高效液相色谱手性流动相添加剂法分离3种黄酮类化合物对映体

采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),以磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)作为手性流动相添加剂,建立了二氢黄豆苷原(dihydrodaidzein)、雌马酚(equol)和山姜素(alpinetin)3种黄酮类化合物的手性拆分方法。考察了环糊精的种类和浓度、有机相的种类和比例、缓冲盐的种类和浓度以及pH对3种化合物手性拆分效果的影响。结果表明:采用Kromasil 100-5C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-10 mmol/L SBE-β-CD水溶液(含20 mmol/L KH₂PO₄, pH值到4.0)(体积比为20:80)的条件下,二氢黄豆苷原、雌马酚和山姜素的对映体都达到了基线分离,分离度分别为1.8, 1.9和1.4。该方法简便,分离效果好,对黄酮类化合物的拆分具有应用价值。     

毛细管气相色谱法分离2-苯基羧酸酯对映体

手性2-芳基羧酸酯是制备手性非甾体抗炎药物2-芳基羧酸的重要的中间体,为了建立可用于2-苯基羧酸酯对映体分离的手性毛细管气相色谱法(CGC),分别使用2,6-二-O-戊基-3-O-丁酰基-β-环糊精及2,6-二-O-苄基-3-O-庚酰基-β-环糊精作毛细管气相色谱手性固定相,研究了其对2-苯基丁酸甲酯、2-苯基丁酸乙酯、2-苯基丁酸异丙酯、2-苯基丙酸甲酯及2-苯基丙酸环戊酯等5种2-苯基羧酸酯对映体的分离能力。结果表明,用2,6-二-O-戊基-3-O-丁酰基-β-环糊精及2,6-二-O-苄基-3-O-庚酰基-β-环糊精作手性固定相的毛细管气相色谱法可以分离2-苯基丁酸甲酯、2-苯基丙酸甲酯和2-苯基丙酸环戊酯对映体。2,6-二-O-戊基-3-O-丁酰基-β-环糊精对3种2-苯基羧酸酯对映体的分离能力超过了2,6-二-O-苄基-3-O-庚酰基-β-环糊精。     

磺丁基醚-β-环糊精修饰毛细管电色谱拆分地平类药物对映体

采用甲基丙烯酸缩水甘油酯原位聚合物基质, 将磺丁基醚-β-环糊精修饰到毛细管内壁, 制得了一种毛细管电色谱手性柱(SECDP), 并通过红外光谱(IR)和扫描电子显微镜(SEM)表征了其结构. 磺酸基可提供足够稳定的正向电渗流(EOF), 基于磺丁基醚-β-环糊精在固定相和流动相中的协同作用, 通过优化手性添加剂浓度、 pH值、 施加电压、 温度及有机调节剂含量等条件, 利用该开管电色谱柱拆分了氨氯地平、 尼莫地平和尼卡地平等10种地平类手性药物对映体. 优化的流动相组成为20 mmol/L NaH₂PO₄(pH=4.0), 含4.0 mmol/L 磺丁基醚-β-环糊精, 乙腈的体积分数为10%~25%, 施加电压15~25 kV, 温度为15 ℃, 电动进样2 kV×5 s, 检测波长为236 nm. 在上述条件下, 分离度(R_S)可达3.62, 柱效达61011块/m, 分析时间一般为6~15 min. 基于色谱分离数据, 探讨了相关的手性分离机理.     

磺丁基醚-β-环糊精手性流动相添加剂法拆分佐匹克隆对映体

采用磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)为手性流动相添加剂,建立了反相高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分分离佐匹克隆对映体的方法。在普通C18色谱柱(250 mm×4.6 mm×5.0μm)上,考察了水相pH、磺丁基醚-β-环糊精浓度、磷酸盐缓冲液浓度、甲醇含量、柱温等对佐匹克隆对映体拆分效果的影响。确定最适用的色谱条件:流动相为水相(5 mmol/L NaH2PO4,含磺丁基醚-β-环糊精5 mmo/L,以H3PO4调pH为3):甲醇=78:22(V/V),检测波长305nm,流速为1 mL/min,柱温为30℃,此条件下佐匹克隆对映体的保留时间分别为23.0和25.6 min,分离度为1.81。两对对映体质量浓度在0.04~0.36g/L范围内线性关系良好(r≥0.9990),保留时间的RSD分别为0.73%和0.80%,峰面积的RSD分别为1.2%和1.1%。     

齐墩果烷型和乌苏烷型五环三萜同分异构体配位色谱法分离机理（英文）

本文主要研究了配位色谱法分离齐墩果烷型和乌苏烷型五环三萜同分异构体的分离机理。基于计算模拟分析,β-环糊精（β-CD）和其衍生物为适宜的配位剂。采用HPLC法测定了包合物的表观形成常数,并制备了asiaticoside-B与β-CD包合物。实验结果显示:流动相中添加葡萄糖基-β-环糊精（Glu-β-CD）时,同分异构体的分离度为11.95,比添加β-CD或添加甲基-β-环糊精（DM-β-CD）时（分别为9.61和9.89）都略高些。假定五环三萜类化合物与β-CD形成1：1的包合物,对于asiaticoside-B,流动相中添加Glu-β-CD时,表观形成常数（K_F）为2534 L/mol,比添加β-CD或添加DM-β-CD时（分别为1467和1373 L/mol）都略大些。根据asiaticoside-B与β-CD包合物的红外光谱解析及计算模拟,推测asiaticoside-B的E环上甲基部分进入了β-CD的空腔内,而其羰基基团没有进入β-CD的空腔内,其糖苷部分与亲水性的β-CD空腔外部形成氢键作用力。因此,配位色谱法分离齐墩果烷型和乌苏烷型五环三萜同分异构体的分离机理可以推测如下：齐墩果烷型和乌苏烷型五环三萜同分异构体E环上甲基的不同空间位阻导致了同分异构体的不同色谱分离行为。     

手性流动相添加法拆分酮康唑外消旋体

采用C18反相色谱柱,利用在流动相中加入手性选择剂的方法实现酮康唑对映体的拆分。研究了手性选择剂的种类及浓度、流动相pH值、甲醇比例和柱温等因素对酮康唑手性分离的影响,结果表明磺丁基-β-环糊精可以使酮康唑对映体完全分离,最后选择的流动相组成为甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钠(体积比为60∶40,含0.02%三乙胺和1.0 mmol/L磺丁基-β-环糊精,用稀磷酸调节pH值到3.00)。酮康唑对映体在6 min内得到基线分离,分离度为2.05。方法简便,分离效果好,对酮康唑对映体的拆分具有应用价值。     

毛细管电色谱法测定果蔬中粉唑醇对映体的含量

采用原位聚合反应,制备一种磺丁基醚-β-环糊精修饰甲基丙烯酸聚合物毛细管手性电色谱开管柱(SECDP)。采用该电色谱柱,并在流动相中添加少量磺丁基醚β-环糊精,利用固定相和流动相中的磺丁基醚β-环糊精的协同作用,成功地拆分了手性农药粉唑醇对映体。考察了添加剂浓度、pH值、施加电压、温度及有机调节剂的含量对手性分离的影响,初步优化了开管电色谱柱拆分粉唑醇对映体的条件。优化的流动相组成为10 mmol·L~(-1)硼酸钠(pH=9.2),含3.0 mmol·L~(-1)磺丁基醚β-环糊精和体积分数为15%甲醇,施加电压15 kV,温度20℃,压力进样(3 psi×3 s),检测波长204 nm。在上述条件下,粉唑醇对映体分离度可达1.85,分析时间仅为8~12 min。黄瓜、梨、苹果和西红柿果蔬样品用乙腈提取,磁性石墨化碳净化,在上述优化条件下测定果蔬中粉唑醇对映体的残留量。粉唑醇对映体在1.3~250μg·m L~(-1)范围呈良好的线性关系,线性回归方程为:第一个对映体y_1=92.56+176.81x_1,r_1=0.9993;第二个对映体y_2=46.46+177.97x-2,r_2=0.9998。固定相和流动相中带负电荷的磺丁基醚-β-环糊精不仅能提供较强正向电渗流(EOF),同时有较高的手性分离选择性。所发展的开管毛细管电色谱方法是一种操作简单,分离测定快速,溶剂耗量小,测试成本低,环境污染小的方法。     

双相识别手性萃取佐匹克隆对映体动力学研究

以羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)和L-酒石酸异丁酯(L-IBTA)分别为水相和有机相中手性选择体构成双相识别手性萃取体系, 研究其对佐匹克隆(ZPC)对映体的萃取动力学. 分别考察了搅拌速度、两相接触面积、水相中ZPC对映体浓度、水相及有机相中手性选择体浓度以及水相pH值对ZPC对映体萃取动力学的影响. 结果表明, L-IBTA萃取ZPC对映体的反应为“快反应”|对ZPC对映体反应是一级反应, 对L-IBTA反应是二级反应|对R-ZPC和S-ZPC反应速率常数分别为31.25×10^－5和48.74×10^－5 mol^－2•m⁶•s^－1. 萃取速率随HP-β-CD浓度的增加而降低. 以上研究结果将为手性萃取的工程设计提供参考.     

纤维素键合手性固定相拆分6种萘满酮衍生物对映体

使用Chiralpak IC（纤维素-三（3,5-二氯苯基氨基甲酸酯）共价键合硅胶）手性柱,建立了采用手性固定相高效液相色谱拆分6种 α -芳基萘满酮类衍生物对映体的方法。考察了流动相中有机改性剂的种类和比例、柱温和流速对对映体分离的影响。结果显示6种化合物在异丙醇为改性剂的条件下均可获得较高的对映体分离度。热力学研究表明6种化合物对映体的手性拆分过程均受焓驱动影响,且低温有利于对映体分离。最终推荐分离化合物Ⅰ对映体的流动相是正己烷-异丙醇（90：10,v/v）;分离化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ对映体的流动相是正己烷-异丙醇（99：1,v/v）;分离化合物Ⅴ对映体的流动相是正己烷-异丙醇（85：15,v/v）;分离化合物Ⅵ对映体的流动相是正己烷-异丙醇（80：20,v/v）。柱温为25℃,流速为1.0 mL/min。6种化合物对映体均可在Chiralpak IC手性固定相上得到完全分离,证明该色谱柱对6种化合物具有较高的对映体选择性。     

高效液相色谱手性流动相添加法拆分阿替洛尔对映体

采用C18固定相,以磺丁基醚-β-环糊精为手性流动相添加剂,提出了阿替洛尔对映体的高效液相色谱拆分方法。选用KromasilC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为含20mmol.L-1磺丁基醚-β-环糊精的pH8.2的10mmol.L-1磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈(60+35+5),紫外检测波长275nm,柱温为25℃,进样量20μL,流量为0.5mL·min-1时,分离度达到1.63。     

高效液相色谱手性流动相添加法拆分奥昔布宁对映体

采用C18固定相,以羟丙基-β-环糊精为手性流动相添加剂,建立了奥昔布宁对映体的高效液相色谱拆分方法。考察了手性添加剂、有机极性调节剂、缓冲盐的种类和浓度以及流动相的pH值和流速及柱温等因素对对映体分离的影响。在最佳分离条件下,奥昔布宁对映体的分离度为1.54,检测限为1.0 ng。该方法简便,重复性好,比手性固定相法更加经济。     

Simultaneous analysis and retention behavior of major isoflavonoids in Radix Puerariae lobatae and Radix Puerariae thomsonii by high performance liquid chromatography with cyclodextrins as a mobile phase modifier

In order to differentiate two species of Radix Puerariae (Radix Puerariae lobatae and Radix Puerariae thomsonii) and to determine major isoflavonoids (puerarin, daidzin, daidzein and genistein) in the samples, a simple high performance liquid chromatography (HPLC) method with isocratic elution employing cyclodextrins (CDs) as mobile phase additives was developed. Various factors affecting the retention of isoflavonoids in the C₁₈ reversed-phase column, such as the nature of CDs, the concentration of hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HP-β-CD) and the methanol percentage in the mobile phase, were studied. Experimental results confirmed that HP-β-CD, as a very effective mobile phase additive, could markedly reduce the retention of isoflavonoids, especially daidzein and genistein. The elution of four isoflavonoids could be achieved on a Kromasil^® C₁₈ column within 56 min by using the methanol–water contained 5 mM HP-β-CD (25/75, v/v) mixture as the mobile phase. The formation of the inclusion complexes between isoflavonoids and HP-β-CD explained the modification of the retention of analytes. The apparent formation constants determined by HPLC confirmed that the stoichiometry of HP-β-CD-isoflavonoid complexes was 1:1, and the stability of the complexes depended on the size and property of isoflavonoids. The optimized method was successfully applied for the simultaneous determination of major isoflavonoids in P. lobatae and P. thomsonii samples. This work provides a useful method for the analysis of traditional Chinese herbs.     

衍生化β-环糊精手性固定相高效液相色谱法拆分米那普仑对映体及其分离机制

建立了新型抗抑郁药米那普仑在环糊精手性固定相上的高效液相色谱拆分方法。在反相色谱条件下采用未衍生化β-环糊精(Cyclobond I 2000)、乙酰基-β-环糊精(AC-β-CD)、2,3-二甲基-β-环糊精(DM-β-CD)、3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯-β-环糊精(DMP-β-CD)4种手性柱分离米那普仑对映体。考察了固定相、流动相比例、pH、流速和柱温对拆分的影响。利用分子对接和结合能计算方法,研究米那普仑分子与AC-β-CD的对接过程,探讨其可能的分离机制。优化后的拆分条件如下:固定相为乙酰基-β-环糊精手性柱Astec CYCLOBONDTMI 2000 AC(25 cm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%(体积分数)pH 5.0醋酸三乙胺溶液(TEAA)(5∶95,v/v),流速为0.4mL/min,柱温为25℃,检测波长为220 nm。在此条件下,米那普仑对映体获得快速拆分,分离度(Rs)为1.74,理论塔板数为10 125。分子模拟结果表明引起手性识别的作用力主要是环糊精衍生化的乙酰基导致的氢键作用差异。该方法快速、高效、重现性好。     

替考拉宁键合手性固定相高效液相色谱法直接拆分泮托拉唑钠对映体

以替考拉宁为手性选择剂制备了大环抗生素类手性固定相替考拉宁键合手性固定相(T-CSP),建立了T-CSP反相液相色谱直接拆分泮托拉唑钠对映体的方法。考察了流动相中有机改性剂的种类和比例、柱温以及流动相流速对拆分泮托拉唑钠对映体的影响。研究发现,用甲醇作有机改性剂比乙腈更有利于对映体的分离;在研究的温度范围内,随着柱温的升高,对映体的保留时间缩短,同时分离因子和分离度降低;在一定范围内降低流速有利于对映体的分离。采用T-CSP色谱柱(150 mm×4.6 mm i.d.,5 μm),以甲醇-水(体积比为35∶65)为流动相,在流速0.6 mL/min、检测波长290 nm、柱温20 ℃的条件下,泮托拉唑钠对映体获得了近于基线的分离,所建立的方法具有简便快速及重复性好等优点。     

Enantioseparation of a novel “click” chemistry derived native β-cyclodextrin chiral stationary phase for high-performance liquid chromatography

A novel native β-cyclodextrin chiral stationary phase was prepared via “click” chemistry with cuprous iodide–triphenylphosphine complex as the catalyst and applied for enantioseparation of Dns-amino acids, substituted phenyl and phenoxy group modified propionic acids, flavonoids, and some pharmaceutical compounds such as nimodipine, propranolol, brompheniramine and bendroflumethiazide in reversed-phase high-performance liquid chromatography. The studied analytes could be resolved under different separation conditions. The resolution of Dns-DL-Leu could reach 5.08 using a mobile phase consisting of 1% (w/w) triethylammonium acetate buffer (pH 4.11) and methanol (50:50 v/v). The effects of buffer pH and the content of organic modifier on enantioseparation of Dns-amino acids by this novel chiral phase were being investigated. The separation results demonstrate that click chemistry, a versatile reaction, affords a facile approach towards the preparation of stable chiral stationary phases.     

Enantiomeric separation of (R, S)-naproxen by recycling high speed counter-current chromatography with hydroxypropyl-β-cyclodextrin as chiral selector

Recycling high speed counter-current chromatography (HSCCC) was successfully applied to resolution of (R, S)-naproxen (NAP) using hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HP-β-CD) as chiral selector. The two-phase solvent system composed of n-hexane-ethyl acetate-0.1 mol L(-1) phosphate buffer solution with pH=2.67 (8:2:10, v/v/v) was selected. Influence factors for the chiral separation process were investigated, including concentration of HP-β-CD, equilibrium temperature and pH of aqueous phase. Suitable elution mode was selected for HSCCC enantioseparation of (R, S)-NAP. Under optimum separation conditions, 29 mg of (R, S)-NAP was separated using preparative recycling HSCCC with the molar ratio HP-β-CD/NAP racemate 83:1. Technical details for recycling elution mode were discussed as for chiral HSCCC separation. The purities of both (S)-NAP and (R)-NAP were over 99.5% as determined by HPLC. Enantiomeric excess of (S)-NAP and (R)-NAP reached 99.4%. Recovery for NAP enantiomers from HSCCC fractions was 82-89%, yielding 13 mg of (S)-NAP and 12 mg of (R)-NAP.     

超高效液相色谱β-环糊精流动相添加剂法分析卷烟主流烟气中7种酚类化合物

以β-环糊精(β-CD)作为流动相添加剂,建立了一种超高效液相色谱(UPLC)快速分析卷烟主流烟气中对苯二酚、间苯二酚、邻苯二酚、苯酚、对甲酚、间甲酚、邻甲酚的方法。卷烟主流烟气中7种酚类化合物采用YC/T 255-2008标准方法收集,萃取液经0.22 μm微孔滤膜过滤后直接进行UPLC分析。采用ACQUIT UPLC BEH Shield RP18色谱柱,以含有4 g/L β-CD的流动相进行梯度洗脱,采用优化后的荧光检测条件进行检测,分析时间为10 min。实验结果表明: 与目前国内外普遍应用的HPLC方法相比,该方法实现了间甲酚和对甲酚异构体的有效分离,7种酚类化合物的荧光响应强度显著增加。7种酚类化合物在该方法的线性范围内线性关系良好(r＞0.9999), 3个加标水平上平均回收率为95.5%～103.5%,相对标准偏差(RSD)均小于4%,方法的检出限为4～14 ng/cig。     

Fast separations of chiral β-blockers on a cellulose tris(3,5-dimethylphenylcarbamate)-coated zirconia monolithic column by capillary electrochromatography

Cellulose tris(3,5-dimethylphenylcarbamate) (CDMPC) is an excellent chiral selector for enantioseparation of a wide variety of chiral compounds. The monolithic chiral columns are becoming popular in liquid chromatography and capillary electrochromatography. In this work, we present the fast separation of chiral β-blockers on a CDMPC-modified zirconia monolithic column by capillary electrochromatography (CEC). The porous zirconia monolithic capillary column was prepared by using the sol-gel technology and then zirconia surface modified with CDMPC. The enantioseparations were performed in reversed-phase (RP) eluents of a phosphate solution (pH 4.4) modified with acetonitrile or alcohol. The enantioseparations of a set of eight chiral β-blockers were achieved in less than one minute. Influences of the applied voltage, column temperature, concentration of acetonitrile and the type of alcohol as the organic modifier in the mobile phase, and sample injection time on enantioseparation were investigated. CEC separations at the applied voltage of 10 kV and 15 °C in the ACN-modified mobile phase provided the best resolutions for the analytes studied. Run-to-run and day-to-day repeatabilities of the column in the RP-CEC separation were less than 1 and 2%, respectively.