基于液相色谱-质谱代谢组学方法研究中药定喘汤对呼吸道合胞病毒感染的疗效

呼吸道合胞病毒(RSV)容易引发下呼吸道感染,尤其是小儿毛细支气管炎.中药定喘汤用于RSV感染的治疗在中国有着广泛的临床实践基础.由于中药体系的复杂性,其治疗机制和主要药效成分还不够明确.采用代谢组学方法分析中药药效,可以为传统中药治疗提供现代科学论证.该研究对大鼠各干预组分别采用中药定喘汤全方,宣、降、清分解剂以及利...     

麻叶千里光挥发油抗病毒活性及成分分析

利用体外细胞病变效应(CPE)法,发现菊科千里光属植物麻叶千里光(Senecio cannabifoliusLess.)挥发油对呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)致HeLa细胞病变有显著的抑制作用,能不同程度地延缓副流感病毒、柯萨奇病毒B3、腺病毒Ⅲ型和流感病毒致细胞病变作用。为进一步确定麻叶千里光挥发油抗病毒的活性成分,经气相色谱-质谱联用技术对其进行了成分分析。麻叶千里光挥发油得率0.22%(mL/100g),从中初步鉴定了26种化合物,占挥发油总量的88.47%,主要为正十六(烷)酸(27.01%)、胡萝卜次醇(13.73%)、9,12-十八碳二烯酸(9.99%)、α-蒎烯(9.28%)和β-蒎烯(5.58%)。在鉴定出的化合物中,萜烯占47.42%,脂肪酸类占37.61%,其它成分仅占3.44%,故提示麻叶千里光挥发油中高含量的萜烯和脂肪酸类可能与其抗病毒活性有关。     

乙酰化蛋白的质谱鉴定研究

报道了两种生物质谱技术ESI-MS和MALDI-MS在鉴定乙酰化修饰蛋白BSA-ac中的应用研究结果. 乙酰化修饰蛋白通过特征碎裂峰m/z 126.1或MS/MS质谱图中相差一个赖氨酸的相邻b或y离子之间170 Da分子量的差异确证赖氨酸乙酰化修饰, 并且后者提供具体修饰位点信息. 研究提示ESI-MS和MALDI-MS两种质谱技术均可用于鉴定实际复杂样品中的乙酰化蛋白, 且在乙酰化蛋白的鉴定中各有其优点.     

单病毒示踪

病毒是对人类健康威胁最大的病原之一,由其引发的病毒性疾病对人民健康、国家安全和社会经济构成重大威胁.病毒感染机制研究对病毒性疾病的防控及治疗具有重大意义.病毒侵染宿主细胞的动态过程涉及病毒组分与多种细胞组分或细胞器间复杂的相互作用,但是传统手段无法对该动态过程进行实时跟踪研究.单病毒示踪技术作为一种可以实时原位示踪单颗...     

基于Tet-On 3G的IFITM3诱导表达MDCK细胞系的建立及功能分析

利用Tet-On 3G系统构建了含人IFITM3基因的真核表达质粒pTRE3G-IFITM3,并将其与调控质粒pLVX-Tet3G共转染犬肾细胞(MDCK),转染后48 h用G418和嘌呤霉素进行筛选,用多西环素(Dox)对获得的细胞系进行诱导表达鉴定,并进行Dox敏感性分析、IFITM3~+细胞百分数及定位分析.用含萤光素酶(Luciferase)报告基因的禽流感病毒H5/H7蛋白或VSV G蛋白包裹的假型慢病毒颗粒进行感染实验,检测萤光素酶活性.结果表明,筛选获得了携带人IFITM3的MDCK诱导表达细胞系,且IFITM3表达量与Dox剂量和诱导时间相关;确定Dox工作浓度为2.5μg/mL,诱导12 h时IFITM3~+细胞数达75%以上,且IFITM3在晚期内体/溶酶体存在分布;假型病毒感染及萤光素酶活性分析表明,IFITM3可显著抑制禽流感病毒H5,H7和VSV G蛋白介导的病毒进入,为深入探究其具体的抑制机制奠定了基础.     

单纯疱疹二型病毒和口蹄疫病毒感染过程能量代谢的微量热研究

本论文采用LKB－2277生物活性检测器研究HeLa细胞在单纯疱疹Ⅱ型病毒感染和BHK－21细胞在口蹄疫病毒感染下的能量代谢过程，以及热疗及抗病毒药物干扰素对这一过程的能量代谢的影响。结果表明病毒感染细胞的代谢热功率大于未被感染的细胞并且被不同类型病毒感染的细胞之间代谢产热功率存在显著的差别；病毒感染是一个温度敏感的过程；干扰素对病毒感染过程有抑制作用。通过对不同贮存时间口蹄疫病毒感染BHK－21细胞的能量代谢产热曲线的分析表明长时间保存对病毒的毒力和感染能力产生了较明显的影响。这些结果都表明微量热法是研究病毒感染过程的一种有效方法。     

基质辅助激光解吸附飞行时间质谱方法分析山竹果皮缩合单宁

在反射模式(Reflectron modes)下,去离子处理后, 引入Cs+(CsCl, 1.52 g/L) 作为阳离子化试剂,得到清晰的山竹果皮缩合单宁的MALDI-TOF质谱图.解析该质谱图能得到完整的山竹果皮缩合单宁的结构信息:山竹果皮缩合单宁是从三聚体(m/z 999)到十一聚体(m/z 3303)分布的多聚物,离子峰最强的为五聚体(m/z 1575);同时存在3种结构单元:(表)儿茶素(C/EC)、(表)棓儿茶素(GC/EGC)和(表)阿福豆素(AC/EAC),且C/EC、AC/EAC和 GC/EGC的离子峰强度依次降低,同时在四聚体(m/z 1440)到七聚体(m/z 2303)均存在棓酰基;从四聚体(m/z 1285)到八聚体(m/z 2436),不同的聚合物中普遍存在A型连接.本研究优化了获取植物缩合单宁结构信息的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱方法.     

带有人凝血因子Ⅸ cDNA的反转录病毒载体的构建及其在离体细胞中的高效表达

报道了带有人凝血因子IX cDNA的高滴度高表达安全性反转录病毒载体的构建。采用LNL6反转录病毒载体为骨架,构建了由人巨细胞病毒启动子(hCMV)驱动的反转录病毒载体LNCIX,由反转录病毒LTR启动子驱动的反转录病毒载体LIXSN,以及由LTR和CMV启动子共同控制转录的反转录病毒载体LCIXSN,分别用电穿孔方法转导PA317辅助细胞株。LNCIX和LIXSN反转录病毒载体能在离体细胞中表达人IX因子蛋白,而LC'IXSN反转录病毒载体转移到离体细胞中没有检测到人IX因子蛋白。PA317/INCIX细胞的产病毒滴度为8×10~5CFU/ml,该重组病毒感染人纤维肉瘤细胞HT1080及血友病B患者皮肤成纤维细胞(HSF),用ELISA方法分别测定这些细胞的IX因子蛋白产量,LNCIX载体在HT-1080细胞中的人IX因子平均表达量为3.3μg/10~6细胞·d~(-1);在HSF细胞中的平均表达量为2.5μg/10~6细胞·d~(-1),其中80％以上的IX因子具有凝血活性,与过去相比,提高了产病毒滴度,增加了人IX因子的平均表达量,病毒载体骨架的设计更完善,降低了产生野生型病毒的概率,提高了安全性,对于进一步开展血友病B的基因治疗具有重要的意义。     

小分子物质的MALDI分析及质谱成像研究进展

随着基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)的广泛应用,其对小分子物质(LMW compounds)的分析已经成为此领域的一个重要研究方向.由于传统的小分子基质在分析小分子化合物时会在低分子量区域(m/z1000)产生干扰及抑制效应,使MALDI-MS在分析小分子时效果欠佳.为了解决这一问题,许多手段包括低背景的新基质开发以及分析物的衍生化等被提出.本文系统综述了基质辅助激光解吸电离质谱在小分子分析及成像中的方法及应用,并展望了其未来的发展趋势.     

气相色谱-质谱法测定乳制品中光引发剂异丙基硫杂蒽酮的残留量

建立了采用气相色谱（GC）-质谱(MS)检测由包装材料迁移到乳制品中的光引发剂异丙基硫杂蒽酮残留量的方法。使用氘代蒽为内标,样品经Carrez试剂除蛋白质后用丙酮-正己烷(体积比为1∶1)提取,上层提取液用氟罗里硅土固相萃取小柱净化。采用单四极杆质谱进行样品筛选和定量,选取的监测离子为m/z 184,m/z 224,m/z 239,m/z 254(异丙基硫杂蒽酮)和m/z 80,m/z 94,m/z 188,m/z 160(氘代蒽)。疑似样品采用离子阱串联质谱法进行确证,选取的母离子和子离子分别为m/z 254,m/z 239(异丙基硫杂蒽酮)和m/z 188,m/z 160(氘代蒽)。本方法的测定低限(LOQ)分别为7.0 μg/L(GC-MS)和5.0 μg/L(GC-MS/MS),回收率为74.9%~89.6%。采用该方法对11种不同类型的乳制品进行了检测,发现了两例阳性样品。     

金纳米颗粒修饰的共价有机框架材料用于基质辅助激光解析/电离质谱分析小分子

利用金硫键相互作用将金纳米颗粒固定在带有硫醚悬臂的二维共价有机框架(TTB-COF)上,制备了一种金属有机复合材料(Au-TTB-COF),用于基质辅助激光解吸/电离质谱(MALDI-MS)分析小分子物质。与前期报道的基质相比,Au-TTB-COF将COF材料对紫外光的吸收和金纳米颗粒所具有的促进激光能量转移作用相结合,提高了分析物的电离效率,显著提高了小分子MALDI-MS分析的灵敏度。同时,Au—S键的稳定性有效降低了基质背景干扰,提高了分析的重现性和耐盐能力。实际样品的分析结果表明,对富含大分子物质组分的血清和牛奶样品以及富含电解质的果汁,以Au-TTB-COF为基质均可实现样品中小分子的MALDI-MS分析。     

能量分辨质谱鉴别卤代4(3H)-喹唑啉酮异构体

应用能量分辨质谱分别研究了氯代4(3H)-喹唑啉酮异构体和氟代4(3H)-喹唑啉酮异构体的单体及异构体单体的混合物的能量质谱裂分曲线。结果表明,在碰撞能量0.8～1.5V的变化范围内,氯代4(3H)-喹唑啉酮异构体单体及混合物的碎片离子m/z 145与m/z 125的离子强度比值相对于碰撞能量的变化曲线,即裂分曲线与氯官能团的取代位置密切相关,而氟代4(3H)-喹唑啉酮异构体单体及混合物的碎片离子m/z 136与m/z 108的离子强度比值的裂分曲线则与氟官能团的取代位置密切相关,差异显著;据此可以成功鉴别卤代4(3H)-喹唑啉酮异构体的单体及混合物的构成。     

基于液相色谱-串联质谱技术的磷酸化蛋白质组学分析

本文运用稳定同位素双甲基化标记技术、固定相金属离子螯合层析(IMAC)技术并结合液相色谱-串联质谱法研究了仙台病毒感染引起的宿主细胞磷酸化蛋白质组变化。实验发现定量的4 289个磷酸化肽段有~20%的蛋白质磷酸化位点发生了显著变化;通路富集分析表明哺乳动物雷帕毒素靶蛋白(mTOR)通路和剪接体(Spliceosome)通路可能参与宿主细胞对病毒的应答;通过对显著变化磷酸化肽段进行基序分析,发现了9个代表性的磷酸化修饰位点基序。本研究方法对于深入解析抗病毒天然免疫信号通路提供了新线索。     

缺氧预处理诱导心肌细胞蛋白质组变化的初步研究

缺氧预处理(hypoxia preconditioning, HPC)可模拟缺血预处理(ischemic preconditioning, IPC)对缺血/再灌注心肌的保护作用, 涉及细胞内众多分子事件. 本工作旨在采用双向电泳和质谱分析等蛋白质组分析技术, 发现缺氧预处理后心肌细胞蛋白质整体表达上的变化, 初步分析其与缺氧预处理心肌保护作用的关系. 将原代培养的SD乳鼠心肌细胞分为2组(n＝6): (1)缺氧预处理组(HPC): 将细胞置缺氧仓内短暂缺氧20 min进行缺氧预处理(HPC), 制备心肌细胞蛋白提取物; (2)对照组(control): 细胞置于培养箱内持续常氧孵育至实验结束, 提取蛋白. 采用双向凝胶电泳和图像扫描, 经蛋白样本分离和考马斯亮蓝染色后比较分析, 选取3个差异表达蛋白点进行胶内酶切、肽质量指纹图谱分析和数据库检索. 双向电泳可分离约529±45个蛋白质, 点匹配率约为78%±7.5%. 18种蛋白质在HPC后发生明显表达差异, 其中12种蛋白质表达降低, 6种表达增高. 经质谱分析鉴定出的3种蛋白质分别为myosin light polypeptide 3, nucleoside diphosphate kinase (NDPK)和calreticulin (CRT). 缺氧预处理引起心肌细胞蛋白质组变化, 初步发现其中myosin light polypeptide 3表达下调、nucleoside diphosphate kinase和calreticulin表达增加, 可能通过调节心肌细胞的收缩性、激活G蛋白、调节细胞内Ca^2＋浓度而保护心肌. 本工作通过研究缺氧预处理延迟保护过程中心肌内源性蛋白表达水平的变化, 有助于从细胞水平探讨预处理延迟保护机制.     

电喷雾萃取电离质谱在线监测 Friedl?nder 缩合反应

质谱在线监测有机化学反应能够实时捕捉反应过程中反应物、中间体、产物的信号及其变化情况,从而推测有机反应机理,并加深对反应本质的认识。本研究利用电喷雾萃取电离质谱(EESI-MS)技术在线监测草酸催化的邻氨基苯乙酮与乙酰丙酮间的Friedlnder缩合反应。在反应的不同时间点,分别捕捉到了反应物(m/z 136)、中间体(m/z 218、m/z 236)和产物(m/z 200)的准分子离子信号,并记录了它们的信号强度随反应时间的变化趋势,推测出了反应机理。     

在线飞行时间质谱仪分析香烟烟气

利用飞行时间质谱仪实时在线分析了香烟A,并对香烟烟气进行老化实验。香烟烟气经由自行搭建的收集装置收集,通过微型真空泵将烟气从收集装置引入仪器进行分析。从香烟烟气谱图可以看出检测到60多种烟气成分,其中主要的化合物有丙烯(m/z 42)、丙酮(m/z 58)、环戊二烯(m/z 66)、异戊二烯(m/z 68)、苯(m/z 78)、甲苯(m/z 92)、苯酚(m/z 94)、二甲基呋喃(m/z 96)和二甲苯(m/z 106)等。老化烟气与新鲜烟气相比,随着老化时间的延长,m/z>90的成分信号强度逐渐降低,m/z<70的成分信号强度逐渐升高,10 h后烟气气溶胶的变化达到一个动态平衡,烟气成分含量最终也达到稳定;而70相似文献   

长期喂饮钇对子代大鼠脑组织中基因表达的影响

通过在饮水中加入钇(0,53.4,5340 mg.L-1),使大鼠长期摄入稀土。7个月后,采用基因芯片技术检测F1子代大脑组织中的基因表达情况。结果显示,与对照组相比,高浓度组有787个基因发生了差异表达,其中505个上调表达,282个下高表达。差异表达基因与细胞受体、信号转导、离子通道有关;低浓度组有44个基因发生了差异表达,其中32个上高表达,12个下调表达。差异表达的基因与细胞骨架、细胞运动以及DNA结合蛋白密切相关。提示长期喂饮稀土钇能改变大鼠脑组织中某些基因的表达,进一步造成机体某些生理功能如学习记忆能力的变化。     

持续静脉泵入及分次静点给予特治星治疗下呼吸道感染的效果观察

目的研究持续静脉泵入及分次静点给予特治星治疗下呼吸道感染的效果。方法选择116例下呼吸道感染患者,随机分为两组,观察组给予持续静脉泵入特治星治疗方案,对照组给予分次静脉点滴特治星治疗方案,治疗1周后观察治疗效果和安全性。结果观察组总有效率为94.83%显著高于对照组84.48%(P0.05),不良反应发生率为6.9%显著低于对照组20.69%(P0.05)。两组治疗后体温(T)、白细胞(WBC)及C反应蛋白(CRP)水平较治疗前均显著降低,观察组降低更为显著(P0.05)。两组治疗后氧分压(Pa O2)水平较治疗前均显著升高,观察组升高更为显著(P0.05)。结论持续静脉泵入能显著提高下呼吸道感染患者总有效率,降低不良反应发生率。     

射频四极杆离子导向用于质子转移反应飞行时间质谱的传输特性研究

射频四极杆离子导向器(RF-QIG)具有结构简单、传输效率高等优点,被广泛应用于各类质谱系统中。本研究将自主研制的RF-QIG集成于质子转移反应飞行时间质谱(PTR-TOF MS),考察了此装置在不同工作频率及电压幅值下对不同质荷比(m/z)离子的传输特性。结果表明,此RF-QIG在频率低于1 MHz时,无法传输m/z<40的离子,而H₃O⁺(m/z 19)和H₂O·H₃O⁺(m/z 37)在2.48和3.43 MHz频率下获得了非常强的质谱信号。此外,对于较高质量数的离子,如[C₃H₆O+H]⁺(m/z 59)、[C₆H₆+H]⁺(m/z 79)和[C₇H₈+H]⁺(m/z 93),均在2.48 MHz获得最强信号。MATLAB对有效电势的求解结果表明,电压幅值不变时,频率越...     

呼出气体活体质谱分析揭示中医推拿引起的代谢反应

采用电喷雾萃取电离质谱(EESI-MS)技术,在正离子检测模式下,对经过临床中医诊断为肝胆火旺、心脾阳虚和寒湿厚重等不同健康状态的4名志愿者接受推拿前后的呼出气体样品在m/z 50~1000质量范围内的指纹谱图进行了直接分析。通过高分辨质谱确认了接受推拿前后发生显著变化的代谢物(如肾上腺素(m/z 184.0889)、3-(3-羟基苯基)丙酸(m/z 167.0615)和L-色氨酸(m/z 205.0933)等)的结构。此外,结合偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)使健康状态不同的志愿者接受中医推拿前后呼出气体的指纹谱图得到明显区分,说明中医推拿能显著地改变志愿者的新陈代谢过程。呼出气体的直接质谱分析将是实时跟踪中医推拿引起的代谢变化的有效途径。