黑色素对流感病毒诱导细胞凋亡的抑制效应

用荧光染色技术及流式细胞仪分析方法研究了 Ａ１／京防８６１ 和 Ｂ／沪防９３１ 两株流感病毒感染与细胞凋亡的关系,探讨利用嗜麦芽假单胞菌黑色素抑制流感病毒诱导 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞凋亡的可能性 结果显示：黑色素在 １００ ｍ ｇ· Ｌ－ １ 浓度范围内,对 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞无细胞毒性; Ａ１／京防 ８６１ 和 Ｂ／沪防 ９３１ 两株流感病毒均可诱导 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ细胞凋亡,但二者存在毒力差异（ｐ＜ ０．０５）病毒感染１２ ｈ 后,荧光染色可观察到典型的凋亡核形态,流式细胞仪则可检测到病毒诱导 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞产生的凋亡峰,且细胞凋亡率分别为３７．０２％ 和 ２７２９％ ;２０ ｍ ｇ· Ｌ－ １ 的黑色素可有效抑制两株流感病毒诱导细胞凋亡,使细胞凋亡指数从２５％ ～３５％ 降至３％ 以下 结果表明,黑色素可以抑制 Ａ 和 Ｂ型流感病毒诱导细胞凋亡     

一种具高活性的酪氨酸酶基因启动子片段的分离

利用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体,经ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ完全消化后与ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ部分消化的嗜麦芽假单胞菌染色休ＤＮＡ进行体外连接,转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞,在含氨苄青霉素（Ａｐ）和氯霉素（Ｃｍ）的选择平板上筛选转化子．从随机挑选的５４株转化子中,获得一株抗氯霉素水平达１０００ｍｇ／Ｌ的转化子Ｅ．ｃｏｌｉＰＡＳＩ,所含重组质粒被命名为ｐＡＳＩ．经限制性酶切分析和杂交分析表明,ｐＡＳＩ质粒上插入了一段来源于嗜麦芽假单胞菌染色体的ＤＮＡ片段,其大小为１．４ｋｂ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明转化子Ｅ．ｃｏｌｉＰＡＳＩ在含Ｃｍ的培养基上,额外表达了一条２２×１０３的ＣＡＴ蛋白质带．将重组质粒ｐＷＳＹ上的嗜麦芽假单胞菌ｍｅｌ基因亚克隆到ｐＡＳＩ上１．４ｋｂ启动子功能片段下游,构建成Ｅ．ｃｏｌｉＡＷＳ工程菌株,使黑色素产率提高了７０．６％．     

陶瓷载体固定化酵母细胞的研究

本文探讨了一种新型载体——多孔陶瓷用于啤酒酵母固定化快速酿造啤酒试验,研究了外扩散效应对反应速度的影响,并分别用陶瓷载体和海藻酸钙载体固定化酵母进行了发酵动态对比试验。结果表明,陶瓷载体固定化酵母密度达3.0×10~4个/g载体,前酵周期缩短为12 h;反应速度随流速的增     

黑色素对λ溶原菌及其紫外线诱导性的影响

利用嗜麦芽假单胞菌135制备的L-多巴黑色素对溶原菌E.coli(λ )及其紫外线诱导性的影响进行了研究,结果表明:这种黑色素对该溶原菌的生长无影响,也不诱导形成λ噬菌体颗粒,但对该溶原菌的紫外线致死作用具有保护效应,0.9 g/L黑色素的保护效应近似于100% ;黑色素对溶原菌的紫外线诱导性有抑制效应或增强效应,0.3 g/L黑色素对溶原菌的紫外线诱导性的抑制效应最好.     

5株细菌产L-多巴黑色素的比较研究

对5株细菌所产黑色素的物理和化学性质及发酵进行了比较研究。结果表明：尽管这些不同来源的黑色素在理化性质上存在一定差异，但它们的基本框架结构及主要基团是一致的，且在发酵过程中都检测到L-多巴，说明它们都属于多巴类黑色素；不同菌株在同一条件下和同一菌株在不同条件下发酵黑色素的产量差别很大。其中WS和H2的黑色素产量可分别达到1720mg／L和1040mg／L，有进一步开发成为工业发酵生产黑色素应用菌株的潜力。     

PVA包埋产延胡索酸酶的黄色短杆菌的固定化研究

研究了用聚乙烯醇包埋黄色短黄杆菌的固定化成技术。最佳的方法是ＰＶＡ３ｇ，海藻酸钠１ｇ，黄色短杆杆菌湿细胞１４ｇ，总体积为１００ｍＬ，制成直径为４ｍｍ的小珠。比较了ＰＶＡ包埋和卡拉胶包埋黄色短杆菌固定化细胞的延胡索酸酶活力和回收率，以及最适Ｐｈ和最适温度。     

固定化假单胞菌产L-多巴

选择海藻酸钙和聚乙烯醇凝胶为固定化载体包埋假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．），以提高该菌以Ｌ－酪氨酸为底物生产Ｌ－多巴的效率．海藻酸钙和聚乙烯醇固定的假单胞菌分别将发酵周期缩短了８和１４ｈ．半连续发酵的结果表明，海藻酸钙和聚乙烯醇固定化细胞分别能重复使用５次和１４次，Ｌ－多巴生产效率比游离细胞分别提高了１６％和１６０％．聚乙烯醇固定化细胞经过热处理和在生理盐水中振荡处理可明显提高Ｌ－多巴的生产效率和产量，过高的底物加入量不利于固定化细胞的重复使用     

纳米银对荧光假单胞菌生物膜形成的影响

分别以空白和0.4%纳米银乙烯醋酸乙烯酯(EVA)塑料片作为载体培养荧光假单胞菌生物膜,通过菌落计数法测定生物膜的变化曲线,分别采用普通显微镜观察生物膜形成并计算覆盖率(BCR),扫描电镜观察生物膜的微观结构,激光共聚焦显微镜观察生物膜中的细菌状态并计算死亡率.结果表明,空白、纳米银EVA表面生物膜分别在12和24 h达到稳定状态,各时间点的纳米银EVA表面菌数及BCR均显著低于空白EVA(p<0.05);在10000倍的视野下,空白EVA表面的荧光假单胞菌通过胞外产物和菌体形成致密生物膜,纳米银EVA表面多为分散菌体;在24,48 h时,纳米银EVA表面的死亡菌体数显著高于空白EVA(p<0.05);纳米银通过抑制荧光假单胞菌生长和减少胞外产物的分泌而影响生物膜的形成.     

固定化酵母酿造黄酒试验初报

本文用海藻酸钙凝胶固定活酵母细胞酿造黄酒试验在实验室获得成功,试验结果表明:(1)黄酒发酵周期为10天,与传统生产工艺相比可缩短50—70天;(2)本试验制成之黄酒含乙醇16％(v)左右,糖份为0.6(g/1OOml),总酸为0.4(g/100ml)以下。     

产黑色素B.thuringiensis重组菌株的构建及其培养条件的优化

将嗜麦芽假单胞菌中产生黑色素的基因(mel gene)克隆到穿梭载体pHT3101中，并将它处于表达系统cry3A的控制下，构建得到重组质粒pHTAM．将此重组质粒用电脉冲的方法转入苏云金芽胞杆菌受体菌株BMB171中，得到重组菌株RSA．研究结果表明，处于cry3A控制下nel基因在BMBl71菌株中得到了成功的表达．本研究进一步采用红外光谱扫描法检测RSA所产黑色素的性质，并通过改变培养条件来提高黑色素的产量．     

纳豆菌细胞包埋材料的选择

以海藻酸钠（SA）和聚乙烯醇（PVA）为包埋材料，采用固定化细胞技术对纳豆菌生产纳豆激酶进行了研究。研究发现，在PVA中加入SA进行细胞包埋可获得渗透性能好强度高的固定化细胞，通过正交试验进一步确定：当PVA的浓度为11％，SA的浓度为1％，硼酸的浓度为5％，CaCl2的浓度为6％时，固定化细胞的强度最好，可反复使用6批次，活性也很高，产生的纳豆激酶酶活溶纤圈直径积达88mm^2／15μL。     

壳聚糖固定化胰蛋白酶的制备及理化性质研究

采用壳聚糖吸附和成二醛交联的方法,将胰蛋白酶固定于壳聚糖上．初步探讨了壳聚糖的脱乙酰度、交联剂用量及给酶量对固定化效果的影响,并对固定化酶的理化性质进行了研究．结果表明,用88％脱乙酰度壳聚糖0．2g,5％戊二醛2mL,8mg胰蛋白酶固定化效果较好;固定化胰蛋白酶的热稳定性较天然酶有较大提高,最适反应温度70℃,较天然酶提高了25℃;最适pH为7．0;表观米氏常数K’m为0．24％,天然酶Km为1．16％;室温下酪蛋白的半衰期为41d．     

聚丙烯酸钠溶液的粘性行为研究

本文利用恒定外加盐浓度稀释法研究了聚丙烯酸钠溶液的粘性行为。     

溶解-沉淀可逆的酶载体的合成及其应用

由丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯和顺丁烯二酸酐共聚，合成了ｐＨ敏感的溶解－沉淀可逆的共聚物，并测试了共聚物溶解－沉淀相分离的临界ｐＨ值．以这种共聚物为载体，进行了木瓜蛋白酶的固定化．     

盐生盐杆菌灭活原生质体融合的研究

通过双亲灭活方法将二株具不同遗传学特性的盐生盐杆菌Ｊ７（含质粒，不产紫膜）和Ｒ１（产紫膜，不含质粒）进行原生质体融合试验．结果表明，在以３０％ＰＥＧ６００为助融剂，加２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ条件下，４０℃保温１ｍｉｎ，获得融合率为０．７６×１０－５的融合子．这些融合子具有双亲菌株的某些特征，其中２２％的融合子既含有质粒又产紫膜，这些融合子对于进一步研究质粒与紫膜的关系，以及筛选高产紫膜的优良菌株，均有十分重要的价值．     

Schif碱药物与细菌作用的热力学研究

在不同温度条件下利用微量热法测定了大肠杆菌以及大肠杆菌在６种Ｓｃｈｉｆ碱药物抑制下的生长热谱，找出了该细菌生长的最佳生长温度，获得了该细菌在不同温度条件及抑制情况下生长代谢的速率常数，并借助化学反应中分子碰撞理论计算了该细菌生长的生长活化能，在此基础上借用化学反应速率的活化络合物理论模型对大肠杆菌生长代谢的生化反应进行了热力学分析     

荧光光谱法研究四环素族化合物与白蛋白的相互作用

用荧光光谱法研究了四环素族药物（四环素，土霉素，金霉素）对白蛋白荧光的猝灭．由静态猝灭法和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ法获得了药物与白蛋白作用的解离常数，且与其它方法获得的结果相符．说明它们的作用过程主要是静态猝灭．鉴于白蛋白与四环素族化合物之间可以发生能量转移，可通过Ｆｏｓｔｅｒ偶极－偶极无辐射能量转接原理，测得白蛋白氨基酸残基与四环素族药物之间临界距离Ｒ０，以及在它们各自能量转移效率情况下，白蛋白荧光团与四环素族分子中心距离ｒ．由此提出形成非发光复合物模型     

泥鳅原始生殖细胞的发生、迁移和性腺分化

通过光学显微镜对泥鳅原始生殖细胞（Ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌｇｅｒｍｃｅｌｓ，即ＰＧＣｓ）的发生、迁移和性腺分化进行初步研究，发现泥鳅ＰＧＣｓ最初出现在原肠晚期预定中胚层内，体节中胚层与侧板中胚层分离后而位于侧板中胚层．随着胚胎进一步发育，ＰＧＣｓ沿着脏壁中胚层从消化道腹侧迁移到背面，进入系膜两侧的背壁上皮形成的生殖嵴，与生殖嵴共同组成未分化的生殖腺，此时的原始生殖细胞为性原细胞．ＰＧＣｓ在迁移过程中数量基本不变．另外，未分化生殖腺的不对称分布可能是雌雄分化的最早特征．     

用原位杂交技术检测二价染色体上黄鳝rRNA基因多态性的研究

用地戈辛标记的原位杂交技术研究黄鳝二价体上ｒＲＮＡ基因的多态性．共检测到：数目和位置多态；杂交信号形态多态；ｒＲＮＡ基因的联合现象；７号二价体上可移动的ｒＲＮＡ基因位点；ｒＲＮＡ基因的串联重复；ｒＲＮＡ基因杂交信号周围的微信号密集等６种多态现象．还对本研究结果进行了详细地讨论．