基于电化学聚合固定抗体的电化学发光免疫分析法检测人免疫球蛋白

基于电化学聚合在金电极表面固定兔抗人免疫球蛋白G抗体与人免疫球蛋白G及标记有Ru(bpy)2+3 的羊抗人免疫球蛋白G抗体之间发生特异性免疫反应,形成三明治结构,成功建立了用于测定人血清中免疫球蛋白G的电化学发光(ECL)免疫技术.利用此方法测定人免疫球蛋白G含量,浓度在50 μg/L～2 mg/L范围内与电化学发光强度呈良好的线性关系,线性回归方程为y(a. u.)=48.41+0.09x(μg/L) (n=7);检出限为20 μg/L (3σ).测得正常人血清中免疫球蛋白G平均含量为11.2 g/L ,结果令人满意.     

流动注射电化学发光法测定盐酸麻黄碱

基于盐酸麻黄碱(EP)对三联吡啶合钌(Ru(bpy)32 )电化学发光(ECL)的增敏作用,建立了流动注射ECL检测EP的新方法,并将其应用于EP的测定。结果表明,在pH为10.0的0.1 mol/L Na2B4O7-NaOH介质中,在电位1.10 V下进行恒电位电解,Ru(bpy)32 的浓度为1.0×10-4mol/L时,EP对ECL的增敏效果最好。在优化的条件下,测定EP的线性范围为2.40~24.0μg/mL(r=0.9995),检出限为2.00μg/mL,相对标准偏差(RSD)小于1.6%(n=10),加标回收率为97.0%~105%。     

猝灭-恢复型电化学发光传感器测定抗坏血酸的研究

制备了氮硫掺杂石墨烯量子点(NSGQDs),并将其修饰在金电极表面.基于NSGQDs良好的电化学发光(ECL)特性,以其为探针,进一步将铜-金属有机框架(Cu-MOF)修饰于该电极表面,构建了猝灭-恢复型ECL传感器用于抗坏血酸的高灵敏检测.由于NSGQDs表面存在大量氨基,当Cu-MOF存在时,NSGQDs的ECL信号猝灭;加入抗坏血酸后,Cu-MOF从NSGQDs表面自动脱落,NSGQDs的ECL信号得以恢复.NSGQDs的ECL信号恢复值与抗坏血酸浓度在0.1～40 μmol/L之间呈良好的线性关系,检出限为3.2 nmol/L.该法已用于血样中抗坏血酸的测定,并进一步研究了人血液中抗坏血酸24h的药代动力学规律.     

毛细管电泳柱端电化学发光法分离测定药物和尿液中的盐酸维拉帕米

采用带有柱端电化学发光(ECL)检测池的毛细管电泳(CE)法分离并测定盐酸维拉帕米(Verapamil, VRPM).盐酸VRPM作为共反应剂,增强了吡啶钌的电化学发光强度.在优化的条件下,ECL强度与VRPM在7.0×10-7～5.0×10-4 mol/L范围内呈良好的线性关系;检出限(S/N=3)为4.6×10-8 mol/L.本方法已成功用于药物和人体尿样中盐酸VRPM含量的测定.研究了VRPM与牛血红蛋白(BHb)的相互作用,计算其结合常数为3.72×103 L/mol,最大结合量为1.375×10-4 mol.     

环境激素类物质2,4-二氯苯酚荧光免疫分析方法的建立

以2,4-二氯苯酚(DCP)与牛血清白蛋白的偶联物DCP-BSA为人工抗原,免疫新西兰大白兔,获得特异性的抗体.建立并优化了荧光免疫检测方法,工作曲线表明DCP在1～100 μg/L范围内呈良好的线性关系,回归方程为:IF=21.30lg ρ 29.13,相关系数r=0.991 5,DCP检出限为0.41 μg/L,抑制中质量浓度为9.18 μg/L,且对其它结构类似酚类化合物均有特异性识别.本法可应用于检测环境中微量的2,4-二氯苯酚.     

酶促电化学发光法测定血清总胆汁酸

利用胆汁酸在氧化型辅酶I(NAD+)共存下被3α-类固醇脱氢酶(3α-HSD)催化脱氢,同时NAD+被还原为还原型辅酶I(NADH)可增强三联吡啶钌(Ru(bpy)32+)的电化学发光(ECL)信号,实现电化学发光法间接检测胆汁酸。检测池中含2.5mmol/LRu(bpy)23+,833U/L3α-HSD,70nmol/LNAD+,50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH8.0)。ECL强度与胆汁酸的浓度在1.0～100fmol/L范围内呈良好的线性关系,线性方程y=0.7707x+12.04(r=0.9975);检出限为0.02fmol/L;平均回收率为97.5%。本方法与临床采用的酶循环放大法有较好的相关性。     

二氧化硅纳米颗粒表面原位还原银纳米簇电化学发光传感界面的构建与分子识别

通过牛血清蛋白(BSA)对二氧化硅纳米颗粒(SiO₂ NPs)表面进行氨基、 巯基功能化, 随后以BSA同时作为模板和还原剂, 原位生成银纳米簇(Ag NCs), 获得显著增强阴极电化学发光(ECL)信号的Ag NCs-SiO₂ NPs复合纳米材料. 结果表明, 当测试溶液中含有L-半胱氨酸(L-Cys)时, 其与传感界面上的Ag NCs发生共价结合作用, 从而猝灭其ECL信号. 基于该原理, 构建了“开-关”型ECL信号响应模式的L-Cys生物传感器. 该传感器检测L-Cys的浓度范围为50 nmol/L~50 μmol/L, 最低检测限达到13.7 nmol/L, 能够实现L-Cys的高灵敏及特异性分析, 有望在生物、 医学等领域得到广泛应用.     

癌胚抗原毛细管电泳-化学发光均相免疫分析

建立了一种测定人血清中癌胚抗原的毛细管电泳-化学发光检测的均相免疫分析新方法.采用四苯硼钠增强luminol-H2 O2-HRP体系化学发光的原理,化学发光检测经毛细管电泳分离的,用辣根过氧化物酶(HRP)标记的癌胚抗体及免疫复合物.测定癌胚抗原的线性范围2.0～80.0 μg/L(R=0.9921),检出限为0.1 μg/L(绝对检出限为0.75 fg).     

基于噬菌体展示抗体的电化学发光免疫传感器检测相思子毒素研究

以多克隆抗体包被磁性微球制备捕获探针,以表面负载大量三联吡啶钌标记物的噬菌体展示抗体为发光探针有效放大信号,成功建立了相思子毒素电化学发光免疫传感检测方法。利用本方法检测相思子毒素,浓度在0.005～100μg/L范围内与电化学发光强度呈良好的对数线性关系,拟合方程为lgY=0.701lgX+1.767(R=0.9964,N=7,p<0.0001),检测限达0.005μg/L(S/N=3)。与采用单克隆抗体制备标记探针相比,检测灵敏度提高20倍,可用于相思子毒素的痕量检测。     

新型流动注射电化学发光分析系统及性能表征

为研发电化学发光体外诊断试剂,设计了一种流动注射池,构建了喷射式流动注射电化学发光分析系统,并运用Ru(bpy)2+3/TPA混合进样模式对此系统进行了评估.在检测电位1.18 V,进样量100 μL,进样速度50 μL/s,TPA浓度10 mmol/L,样品缓冲液100 mmol/L PBS(pH 8.4), 载体缓冲液10 mmol/L PBS(pH 8.4)最优条件下,获得Ru(bpy)2+3的检出限(S/N=3)为0.005 μmol/L; 线性范围为0.01～5 μmol/L; RSD为1.02%.结果表明,此分析系统灵敏度高,线性范围宽,分析速度快,样品用量少,实现了进样、检测及清洗过程自动化.