新型含硫半抗原的晶体结构、构象分析及其电性研究

分析了一种新设计的含硫半抗原N-苯甲酰牛磺酰基苯丙氨酸的晶体结构,确证了其中的S原子为四面体构型,可以用来模拟酰胺键水解的过渡态,并且发现了几个分子间氢键.运用分子力学程序MOLGEN对此化合物进行了优化,并与含P半抗原进行了比较.然后又比较了N_S_C键和N_P_C键的旋转构象分析图,发现N_S_C键只有一个低能构象.最后用MOPAC程序(AM1参数)计算了S原子周围的电荷分布.发现S原子周围的电荷分布与P原子周围的电荷分布相似.     

疏水腔修饰法及高活力GPX抗体酶的研究：Ⅱ.半抗原及全抗原的制备和表征

自Jencks抗体酶的概念出现以来，已有80多种化学反应被证实可以用抗体来催化［‘”j．一般合成抗体酶的方法是通过选择合适的过渡态类似物来诱导抗体酶，这种方法产生的抗体酶大部分活力很低，我们曾对3个具有谷脱甘肽（GSH）过氧化物酶（GPX）特性的含硒抗体酶进行了报道「”‘a，半抗原是，2，3是根据天然抗体酶活性中心的结构设计合成的，它们对GPX的底物GSH具有不同程度的疏水修饰．随着半抗原疏水程度的增加，通过单抗技术和化学修饰而得的3个抗体酶的相应活力分别为兔肝GPX的0．2，1·6和8．5倍．在上述结果基础上，我们提出疏…     

γ-羟基膦酸酯诱导梭曼水解单链抗体酶

新型半抗原３－羟基－１－对硝基苯基甲磷酸单频哪基酸酯（Ｐ_６），与血蓝蛋白结合后（Ｐ_６－ＬＰＨ）免疫小鼠，从小鼠脾细胞出发构建单链抗体ｃＤＮＡ文库和噬菌体表面呈现文库．用固相化抗原 Ｐ_６－ＢＳＡ对噬菌体抗体库进行了 ４轮淘选，从中筛选到１１株对梭曼水解有催化作用的单链抗体.对其中一株（ＥＰ_６）进行可溶性抗体的制备，经凝胶过滤和离子交换层析纯化后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ为 ３１ｋｕ的单一条带．酶动力学常数测定其对梭曼水解的催化常数为ｋ_（ｃａｔ）＝１９８ｍｉｎ~(－１)，Ｋ_ｃａｔ／Ｋ_ｕｎｃａｔ＝１２２ ４１９．单链抗体酶ＥＰ６_０．１６ｍｇ·ｍＬ~(－１)与梭曼 ０． １３２ ｍｍｏｌ· Ｌ~（－１）在 ２０℃共温１ｈ后给小鼠背部皮下注射相当于１． １个致死剂量的梭曼， １９只小鼠全部存活，而对照组 １４只小鼠 ３０ ｍｉｎ内全部死亡．小鼠体内抗毒实验显示惊厥潜伏期及死亡时间延长．     

甲状腺素脱碘抗体酶制备半抗原和全抗原的合成与单克隆抗体的制备

铜离子;衍生物;甲状腺素脱碘抗体酶制备半抗原和全抗原的合成与单克隆抗体的制备     

邻苯二甲酸二丁酯免疫检测 Ⅰ.人工抗原的制备及表征

通过保留丁酯基结构和在芳环上引入氨基取代基合成了一种邻苯二甲酸二丁酯半抗原衍生物4-氨基邻苯二甲酸二丁酯，通过1^H NMR、IR和UV确证了结构，其中4-硝基邻苯二甲酸二丁酯的2个紫外吸收峰分别为：λ1=212 nm，λ2=258 nm；4-氨基邻苯二甲酸二丁酯的2个紫外吸收峰分别为：λ1=226 nm，λ2=288 nm。半抗原衍生物通过重氮化反应与BSA偶联，得到人工抗原，经荧光光谱（λex=307nm，λem=468nm）、体系颜色变化和免疫实验确证偶联成功，抗原结合比为13：1，为进一步的抗体制备和免疫分析提供可靠的免疫原。     

N－羟甲基中卟啉诱导产生抗体的酶学性质研究

以Ｎ－羟甲基中卟啉为半抗原，通过动物免疫、细胞融合等技术筛选得到的细胞株１１Ｄ~１，该细胞株产生的抗体具有结合铁中卟啉的能力，且表现出过氧化物酶活力。进一步研究表明，该抗体对半抗原及铁中卟啉的亲和力分别为：１．１×１０~（－６）ｍｏｌ／Ｌ和２．１×１０~（－６）ｍｏｌ／Ｌ；抗体－铁中卟啉复合物催化反应时，对底物过氧化氢的Ｋ_ｍ＝１３．０ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｋ_（ｃａｔ）＝８６ｍｉｎ~（－１），与自然催化速度相比，活力提高１．８×１０~４（ｍｏｌ／Ｌ）~（－１）。     

游离甲状腺素半抗原及人工抗原的合成及鉴定

选择游离甲状腺素(FT4)的羧基官能团为修饰位点,先用二碳酸二叔丁酯(Boc2O)保护氨基,再用HATU作为缩合剂与炔丙基胺通过酰胺键缩合,将端炔基引入FT4,然后在微量亚铜盐催化下与叠氮戊酸发生"Click Chemistry"反应,合成以三唑杂环作为"连接臂"的FT4人工半抗原(FT4H)。采用N-羟基琥珀亚胺活性酯法,将半抗原(FT4H)与牛血清白蛋白(BSA)、钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,合成免疫原(FT4H-BSA)和包被原(FT4H-KLH),免疫原(FT4H-BSA)的紫外吸收图谱相对于FT4H和BSA有明显差异,表明偶联成功,并计算得到偶联比为12∶1。用FT4H-BSA(2×10!3g/mL,0.1 mg/只)免疫6～8周龄的Balb/c小鼠,5次免疫后,经尾部取血,获得抗FT4血清,采用ELISA间接法测定抗体血清的效价可达1.28×105。结果表明,含有较强决定簇(三唑环)的连接臂未对抗体血清识别FT4产生较大的干扰,为制备小分子的人工抗原提供一种新的方法。     

新型含磷抗原的合成

肽键的水解在生命化学中起着重要的作用, 利用人工合成的抗原诱导具备天然肽酶活性的抗体酶具有深远意义, 因而众多的工作集中于催化酰胺键和肽键水解的抗体酶的研究. 这些工作通常是以Paulling的过渡态理论为指导, 以磷为中心原子设计合成类似肽键或酰胺键水解过渡态结构的过渡态类似物. 然而按照这种方法得到的抗体酶很少具有肽酶活性. 金声等[1]曾以CPA的肽底物马脲酰苯丙氨酸为模型, 以四面体过渡态类似物为基础, 用硫代替磷, 设计合成了新型半抗原[2]. 制备了相应的具有活性的抗体酶, 然而这样的结果尚不能说明以硫原子代替磷原子的方法的优越性, 因此有必要以磷原子为中心原子合成出一个类似抗原, 将其诱导出的抗体相互比较, 才能得到有意义的结论. 本文报道了含磷抗原的合成, 合成路线如下:     

Synthesis and Characterization of Specific Haptens Used to Generate Abzyme with Glutathione Peroxidase Activity *

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＴｈｅｇｒｅａｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎａｂｚｙｍｅｈａｓｂｅｅｎｍａｄｅｄｕｒｉｎｇｔｈｅｌａｓｔｄｅｃａｄｅ［１］．Ｔｈｅｋｅｙｔｏｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆａｂｚｙｍｅｉｓｔｈｅｄｅｓｉｇｎｏｆｈａｐｔｅｎ．Ｏｎｔｈｅ...     

噻虫嗪单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法的建立

通过化学修饰合成了噻虫嗪人工半抗原,采用碳二亚胺法将该半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,成功制备了分子结合比合理的免疫原和包被原。经过免疫原免疫6周龄Balb/c小鼠、PEG介导免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞的融合和阳性杂交瘤细胞的筛选和克隆化,获得了效价高达1∶6.4×105的抗噻虫嗪单克隆抗体,抗体亚类为IgG1型。优化了ELISA实验条件,建立了基于单克隆抗体技术的噻虫嗪残留间接竞争ELISA方法。本方法的抑制中浓度(IC50)为0.0255mg/L,检测灵敏度(IC20)为0.0022mg/L,检出限(IC10)为0.001mg/L。除噻虫胺外,该抗体与其它噻虫嗪结构类似物无交叉反应。以自来水为基质的噻虫嗪添加回收实验显示,0.01,0.5和10.0mg/L添加水平的回收率均大于75%,且各添加水平重复测定8次的相对标准偏差均小于8%,说明所建立的间接竞争ELISA准确度高,重复性好,适合水中噻虫嗪残留的检测。     

The Synthesis of Neodymium Complexes with Polymers Containing Thiol and Sulphoxide and Their Catalytic Activities

Introduction Polymers containing thiol and sulphoxide which have active—SH and—SO groups respectively, have wide application to biological, pharmaceutical, industrial and other chemical field and—SH and—SO groups are easy to form complexes with metals, so they have aroused an increasing interest of many authors. A large number of functional resins and corresponding metal complexes have been synthesized.     

玉米赤霉醇人工抗原合成及其多克隆抗体的制备

对玉米赤霉醇(ZER)16-OH进行改造,设计合成了模拟玉米赤霉醇特征结构的半抗原———ZER-16-羧丙基丁醚。用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA连接,用于免疫新西兰大白兔,制备的抗血清效价达1∶102 400。基于活性酯法合成的包被抗原建立了CI-ELISA检测方法,该法对玉米赤霉醇检测的线性范围为18.39~1744.70 ng/mL,检出限为8.61 ng/mL。     

Selection,Expression and Purification of Human Abzyme Containing Selenium with Type Ⅰ Thyroxine Deiodinase Activity

Single-chain fragment variable(ScFv) antibodies with the substrate binding sites were obtained by repetitive selections from a semi-synthetic phage display antibody library against two haptens——thyroxine(T4) and O-methyl-T4(O-CH3-T4).The positive phage clones were determined by ELISA and then cloned into vector pET30a(+).The recombined plasmids were identified by DNA sequence analysis and transformed into E.coli BL21(DE3).The expressed proteins were isolated,purified,identified by Western blot analysis,and ...     

去甲氯胺酮半抗原及其全抗原的合成与鉴定

在低温条件下,去甲氯胺酮与琥珀醛酸反应,合成了半抗原羧基-去甲氯胺酮,电喷雾质谱鉴定结果表明,目标半抗原合成成功;通过碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白偶联制备人工抗原,红外光谱法鉴定结果表明,人工抗原合成成功,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定表明去甲氯胺酮半抗原与牛血清白蛋白的偶联比为11:1。经动物免疫,获得高效价特异性多克隆抗体,抗血清效价可达5.12×104。     

磷酰化组氨酸特异性抗体的制备与应用

以4-碘吡唑和亚磷酸二乙酯为初始原料,经3步反应合成了新型的磷酰化组氨酸结构类似物,并以其为半抗原制备了磷酰化组氨酸特异性抗体(Anti-pHis).采用酶联免疫吸附(ELISA)、斑点印迹(Dot blot)和免疫印迹(Western blot)实验等方法对Anti-pHis的特异性进行了检测.结果表明,Anti-pHis对组氨酸磷酰化蛋白表现出优异的亲和力和选择性识别能力,并可应用于微生物细胞裂解液中组氨酸磷酰化蛋白的检测.     

MSU-SMFI和MCM-41的催化裂化及烷基化活性比较

以MFI沸石前驱体作为基本结构单元组装介孔硅铝分子筛MSU-S_MFI. XRD和氮气吸附数据表明MSU-SMFI具有类似MCM-41的六方排列介孔孔道结构,而且其织构参数和以传统方法合成的含铝MCM-41也大体相当.NH₃-TPD显示由沸石前驱体组装的MSU-S_MFI较硅铝比相同的含铝MCM-41介孔分子筛的固体酸量显著提高.MSU-S_MFI上的异丙苯催化裂化转化率比含铝MCM-41提高31％, 1,3,5-三异丙苯在MSU-S_MFI上也发生了更深的裂解. MSU-S_MFI上萘的叔丁基化的转化率比含铝MCM-41提高了15％.以沸石前驱体作为基本结构单元是提高介孔分子筛固体酸性的有效方法.