的预测

基于气相色谱与液相色谱的内在联系，首次讨论了用气相色谱保留值预测两元冲洗体系反相液相色谱作用指数的方法，该方法经文献数据验证，其预测结果达到了实验精度，这为扩大反相液相色谱的作用指数库提供了一个实用的方法。     

二维反相液相色谱制备五味子中的木脂素

应用自主研发的具有分离-富集模式的制备色谱工厂,建立了分离制备五味子木脂素有效部位及其单体化合物的方法。该方法首先以C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）为色谱柱,水和甲醇为流动相,分离度和保留时间为考察指标,采集4个不同梯度的色谱信息,通过XTool色谱专家系统软件模拟,确定五味子木脂素第一、二维色谱条件;然后采用线性放大的方法,以C₁₈（250 mm×30 mm,10 μm）为第一、二维分离柱,C₁₈（80 mm×30 mm,10 μm）为富集柱,水为富集稀释液,对五味子木脂素进行二维色谱分离纯化;最后第一维分离得到9个可重复组分,第二维分离得到20个高纯度化合物,其中有6个单体化合物。结果表明该法重现性良好,可以实现五味子木脂素的系统性分离,对五味子化学成分的研究具有重要意义。     

反相/亲水色谱法分析糖苷类化合物

根据皂苷、黄酮苷等糖苷类化合物的结构特点,采用亲水色谱模式分析该类化合物,以弥补反相色谱模式分离结构类似糖苷类化合物选择性的不足。首先选择14个糖苷类化合物,比较了反相色谱柱(XAqua C18)和亲水色谱柱(Click XIon)的分离效果,评价了反相/亲水色谱的正交性,并构建了反相/亲水二维体系用于西洋参样品的分离。结果表明,糖苷类化合物在反相及亲水色谱柱上均有很好的保留,但两者具有不同的分离选择性,14种物质在反相和亲水柱的出峰顺序有较大差异,在反相色谱中不易分离的人参皂苷Rg1和Re在亲水色谱柱可获得很好的分离,反相/亲水模式分离糖苷化合物具有很好的正交性。以构建的RPLC/HILIC二维色谱体系分离西洋参样品,有效地提高了分离能力及峰容量,有利于后续更多极性及微量化合物的制备、结构表征与活性研究,且该方法操作简便、流动相兼容性好,可作为糖苷分离分析、制备的有效手段,也可以为其他中药复杂体系的分析提供参考。     

Quantification of Retinoid Compounds by Supercritical Fluid Chromatography Coupled to Ultraviolet Diode Array Detection

Liposoluble vitamins are widely analyzed due to their significant antioxidant activity. Quantification by liquid or gas chromatography is often time consuming and requires sample treatments prior to the analysis. Supercritical fluid chromatography (SFC), especially with the developments of new commercial systems, is nowadays considered as a credible alternative to standard chromatography. It provides a reduced acquisition time as well as sensitivity similar to that of liquid chromatography. To illustrate the new capabilities of SFC, six organic compounds related to the vitamin A family, all-trans-retinal, all-trans-retinol, all-trans-retinoic acid, retinyl propionate, retinyl acetate, and all-trans-retinyl palmitate, were analyzed and quantified. The choice of the column chemistry, co-solvent, the linearity and reproducibility of the method, and the matrix effect are discussed in detail. Best separation was finally obtained using a diphenyl column, with an excellent linearity over three orders of magnitude and limits of quantification in the low picomole range. Finally, the method was used for the quantification of retinyl palmitate in a pharmaceutical product with minimal sample preparation.     

固相萃取-亲水相互作用液相色谱法同时测定环境水样中3种酰胺类化合物

基于亲水相互作用液相色谱(Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography,HILIC)技术,建立了同时测定环境水样中丙烯酰胺、N,N-二甲基甲酰胺和N,N-二甲基乙酰胺的液相色谱分析方法.水样采用石墨化碳黑固相萃取柱净化,上样1.0 mL,并最终用1.0 mL乙腈洗脱,洗脱液进样色谱分析.选择Waters HILIC色谱柱,以乙腈/水作为流动相,等度洗脱,二极管阵列检测器200 nm条件下检测.在优化的分析条件下,3种酰胺类化合物在11 min内实现基线分离.所有目标化合物浓度在0.05～ 100 mg/L范围内线性良好,相关系数均大于0.9999;检出限达0.01 mg/L.加标回收率为84.1％～106％;相对标准偏差1.8％～10.4％.本方法具有简便快捷、灵敏准确等特点,能够满足环境水样中痕量酰胺类污染物检测的要求.     

反相高效液相色谱法测定蜂胶水提物中的酚类化合物

建立了同时测定中国蜂胶水提物中23种酚类化合物的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析方法.采用ZORBAX Eclipse XDB C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm×5 μm);流动相:甲醇-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长为256和280 nm,进样量20 μL,柱温35 ℃.各对照品质量浓度与色谱峰面积线性关系良好,具有较好的精确度和重现性,标准加入回收率在93.29%～106.61%之间.采用此法,从河北蜂胶中检测出18种对照品,其中表儿茶素含量最高35.50 mg/g WEP,其次是3,4-二甲氨肉桂酸15.41 mg/g WEP.而云南蜂胶中检测到9种对照品,表儿茶素含量最高11.23 mg/g WEP,其次是白杨素3.61 mg/g WEP,两地蜂胶WEP的HPLC图相似度分别为0.099(256 nm) 和0.194(280 nm),化学成分差异明显.     

反相离子对色谱/蒸发光散射检测器分离唑来膦酸及其有关物质

采用反相离子对高效液相色谱／蒸发光散射检测法研究了唑来膦酸及其有关物质的色谱分析与分离方法。优化了色谱条件，固定相为Hypersil C8柱，以含10 mmol／L正戊胺的5mmol／L乙酸铵缓冲液（用乙酸调节pH至7．0）-甲醇（体积比为97：3）为流动相，流速为1．0mL/min，蒸发光散射检测器检测。在该色谱条件下，唑来膦酸与其有关化合物（包括合成过程中残余的原料咪唑乙酸及分解产物亚磷酸、磷酸盐）的分离良好，唑来膦酸色谱峰与最近杂质峰的分离度大于1．5。本法简便快速，为唑来膦酸的常规分析提供了有效可靠的方法。     

Isocratic Separation of Some Food Additives by Reversed Phase Liquid Chromatography

In recent years, concern about food safety has been growing. The use of food additives in different countries is limited by specific regulations. Therefore, analytical methods that simultaneously determine artificial sweeteners and preservatives are advantageous. High performance liquid chromatography has been the most popular choice for the determination of food additives. In this study, reversed-phase liquid chromatography was developed for the separation of α-aspartame, sodium saccharin, acesulfame-K, vanillin, sorbic acid and benzoic acid. The effects of the proportion of the organic modifier on the chromatographic separation were investigated in order to separate these additives. The results showed that optimum chromatographic separation for these compounds takes place when the acetonitrile content in the mobile phase was 15% containing ammonium acetate buffer (0.005 M). It was concluded that the best separation was obtained with YMC-ODS pack column by using this mobile phase at pH 4.0. All additives were separated within 40 min. The RP-HPLC-UV method was validated in terms of LOD/LOQ, linearity, recovery and repeatability. This method was used for the determination of α-aspartame, acesulfame-K and benzoic acid in cola and instant powder drinks.     

反相高效液相色谱法分离蛋白质的研究

采用反相高效液相色谱法考察了几种大孔硅胶烷基键合固定相在等度淋洗条件下进行蛋白质分离的色谱性能。研究了冲洗剂中有机溶剂异丙醇的浓度、离子对酸（ＴＦＡ）浓度对蛋白质保留时间的影响。探讨了蛋白质在ＲＰ－ＨＰＬＣ中的保留机理。结果表明,大孔硅胶（２０～３０ｎｍ）短链（Ｃ４和Ｃ８）烷基键合固定相适合蛋白质的分离。     

反相高效液相色谱法分离测定酪胺

建立了分离酪胺与酪氨酸及其它杂质的反相键合相高效液相色谱法 ,讨论了流动相添加剂对色谱分离的影响和离子相互作用的分离机理。在 C8烷基键合相分离柱上 ,以含 Tris-高氯酸盐 ( 2 0 mmol/L Tris,用 HCl O4调节 p H为 7.9,并添加 KCl O4,使总高氯酸盐浓度为 30 mmol/L )的甲醇 -水溶液 (体积比为 4 0∶ 60 )作为流动相 ,以对甲苯磺酰胺为内标物 ,测定了 p-酪氨酸脱羧工艺产物——酪胺的质量分数。酪胺样品质量分数测定的准确度和重现性数据为 ( 96.4 0± 0 .633) ( n=11,RSD=0 .66 ) ,加样回收率为 99.33～ 10 0 .38。方法可用于工艺条件的选择和酪胺产品质量的检测     

反相键合相高效液相色谱法分离测定萘普生

建立了分离测定萘普生和溴代萘普生的反相键合相高效液相色谱法。采用ＯＤＳ柱，以添加５０ｍｍｏｌ／Ｌ乳酸并用高氯酸调节ｐＨ为２．５的８０％甲醇－水溶液作为流动相，以苯甲酸为内标物，测定了不对称合成工艺产物中萘普生和溴代萘普生的含量。方法的准确度分别为９９．８３％～１０２．０７％（萘普生）和９９．０％～１００．８３％（溴代萘普生），相对标准偏差分别小于２．５８％（萘普生）和３．６４％（溴代萘普生）。方法可用于工艺条件的选择和质量检测。     

高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱法测定红葡萄酒中酚类物质

建立了高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术检测葡萄酒中酚类物质的方法,并评价其定量分析的准确性、线性、重复性和检出限,结果显示:16种酚类物质除芦丁和白藜芦醇糖苷外,平均加标回收率大于78%;相关系数R2>0.999,线性关系良好;保留时间和峰面积在日内(n=10)与日间(n=6)重复性的相对标准偏差(RSD)均分别低于2.0%和5.0%;检出限为0.05~1.0 mg/L。利用该方法对6个红葡萄酒中16种酚类物质进行了定性定量分析,其相对标准偏差(CV%)均小于5.0%,说明本方法简便、准确、灵敏、重现性好,可用于葡萄酒产品质量监控。