镥铕共发光时间分辨荧光免疫法检测嗜水气单胞菌

建立了共发光时间分辨荧光免疫检测嗜水气单胞菌的新方法,以嗜水气单胞菌菌株B11包被微孔板,与Eu3+标记的兔抗IgG免疫反应后,加入含有共发光离子Lu3+的解离增强剂,由于Eu3+和Lu3络合物的共发光效应,时间分辨荧光大大增强,有效放大了检测信号,提高了检测灵敏度.优化了共发光体系的条件,方法的检出限为1.0×103...     

时间分辨荧光免疫分析高灵敏检测嗜水气单胞菌

建立了生物素-链霉亲和素时间分辨荧光免疫分析（BAS-TRFIA）高灵敏检测嗜水气单胞菌的新方法.以兔抗IgG包被微孔板,加入嗜水气单胞菌菌株B18和生物素化IgG,生成的夹心复合物用Eu³⁺-链霉亲和素作为示踪物,Eu³⁺可与离解增强液形成时间分辨荧光（TRF）,通过TRF值对病原菌定量.方法的检测限为1.0×10² cfu/mL,在1.0×10~1.0×10⁶ cfu/mL范围内线性良好,相关系数0.9716.用该法检测时,不同来源的嗜水气单胞菌以及其它气单胞菌均呈阴性.板内和板间的变异系数分别小于5.00%和9.00%.所有相关检测试剂37℃恒温放置6 d后,检测性能无明显改变.对60份人工感染的美洲鳗鲡组织样品,包括肝、肾、肠、鳃和肌肉等组织进行检测,阳性检测率为98.33%.结果表明,BAS-TRFIA法检测嗜水气单胞菌,灵敏度高、特异性好、操作简便,该方法为水产养殖病原菌检测提供了新的思路.     

脂溶性铕螯合物的水溶化及其荧光信号增强

以本文合成的脂溶性的含丙烯酸配体的铕离子螯合物为聚合单体,以合成的具有聚乙二醇单甲醚结构单元的大分子为引发剂,合成了以聚乙二醇单甲醚为水溶端、铕离子螯合物的聚合单元为脂溶端的两亲性嵌段荧光共聚物,并在超声波作用下制备了该共聚物的水溶性荧光胶束纳米粒。对此纳米粒进行了TEM、粒径分布和荧光光谱表征,同时研究了荧光信号增强、时间稳定性、光漂白性能和荧光的酸碱稳定性。结果表明,该水溶性的铕荧光纳米粒的粒径分布均一(约298nm),荧光信号增强作用明显,对紫外光和酸碱的抵抗能力显著增强。本文实现了脂溶性铕螯合物的水溶化及其荧光信号增强,预示着铕荧光螯合物纳米粒可以直接用于生物标记,并具有高灵敏生物分析的应用潜能。     

NaYF_4：Yb,Er上转换荧光纳米粒子的表面修饰及其在免疫分析中的应用

稀土掺杂上转换荧光纳米材料因其近红外区激发,可见光区发射的特殊发光性能,在生物标记方面具有独特优势,可大幅度降低荧光背景.β-NaYF4：Yb,Er是目前已知的发光效率最高的上转换荧光纳米材料之一,已在生命分析及生物成像分析领域展现出了广阔的应用前景.然而,由于现有β-NaYF4：Yb,Er制备工艺多是在高温条件下于高沸点有机溶剂中反应制得,所得产品在水溶液中的分散性差,限制了其在生命分析中的广泛应用.本文采用聚丙烯酸（PAA）配体交换反应,对表面包覆油酸基团的疏水β-NaYF4：Yb,Er纳米粒子进行了有效的表面修饰.表面修饰后,上转换荧光纳米粒子表面的PAA具有众多游离羧基,使其在水溶液中具有良好的分散性.同时,由于羧基的存在,使得带有氨基的生物分子能够通过化学交联反应结合到纳米粒子表面.本文以PAA表面修饰后的β-NaYF4：Yb,Er纳米粒子为荧光探针,以磁珠作为免疫反应的载体,成功构建了一种新型免疫传感器,对模型靶标分子羊抗人IgG进行了灵敏检测.磁珠表面固定兔抗羊IgG,PAA修饰的β-NaYF4：Yb,Er纳米粒子表面连接人IgG,当样品中存在羊抗人IgG时,便会在磁珠表面形成（兔抗羊IgG-羊抗人IgG-上转换荧光纳米粒子标记的人IgG）三明治式免疫复合体,通过磁分离除去未反应的组分,在980nm激光激发下测定免疫复合体的上转换荧光强度,即可实现靶标分子的高灵敏分析,可检测到低至0.1ng/mL的羊抗人IgG.同时,以磁珠为载体的免疫复合体也可通过激光扫描共聚焦荧光显微镜进行荧光成像分析,背景荧光信号低,成像质量高.实验结果表明,PAA修饰的β-NaYF4：Yb,Er上转换荧光纳米粒子是一种理想的生物标记材料,有望在生物传感及生物成像分析领域获得广泛应用.     

罗丹明B硅纳米粒子探针及其在蛋白芯片检测中的应用

本工作将罗丹明B分子通过共价结合的方式成功地包裹在二氧化硅纳米粒子中,制备的纳米粒子荧光强度和罗丹明B分子相比提高了1000倍.对此硅纳米荧光粒子进一步进行了链亲和素修饰,成功制备了可特异性结合生物素修饰蛋白的纳米荧光检测探针.以反相蛋白质芯片检测为模式,研究了此探针对微量蛋白的检测性能.实验中将不同微量浓度的人IgG固定于醛基修饰玻璃片表面,并加入生物素标记的抗人IgG,结果显示在800fg～100pg含量的微量蛋白检测中此纳米荧光探针具有良好的线性关系,最小蛋白检测量可达100fg.与商品化亲和素偶联cy3荧光探针对比分析发现,本方法制备的荧光探针对蛋白的检测灵敏度可提高8倍,且具有成本低,生物修饰简单等优点.     

纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的制备及表征

采用还原法制备了尺寸大小分别为4、14、30、41 nm的纳米金,优化了不同尺寸的纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的制备条件。采用紫外-可见吸收光谱、透射电子显微镜和化学发光的方法对该探针进行了表征。结果表明纳米金兔抗猪IgG化学发光探针具有很好的单分散性和稳定性。本研究为纳米金兔抗猪IgG化学发光探针的应用奠定了基础。     

稀土掺杂无机纳米晶及其时间分辨荧光生物检测应用

时间分辨荧光生物标记作为一种灵敏的非放射性标记技术,在科研及医疗机构已获得广泛应用.传统的时间分辨荧光标记以稀土螯合物作为分子探针,存在着光化学稳定性差、长期生物毒性以及价格昂贵等缺点.稀土掺杂无机纳米晶因其优异的光化学与光物理性能,是目前普遍看好且有望成为替代稀土螯合物的新一代时间分辨纳米荧光探针.利用稀土纳米探针的...     

金纳米微粒表面能量转移及半胱氨酸的高灵敏度高选择性分析法

根据荧光染料在金纳米粒子表面的能量转移,本文建立了一种具有高灵敏和高选择性半胱氨酸分析方法.研究表明,通过静电作用吸附在柠檬酸根包被的金纳米粒子表面的阳离子荧光染料如罗丹明B分子在受光激发时,发生从荧光染料到金属纳米微粒的能量转移,导致荧光染料的荧光猝灭.但当体系中存在半胱氨酸时,由于半胱氨酸与金纳米粒子之间具有更强的共价作用,罗丹明B分子远离金纳米粒子表面,降低了能量转移效率,使得罗丹明B的荧光得到恢复.恢复的荧光强度与0.025～4.5μmol/L半胱氨酸呈很好的线性关系,检测限为8.0nmol/L(3σ),而其他十九种基本氨基酸的响应非常微弱.     

一种基于纳米二氧化硅增强凝集反应的压电免疫传感器

本文提出了一种基于抗体包被纳米粒子的简单快速的压电免疫凝集法,用于蛋白质检测。该方法原理是利用羊抗人IgG（G-anti-hIgG）包被的二氧化硅（或金）纳米粒子和人IgG（hIgG）发生免疫凝集反应而使得压电晶体频率发生改变进行测定。当凝集反应发生时,修饰在探针表面的G-anti-hIgG通过hIgG与G-anti-hIgG包被的纳米粒子结合,将质量效应和粘弹性因素叠加作用于压电晶体。结果表明这使得背景值大幅减小而信号明显增强。另外,对修饰后了抗体及结合免疫复合物的探针表面进行了SEM表征,对使用聚乙二醇作为增敏剂和实验最佳离子强度、pH值进行了优化选择。该传感器检测hIgG线性范围是0.26-16.7 mg mL-1,最低检出限为84 ng mL-1。     

纳米Ag@SiO_2核壳结构的表面等离子体共振效应对铕配合物的荧光增强作用(英文)

分别制备了二氧化硅壳层厚度为10、25和80 nm的三种Ag@S O2纳米粒子,合成了铕与不同比例苯甲酸根(BA)的配合物、铕与1,10-邻菲罗啉(phen)及2,2′-联吡啶(bpy)的配合物,并对其进行表征.表征结果推测配合物的组成为Eu(BA)nCl3-n·2H2O(n=1,2,3)、Eu(phen)Cl3·2H2O和Eu(bpy)Cl3·2H2O.配合物的荧光光谱显示,在加入Ag@Si O2纳米粒子后,复合物的荧光强度有不同程度的增加,这可能是由于表面等离子体共振造成的.不同硅壳厚度的Ag@Si O2纳米粒子的荧光增强顺序是25 nm80 nm10 nm,这表明二氧化硅核壳厚度约25 nm时有较强的表面等离子体共振效应.此外,在这些复合物中,Eu(phen)Cl3·2H2O复合物的增强效果是最强的,而Eu(BA)nCl3-n·2H2O的增强效果是最弱的.在三个苯甲酸铕配合物中,Eu(BA)3·2H2O的增强效果最弱,其他两个苯甲酸铕复合物增强效果相对较好.原因可能是含氮配合物(Eu(phen)Cl3·2H2O和Eu(bpy)Cl3·2H2O)可以和Ag@SiO2更好地成键,而苯甲酸铕配合物和Ag@Si O2纳米粒子的作用相对较弱.Ag@SiO2纳米粒子有望应用于增强稀土材料的发光.     

卵磷脂纳米反应器中Eu2O3纳米粒子的合成及机理探讨

利用大豆卵磷脂在水中自发形成的囊泡作为纳米反应器得到含有磷脂的铕前驱体,经灼烧得到Eu2O3 纳米粒子.对该含磷脂的铕前驱体进行荧光光谱分析、傅立叶变换红外分析(FTIR)以及热分析(TG-DTA),结果显示,在纳米粒子的制备过程中Eu3+ 与大豆卵磷脂络合形成了Eu-O-P键;该前驱体经720℃高温灼烧后得到的纳米样品经XRD分析发现EuPO4 相的存在,并确认了Eu3+ 通过磷氧键与卵磷脂的亲水头部相结合.经过以上分析,对该系统中纳米粒子的形成机理有了初步的认识.     

纳米金末端修饰的时间分辨荧光组装

研究了纳米金末端修饰一种具有时间分辨荧光特性的化学组装层，其中时间分辨荧光的调控通过在纳米金上配体选择性配合与解离铕离子来实现。首先合成了配体化合物BSPDA(4，7-二(巯苯基)-1，10-菲罗啉-2，9-二羧酸，4，7-bis(sulfhydrylphenyl)-1，10-phenanthroline-2，9-dicarboxylic acid的英文简写)，发现它能与铕(Ⅲ)离子盐形成配合物，经紫外光激发可发射出铕的特征谱线，并研究了铕配合物的荧光特性与寿命。同时，在玻璃片基底上组装巯基硅烷，然后沉积纳米金，再将BSPDA组装键合在纳米金上固定。根据配合与解离作用从而将铕离子捕获与释放，获得选择性沉积的时间分辨荧光调控层。研究了在纳米金末端铕配合物组装层的荧光特性，发现纳米金上对铕(Ⅲ)的非特异性吸附与BSPDA对铕(Ⅲ)的选择性配位吸附的荧光强度有较大的差别。     

新型铕配合物二氧化硅荧光纳米粒子DPPDA-Eu~(3+)/SiO_2的制备与表征

本文首先合成配位体4,7-二苯基-1,10-菲罗啉-2,9-二羧酸(DPPDA,C_(26)H_(16)N_2O_4)及铕配合物DPPDA-Eu~(3+)((C_(26)H_(16)N_2O_4)_2Eu·15H_2O),然后采用反相微乳液法,通过正硅酸乙酯和3-氨丙基三甲氧基硅烷的共水解、聚合作用成功制备出表面带氨基的二氧化硅包裹铕配合物DPPDA-Eu~(3+)的核壳型荧光纳米颗粒DPPDA-Eu~(3+)/SiO_2。利用透射电子显微镜、荧光光谱、紫外-可见光谱等手段进行表征,并进行了光稳定性、荧光泄露与氨基测定等实验,结果表明所制备的纳米粒子呈规则球状,大小均匀,粒径为80±8nm,具有良好的单分散性和光稳定性,不易发生荧光分子从二氧化硅壳层中泄露,纳米粒子表面带有氨基,可不需要进行表面修饰而直接与生物分子反应。该纳米粒子可望作为一种新型的稀土荧光探针应用于时间分辨荧光免疫分析、生物芯片及生物传感器等。     

毛细管电泳免疫分析法研究鼠IgM、兔抗鼠IgG及其免疫复合物

根据鼠IgM能与兔抗鼠IgG发生特异性免疫反应,采用毛细管电泳免疫法分析鼠IgM及其免疫复合物.以Tris为电解质,探讨了缓冲溶液浓度和pH值、进样时间、进样电压等因素对鼠IgM、兔抗鼠IgG及其免疫复合物分离的影响.在缓冲体系浓度为40 mmo1·L-1 TAE、1.0 mmo1.L-1EDTA(pH为8.5),进样时间为12 s,进样电压为18 kV的条件下,鼠IgM、兔抗鼠IgG及其反应形成的免疫复合物获得了很好的分离.     

金自组膜免疫芯片的研制

用光刻掩膜真空沉积技术在石英晶片上沉积上一层 8列× 6行的金膜阵列 ,用金表面N 乙酰半胱氨酸分子自组装及EDC偶联技术将人IgG、兔IgG和鼠IgG固定在石英膜阵列上来制备免疫芯片。用FITC荧光标记兔抗羊IgG、夹心法可同时测定羊抗人IgG、羊抗兔IgG和羊抗鼠IgG。用样点荧光强度与空白比Rf 作定量指标。在抗体浓度 0 .5～ 1 0 0mg L内 ,Rf与抗体浓度的对数成线性关系。最低可检出 0 .5mg L的羊抗兔IgG。测定仅需样品 1 5 0 μL ,2～ 3h,适合于快速微量分析     

纳米粒子标记激光诱导荧光免疫分析测定癌胚抗原

建立了一种核壳型SiO₂荧光纳米粒子标记的激光诱导荧光免疫测定的新方法. 该方法用 掺杂的核壳型SiO₂荧光纳米粒子为标记物, 采用双抗体夹心法, 在载玻片上固定鼠抗人癌胚抗原(CEA)单克隆抗体, 加入1～2 μL样品, 再加入纳米粒子标记的另一种鼠抗人癌胚抗原(CEA)单克隆抗体. 识别后在光导纤维激光诱导荧光毫米阵列检测平台上测量荧光信号, 进行定量. 在优化条件下, 荧光强度和癌胚抗原的量在1～80 pg的范围内具有良好的线性关系, 相关系数r＝0.9933, 方法的检出限为0.3 pg (20 amol). 对40 pg的CEA平行测定5次, 相对标准偏差为5.5%.     

LaF3:Eu3+纳米粒子的水热法制备及发光性质研究

用水热法制备了LaF3及Eu^3＋掺杂的LaF3纳米粒子, 通过X射线粉末衍射（XRD）、透射电子显微镜（TEM）和荧光光谱（FS）对样品进行了表征. 结果表明： 所得的纳米粒子粒度均匀、结晶完好, 呈规则的六边形形状;研究了反应温度和时间对LaF3纳米粒子形成的影响, 初步探讨了纳米粒子的生长机制. 研究了掺杂Eu^3＋后的发光性质, 发现纳米粒子经高温煅烧后, 荧光强度有明显下降, 适宜的煅烧条件为600 ℃/6 h, Eu^3＋的掺杂量在5%（摩尔分数）时, 纳米粒子的荧光强度最强, 更高的掺杂浓度将导致荧光猝灭.     

核壳型Fe_3O_4/Au粒子的制备及其在表面等离子体子共振传感器中的应用

合成了核壳型Fe3O4/Au复合粒子,并对其形貌、光学性质进行了表征.通过外加磁场将Fe3O4/Au复合粒子与兔抗人IgG的偶联体固定于表面等离子体子共振(SPR)传感器的金基底膜上,形成了Fe3O4/Au/抗IgG敏感膜.与传统的通过巯基丙酸连接蛋白的方式相比,磁场作用固定的Fe3O4/Au/抗IgG敏感膜制备简单,易洗脱,具有良好的再生性,且在一定程度上提高了传感器的灵敏度.并对人IgG进行了测定,结果表明,传感器对于浓度范围在1.25～20.00μg·mL-1的人IgG有良好的信号响应.     

金纳米粒子与抗体蛋白相互作用的光谱研究

本文运用透射电镜(TEM)、Zeta电位测量、紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)、荧光光谱以及衰减全反射傅立叶变换红外光谱(ATR-FTIR)等技术手段,研究了免疫球蛋白G(IgG)与金纳米粒子的相互作用。结果表明,所制备的金纳米粒子呈均一分散的球形,抗体蛋白能够与金纳米粒子形成稳定的复合物。内源荧光光谱表明金纳米粒子对抗体蛋白的内源荧光有显著的静态猝灭,猝灭常数KSV=4.25×109 L·mol-1,同时金纳米粒子与抗体蛋白间有较强的作用,结合常数K=1.95×1014,结合位点数n为1.49。外源荧光光谱表明金纳米粒子与抗体蛋白之间的作用力主要是疏水相互作用。ATR-FTIR分析抗体蛋白与金纳米粒子作用前后蛋白二级结构的变化,结果显示,抗体蛋白有序结构含量降低,构象朝着更加松散的状态变化。     

CdS/TiO2复合纳米粒子的光学性质

在Brij35/正己醇/环己烷/水构成的反相微乳体系中，分别合成了CdS、TiO2纳米粒子和TiO2包覆CdS（CdS/TiO2）的复合纳米粒子.测定了它们的紫外-可见吸收和荧光光谱.结果表明， CdS/TiO2复合纳米粒子在可见光区的吸收比相应的两组分的吸收之和更强.纳米CdS和纳米TiO2均有较强的荧光.而且在相同浓度时纳米TiO2的荧光比纳米CdS的荧光更强.但在CdS/TiO2复合纳米粒子中，TiO2的荧光被淬灭，而CdS的荧光稍有降低.