海洋鱼类血清游离皮质醇液质分析研究

血清样品中加入地塞米松作为定量内标,用氯仿提取,氮气吹干,V(甲醇):V(水)=1:3混合溶液定容后用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对游离皮质醇进行分析。采用电喷雾电离源负离子模式,分别取m/z407.2和437.2作为皮质醇和内标的定量目标离子进行检测。结果表明,皮质醇与内标在BEHC18色谱柱上得到良好的分离,方法在0～200μg/L浓度范围内线性相关系数为0.9993。仪器检出限为1.64pg。方法平均回收率达到93.3%～98.1%,相对标准偏差小于10%。对采自浙江宁波几批大黄鱼(Preudosciaena Crocea)和鲈鱼(Lateolabrax Japonicus)血清进行测定,游离皮质醇含量在2.11～75.84μg/L范围内。与三重四极质谱仪(Q-Q-Q-MS)进行比较,仪器检测灵敏度要优于三重四极质谱仪;在0～2000μg/L。浓度范围内线性相关不及三重四极质谱仪的分析结果,但在0～200μg/L浓度范围内相关性相近。     

基于UPLC-Q-TOF MS鉴定复方香薷水化学成分

采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF MS）技术对中药复方香薷水的化学成分进行快速分析鉴定。通过色谱峰响应程度和分离效果优化复方香薷水的前处理方法和仪器条件;采用Agilent Phe Hex(150 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱进行分离,以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 mL/min;通过正、负两种离子模式采集复方香薷水的质谱数据,得到精确质量数和二级碎片,结合对照品、Pubchem、安捷伦中药化合物质谱数据库和文献报道等信息对其化合物进行分析鉴定。鉴定出复方香薷水的112个成分,其中黄酮类22个,苯丙素类20个、有机酸18个、萜类14个、生物碱11个、氨基酸5个以及其他类型化合物22个。该研究全面阐述了复方香薷水的化学物质基础,为其质量控制和药效物质研究提供了理论依据。     

UPLC-Q-TOF/MS分析不同比例丹参配伍藜芦毒性生物碱变化规律

利用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术研究不同配伍比例的丹参藜芦的化学指纹图谱, 并分析毒性生物碱在不同比例配伍混煎前后溶出量的变化. 同时利用小鼠的急性毒性实验来考察配伍后的毒性变化规律. 结果显示在正离子模式下, 各配伍组(A～H)样本之间的差异能得到明显区分, 并结合Loadings图谱和数据库确定了配伍化学指纹图谱中的17种藜芦生物碱毒性成分, 当固定藜芦用量为LD₅₀且藜芦比例大于丹参时, 藜芦定、伪介芬胺等生物碱溶出高于或与藜芦单煎液相当, 但随着丹参比例增加, 上述生物碱溶出呈逐渐下降趋势, 当丹参比例大于藜芦时, 生物碱溶出低于藜芦单煎液. 不同比例丹参藜芦配伍急性毒性实验毒性变化规律与上述生物碱含量的变化趋势吻合, 表明上述毒性生物碱可能是藜芦与丹参特定比例配伍后毒性增强主要化学标志物.     

基于UPLC-Q-TOF MS技术的陈皮陈化年份鉴别方法研究

建立了一种陈皮陈化年份的鉴定方法。利用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)对陈皮的主要化学成分进行鉴定,研究了不同陈化年份陈皮样品中化学成分的变化规律,结合统计分析方法发现了6个同分异构体在陈皮陈化过程中的相互转化规律。结果表明,6个分子式为C₂₀H₂₂O₇的五甲氧基黄烷酮同分异构体中,前3个化合物含量随年份的增加而降低,后3个化合物含量随年份的增加而升高,其比值与陈化年份具有显著的线性关系。利用该6个特征性成分的转化因子(S),建立了陈皮陈化年份计算模型,相关系数(r²)为0.90。训练集样品的年份预测误差均不大于2年。盲样测试结果中90.0%样品的年份预测误差不大于2年。该方法准确可靠,为陈皮陈化年份的鉴定提供了科学依据。     

基于UPLC-Q-TOF MS的广佛手指纹图谱建立及炮制前后成分差异分析

采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)建立生、制广佛手的指纹图谱,并通过化学模式识别方法分析两者的差异成分.采用Agilent Poroshell 120 EC-C18(3.0 mm×150 mm×2.7μm)色谱柱进行分离,以0.1％甲酸+5 mmol/L乙酸铵水溶液-乙腈为流动相进...     

血清中皮质醇成分分析标准物质的研制

皮质醇是一种重要的肾上腺皮质激素,同时也是一种重要的临床诊断标志物,为保证检测结果具有溯源性、可比性和准确性,研制了血清中皮质醇成分分析标准物质。对血清样品进行分离、过滤、混匀、分装,进行均匀性检验、稳定性考察和定值分析。采用超高效液相色谱–同位素稀释串联质谱(UPLC–ID–MS/MS)法进行定值,混合健康男性血清和健康女性血清中皮质醇的定值结果分别为107.63 ng/g(U=1.44 ng/g,k=2),92.24 ng/g(U=1.68 ng/g,k=2)。采用CCQM–K63a比对样品对定值方法进行验证,测量结果在该比对参考值的不确定度范围内。研制的皮质醇成分分析标准物质符合国家一级标准物质技术要求。     

UPLC-Q-TOF/MS在烘焙食品中羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸检测中的应用

建立了烘焙食品中羧甲基赖氨酸(CML)和羧乙基赖氨酸(CEL)的UPLC-Q-TOF/MS检测方法。烘焙食品经脱脂、还原、沉淀蛋白、酸水解释放出CML和CEL,使用FMOC-Cl柱前衍生和HLB小柱固相萃取净化后,采用UPLC-Q-TOF/MS检测。CML和CEL在1~700 ng/m L浓度范围内均呈良好的线性关系,线性回归系数r0.999。CML和CEL的检出限均为0.1 mg/kg;回收率为94.4%~108.3%;相对标准偏差(RSD,n=6)为0.4%~6.2%。该方法定性、定量准确,灵敏度高,能很好地应用于烘焙食品中CML和CEL的检测。     

高效液相色谱法测定血清中的皮质醇和皮质酮

皮质醇(F)和皮质酮(B)是人体内的两种肾上腺糖皮质激素。测定其在血液中的含量可以为研究糖皮质激素与人体的各种代谢及组织器官功能的关系提供必备的数据。以前测定血清中皮质醇、皮质酮常采用放射免疫法和荧光分光光度法等。本法采用高效液相色谱法测定,显示出快速、简便和准确的特点。     

血清中葡萄糖的测量比对-ID-LC—MS／MS法

利用同位素稀释-液相色谱-质谱法-（ID-LC-MS／MS）准确测定血清中葡萄糖含量。以[13C6]葡萄糖为内标,用重量法准确地与血清混合,离心沉淀蛋白后在碱性条件下与1．苯基-3-甲基-5-吡唑酮反应,以ZORBAXRX-SIL色谱柱分离,以乙腈-水（体积此25：75）为流动相,使用电喷雾三重四极杆串联质谱多重反应监测模式（MRM）测定,同位素稀释的括号法进行定量。采用美国NIST的血清标准物质SRM965b进行了确证,并用该方法参加JCTLM关于血清中葡萄糖含量的国际比对,测量值与均值的相对偏差分别为1．1％（A样）．1．8％（B样）,结果在等效范围内。     

基于核苷类化合物HILIC-ESI-TOF/MS分析的海洋动物药指纹图谱方法

探讨了核苷类化合物指纹图谱用于不同海洋动物药真伪鉴别的可行性, 为贵重动物药的鉴别提供了一种新方法. 采用亲水色谱-电喷雾飞行时间质谱(HILIC-ESI-TOF/MS)对不同海洋动物药中的16种核苷类化合物进行分析, 构建了基于16种核苷类化合物的特征指纹图谱, 结合相似度分析和聚类分析, 用于不同海洋动物药的鉴别. 结果表明, 基于核苷类化合物HILIC-ESI-TOF/MS分析的指纹图谱能反映不同海洋动物药各自的固有特征, 结合相似度分析和聚类分析可实现对不同海洋动物药的正确区分. 说明核苷类化合物指纹图谱有望成为动物药鉴别的新方法.     

分光光度法测定海洋生物体中的铜

本文提出采用浓HNO_3-H_2O_2在低温常压下消化海洋生物样品的新方法,其特点是使用试剂简单,操作方便,节省时间,方法可靠。还介绍使用正交设计法试验了影响测铜灵敏度的主要因素。认为测定样品时,选择pH8.0～8.5、隐蔽剂10ml、铜试剂5 ml为最佳条件。本法还分别作了方法验证,结果良好。     

纳米纤维固相萃取柱萃取-高效液相荧光法分析头发皮质醇

采用基于纳米纤维固相萃取的高效液相色谱-荧光测定(HPLC-Flu)法测定头发中的皮质醇水平.以新型纳米纤维萃取柱(PFSPE)提取头发样本浸出液,用100 μL乙醇洗脱,再加入230μL浓H2SO4反应2 min,反应物加水混合后用PFSPE柱提取,最后用50 μL甲醇直接洗脱后注入色谱体系进行分析.此方法的检出限为0.05 ng/g( S/N=3),日内精密度和日间精密度分别低于6.8％和8.9％,平均方法回收率为88.9％.本方法提取过程简便、快速、环保,而且可以准确测定头发样本中的皮质醇水平.     

反相高效液相色谱法测定海水鱼组织中的氟甲喹残留

建立了测定美国红鱼和鲈鱼血浆、肌肉和肝脏组织中氟甲喹含量的反相高效液相色谱(RT-HPLC)法.方法以乙腈-四氢呋喃-0.02 mol/L H3PO4=16∶12∶72(体积比)为流动相,C18柱,流速为1.2 mL/min,紫外检测波长为324 nm.氟甲喹在0.05～10μg/mL范围内呈线性关系,相关系数为0.9...     

原子吸收光谱法测定药物及血清样品中左旋多巴

建立了原子吸收光谱法测定左旋多巴含量的新方法。研究表明:在SCN-存在下,控制溶液pH=6.0,左旋多巴中的羟基(-OH)能使Cu(Ⅱ)还原成Cu(Ⅰ),生成的Cu(Ⅰ)与SCN-反应生成CuSCN沉淀,通过测定溶液中剩余Cu(Ⅱ)的吸光度,可以间接测定左旋多巴的含量。方法线性范围为0.08～6.80μg/mL,相关系数R=0.9998,检出限(3s/k)为0.038μg/mL。该法可用于药物及血清中左旋多巴含量的测定。     

电致化学发光法高灵敏度测定血清中的辛可宁

利用金电极为工作电极,研究了辛可宁-Ru(bpy)2+3体系的电致化学发光行为。研究表明,辛可宁对Ru(bpy)2+3在电极表面的电致化学发光具有显著的增强作用,据此建立了一种高灵敏度测定辛可宁的电致化学发光分析方法。考察了硼酸-硼砂缓冲溶液的浓度、p H值、联吡啶钌浓度、光电倍增管电压等参数对实验的影响。在12 mmol/L硼酸-硼砂缓冲溶液(p H 9.0)中,辛可宁浓度的对数lgc在3.0×10-9~6.0×10-6mol/L范围内与Ru(bpy)2+3的电致化学发光强度变化值(ΔI)呈线性关系,检出限(S/N=3)为1.76×10-10mol/L。应用此法对血清中辛可宁的浓度进行测试,加标回收率为102.1%~109.5%。     

Rapid Determination of Paracetamol in Blood Serum Samples by First-Derivative UV Absorption Spectroscopy

Abstract

A rapid method for the determination of paracetamol in human blood serum using first-derivative UV absorption spectroscopy is described. It involves no sample pretreatment, extraction or derivatization procedures, other than a standard deproteinizing technique with trichloroacetic acid. The results can be applied to both therapeutic and toxic levels of paracetamol.     

国际比对CCQM-P77a血清中氢化可的松测定

近年来,临床检验的量值溯源问题日益受到国际上的广泛关注.欧洲议会和理事会于1998年10月签署的关于体外诊断器具的指令(Directive 98/79EC)[1]已于2003年12月正式生效,该指令的一项关键内容就是"校准物和(或)质控物的定值,必须通过现有的较高级别的参考测量程序和(或)参考物质保证其溯源性".     

Cloud Point Extraction of Serum Albumin and Its Spectrophotometric Determination in Serum Samples

Abstract

A new method based on the cloud point extraction (CPE) separation and ultraviolet spectrometry determination was proposed for the determination of albumin. When the system temperature is higher than the cloud point extraction temperature (CPT) of the mixed surfactant of p‐octyl polyethyleneglycolphenyether (Triton X‐100) and sodium dodecyl sulfate (SDS), serum albumin could be extracted into surfactant‐rich phase. The main factors affecting the cloud point extraction were investigated systematically. Under the optimized conditions, the determination limit for serum albumin as low as 0.18 µg/mL was obtained by preconcentrating a 10 mL sample solution, and the relative standard deviation (n=10, c=40.0 µg/mL) was 3.77%. The proposed method was applied to the determination of albumin in serum samples. The results obtained by this method were in good agreement with coomassie brilliant blue (CBB).     

Anti‐Clostridium tetani Antibody Determination in Serum Samples by Amperometric Immunosensing

An electrochemical (EC) immunosensing assay for anti‐Clostridium tetani antibody determination in serum has been developed. The antigen tetanus toxoid was immobilized on superparamagnetic nanobeads. The immunoreaction occurred in Eppendorf minitubes. The anti‐tetani antibody was incubated in the presence of the toxoid functionalized nanobeads, then reacted with horseradish peroxidase‐labeled anti‐IgG. The resulting immunobeads were retained onto the carbon paste working electrode with a magnet. Hydroquinone served as redox label. The level of anti‐Clostridium tetani antibody in guinea pig serum samples was determined by amperometry using a carbon based screen‐printed electrode (cSPE) housed onto a magnetic support. The EC response was proportional to the logarithm of the antibody concentration comprised between 0.0046 IU/mL and 0.175 IU/mL with a limit of detection of 0.0046 IU/mL. In order to minimize the matrix effect, the standard addition method was applied. The assay was validated by comparing the EC immunosensing data with those obtained by applying the ELISA method described in the European Pharmacopoeia.