肿瘤细胞中表达的GFP蛋白的荧光漂白特性的研究

GFP作为生物源性荧光探针具有其他荧光标记物所无法比拟的优势，目前已广泛应用于生物学研究的各个领域。利用常规转染方法将带有EGFP基因的质粒载体导入人肺腺癌肿瘤细胞(ASTC-a-1)，并得到GFP稳定表达的细胞株。研究中发现，肿瘤细胞中表达的GFP长时间暴露于强激发光中会发生非常强列的荧光漂白作用，并且这种漂白作用是不可恢复的。对不同强度的激发光(饱和光源、阻断片ND4／ND8／ND16)对GFP的漂白作用进行了研究，并对冷冻保存样品的光漂白作用进行了初步的探讨。     

利用激光共聚焦扫描显微镜的绿色荧光蛋白荧光成像

报字利用基因标记技术净绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因与目标蛋白基因融合,并利用激光共焦扫描显微镜通过探测绿荧光蛋白的荧光来跟踪观测目标蛋白基因的表达。     

由供体受体对的发射谱直接拟合计算荧光共振能量转移效率

荧光共振能量转移(FRET)广泛用于研究分子间的距离以及相互作用,但是由于光谱的串扰和荧光强度对浓度依赖的复杂性,很难定量测量FRET效率.本文提出了一种利用供体、受体和供体受体对的发射谱通过计算机拟合计算FRET效率的理论和方法.该方法适用于选择性地激发供体和受体与供体的浓度比已知的情况,因而适合基于绿色荧光蛋白(GFP)供体-受体对.本文利用该方法拟合计算了Cameleon分别在零钙和饱和钙时的FRET效率.     

基于荧光光谱技术的大肠杆菌活性及灭菌效应研究

在食品和环境监测中,大肠杆菌是一个重要指标细菌,因此,对大肠杆菌的监测和灭菌效果也引起了人们广泛的关注。基于荧光光谱检测技术具有的灵敏度高、速度快、稳定性强等优点,利用荧光光谱技术研究了大肠杆菌的发射峰强度与大肠杆菌浓度的内在变化规律,得到了一种更加方便、快捷、监测浓度更低的大肠杆菌计数方法。采用289 nm的激发光照射大肠杆菌水溶液,得到大肠杆菌的荧光发射光谱;改变大肠杆菌溶液的浓度,得到不同浓度大肠杆菌溶液的荧光光谱,并分析大肠杆菌特征峰强度与大肠杆菌浓度的关系。在此基础上,利用荧光光谱技术研究了银纳米颗粒对大肠杆菌荧光发射的影响,分析了银纳米颗粒对大肠杆菌的灭菌效果,结果表明：(1)当289 nm的激发光照射大肠杆菌水溶液时,大肠杆菌分别在332和425 nm两处有明显的荧光特征峰;荧光特征峰强度随着大肠杆菌浓度降低而降低;当大肠杆菌浓度小于20%时,332和425 nm处特征峰强度与大肠杆菌溶液的浓度均呈线性关系。(2)当大肠杆菌水溶液中加入银纳米颗粒时,在4个小时内,银纳米颗粒的作用时间越长,大肠杆菌的荧光特征峰越弱,即灭菌率越高;增加银纳米颗粒的浓度或者提高环境温度,均可提高银纳米颗粒对大肠杆菌的灭菌率。本文的研究结果对食品、环境等中大肠杆菌的计数和灭菌研究有参考意义。     

PLS在基于动态光谱的人体血液中性粒细胞无创测量中的应用

利用动态光谱指端透射法进行了人体血液中性粒细胞百分比无创测量的研究。对21名健康志愿者进行了在体测量,选用偏最小二乘法(PLS)对获取的动态光谱数据和中性粒细胞百分比实测值进行建模分析,建立的定标集的相关系数为0.922,最大相对误差为5.85%,平均相对误差为4.13%;对定标模型的预测能力进行了验证,其中预测集的相关系数为0.912,预测集的相对误差最大为6.74%,平均相对误差为5.07。结果表明：动态光谱法可以有效地克服测量位置及人体成分等对光谱测量的影响,较准确地进行人体血液中性粒细胞百分比的测量,是一种比较好的血液成分无创测量方法,具有较高的临床应用价值。     

重离子辐射提高腺病毒介导小鼠黑色素瘤细胞转染率的研究

探讨12C6+ 离子束辐射对用带有绿色荧光蛋白基因的缺陷性腺病毒（AdCMV GFP）转染小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞系)的影响。 采用不同剂量的12C6+ 重离子束辐射经AdCMV GFP 转染的B16细胞， 利用流式细胞仪检测腺病毒的转染率。 结果表明， 12C6＋重离子束辐射能提高腺病毒对B16细胞的转染率， 且具有量效关系。 此外， 先转染后辐射法比起先辐射后转染法能更显著地提高转染率。The effect of 12C6+ beam irradiation on AdCMV GFP (a replication deficient recombinant adenoviral vector containing CMV promoter and green fluorescent protein) gene transfection efficiency for murine melanoma cell B16 has been investigated. B16 cells infected with AdCMV GFP were irradiated by different doses of 12C6+ beam. The transfection efficiency was assessed by flow cytometry (FCM). Results show that 12C6+ beam irradiation can improve tansfection efficiency of AdCMV GFP on murine melanoma cell B16 in a dose dependent manner. In addition， the tansfection efficiency in pre tranfection plus irradiation group is higher than that in pre irradiation plus tranfection group at the same dose irradiation dose.     

超声双功能显象仪及其临床的初步应用

超声双功能显象仪是把超声切面显象和脉冲多普勒血流仪有机组合的新型超声诊断仪.它可以同时提供心脏二维实时显象和心血管内血流的脉冲多普勒实时频谱.取样容积可在二维图象监视下调节,定位准确;采集所需点血流的脉冲多普勒信号,经计算机作快速富里叶变换(FFT)分析处理,以频谱形式显示,为临床提供可靠的血流动力学资料.本文介绍了双功能显象仪的工作原理,讨论了脉冲多普勒频谱中各项参数的意义及临床用途,简述了这种仪器在心脏分流疾病诊断中的应用.     

圆二色谱研究Asp44在稳定肌红蛋白结构中的作用

为了了解肌红蛋白Mb分子表面44位天冬氨酸对稳定肌红蛋白结构的影响,用PCR定点突变的技术将肌红蛋白(Mb)基因上的第44位天冬氨酸的密码子GAT突变成赖氨酸的密码子AAA,获得突变体D44K基因,将突变体基因克隆在肌红蛋白表达质粒pGYM上,转化大肠杆菌BL21,突变蛋白D44K在大肠杆菌中大量表达,收集菌体。酶法裂解细菌,依次用硫酸铵沉淀、离子交换柱层析、凝胶柱层析分离纯化得突变肌红蛋白D44K。用圆二色谱分别研究野生型肌红蛋白及其突变体(D44K)的耐热及耐酸的变性过程。实验结果表明：用碱性氨基酸Lys取代酸性氨基酸Asp44残基,增强了肌红蛋白耐热变性能力,导致蛋白质的热变性中点温度T_m由71.9 ℃增加到75.1 ℃,但对肌红蛋白耐酸变性的能力影响不大。     

在ELISA储存环上研究成色基团的光吸收(英文)

在电子储存环ELISA上研究了气相生物分子的光吸收 .通过研究发现 ,储存时间长并具有合适的粒子探测系统的储存环是进行成色基团光物理研究的理想工具 .讨论了绿色荧光蛋白质(GFP)的光吸收特性 ,并将气相光吸收测量谱与液体中蛋白质和成色基团的吸收形貌进行了比较 ,认为GFP的吸收特性可以归因于成色基团的固有化学性质. Absorption of gas-phase biomolecules has been studied at the electrostatic ion storage ring ELISA. It is demonstrated that the storage ring technique with long storage times and suitable particle detection is ideal for studies of the photo-physics of chromophores. Here we discuss the absorption characteristics of the chromophores of the Green Fluorescent Protein (GFP) and compare our gas-phase absorption measurements with absorption profiles of the protein and chromophores in liquids ...     

双光子成像观测拟南芥细胞骨架及根尖生长过程

细胞骨架在植物细胞及其运动、发育变化等过程中起着重要作用。本文利用MS培养基在无菌条件下培养转染GFP(绿色荧光蛋白)的拟南芥,使其经过从种子萌发、植株生长直至开花结果的完整生命周期;在此过程中,利用适合对较大较厚样品进行活体四维成像的双光子激光扫描显微术,观测活的拟南芥种子、根尖、导管和根毛等器官内的细胞骨架形态,以及拟南芥根尖生长发育的动态过程,量化计算出根尖的生长速度。用低浓度(10-10mol.L-1)吲哚-3-乙酸刺激拟南芥,观测到根尖生长速度比正常情况下提高约3.8倍。     

一种新型双光子激发荧光开关

本刊讯绿色荧光蛋白是近几十年来生物医学研究热点，并在2008年获得诺贝尔化学奖。实际上，通过基因重组可以得到蓝、绿、橙和红等各种不同颜色的荧光蛋白，还可以得到具有光响应或光开关的荧光蛋白。与普通荧光蛋白比较，光响应荧光蛋白表现出光致变色荧光或光致可逆荧光特征。     

隧道电子激发的辛硫醇条纹相自组装膜上卟啉单分子荧光

利用扫描隧道显微镜诱导发光技术,对单个卟啉分子的电致荧光现象进行了研究. 为了避免金属衬底对单个卟啉分子的荧光淬灭,利用条纹状辛硫醇自组装膜作为脱耦合层,实现了单个中性卟啉分子的电致荧光,并且发现分子荧光的产生呈现双极性特征. 另外,分子瓣上的荧光强度要强于分子中心的荧光强度.     

用Fura-2测定人外周血中性粒细胞内游离钙浓度

本文用 2 - [6-双乙酸基 - 5 - ( 2 -双乙酸基 ) - 5 -甲苯氧乙氧基 ]- 2 -苯骈呋喃基 - 5 -恶唑羧酸五钾盐 ( Fura- 2 )建立了测定人外周血中性粒细胞内游离钙浓度的方法 ,并对一些测试条件进行了探讨。测定标本内中性粒细胞数以大约 10 6个 /m L为宜 ,在离心分离出中性粒细胞悬液时 ,标本制备好需静置 0 .5 h后才能上机测试 ,否则振荡形成的剪切应力将增大细胞内游离钙的浓度 ,p H偏离 7.4和受损细胞会极大增加细胞内游离钙的浓度。结果表明 ,正常人外周血中性粒细胞游离钙浓度为 3.95± 0 .76μg/L。对中性粒细胞内游离钙的测定有助于了解其功能状态。     

用特征光谱荧光标记技术分析水中溶解有机物特性

讨论了一种自然水体中有机物的快速诊断分析方法。介绍了总荧光光谱(TLS)和特征光谱荧光标记(SFS)技术;以激光诱导荧光(LIF)方法测量了水体的总荧光光谱,利用特征光谱荧光标记技术对水体中溶解有机物(DOM)及叶绿素a(Chla)进行了分析,并给出了不同浓度腐殖酸的归一化荧光强度与浓度的关系曲线．结果表明,利用特征光谱荧光标记技术对水体总荧光光谱的分析,可以进行水体污染物的快速、实时和在线监测。     

利用三通道实时荧光成像方法研究单个活细胞凋亡与胞浆pH值变化的关系

利用双波长分光器(Dual-View)和自制滤光片滑块,在基于像增强型电荷耦合器件(ICCD)的实时/快速荧光成像系统基础上,建立了一种基于单个ICCD的三通道实时荧光成像方法,同时发展了相应的图像校准处理方法用于消除光谱串扰的影响,并将该方法应用于单个活细胞的研究。利用Annexin V-FITC和SNARF-1两种荧光探针进行双标记,在单细胞水平上对亚硝基谷胱甘肽(GSNO)诱导小鼠胸腺细胞凋亡与其胞浆pH值变化的关系进行实时研究。结果揭示了GSNO诱导的细胞凋亡与细胞发生自发凋亡时胞浆pH值有不同的变化规律,为这种三通道实时荧光成像方法在生物医学领域的应用展示了广阔的前景。     

拉直的单个DNA分子的全内反射荧光实时成像研究

全内反射荧光(TIRF)成像技术利用穿透深度仅200 nm左右的隐失波来激发诱导荧光,探测灵敏度和图像信噪比大大提高,成为单分子研究的有力工具。分子梳技术利用DNA末端与固体表面的结合力和周围流体流动产生的侧向力将DNA分子拉伸并平铺在表面上。结合这两种技术,对分子梳拉直的单个DNA分子进行了清晰的实时荧光成像,发现TIRF成像条件下DNA分子与荧光探针YOYO-1组成的复合体可自然避免发生光敏断裂现象;实时监测了单个DNA-YOYO-1复合体的光漂白过程,通过对激发光照射时间与探测器曝光时间进行同步控制,可大幅降低光漂白程度,为拉直的单个DNA分子的长时间实时观察和成像研究优化了实验条件,为实时、可视化地研究其与蛋白质相互作用的动力学过程奠定了基础。     

铽共聚荧光高分子的发光性能研究

以合成的铽三元荧光配合物为原料,采用键合法制备了16种绿色荧光高分子.通过荧光光谱分析研究它们的性能.结果表明,所有绿色荧光高分子的发光特性与铽三元荧光配合物的发光特性基本相似,均发出了铽离子的特性光,荧光表现为绿色.采用散点图和列表法研究了绿色荧光高分子化合物的荧光强度与铽三元荧光配合物单体量间的关系.结果表明,绿色荧光高分子的荧光强度与铽三元荧光单体量间不成线性关系.     

新仪器,新设备

本仪器能准确显示腹部脏器及妇科产科的断层实时图象,配有DJQ-1型超声图象储存器,能冻结断层实时图象,便于观察、测量、分析和拍照. JTC-20型超声扇扫实时显象仪 本仪器具有B型、A型二种功能.可在活动的图象中准确地诊断心脏各部的多种疾病.具有图象清晰、稳定等特点.     

荧光光谱分析家蝇幼虫抗菌肽与大肠杆菌染色体DNA作用机理

利用荧光光谱方法研究了家蝇幼虫抗菌肽MDL-1与大肠杆菌染色体DNA的相互作用,并以溴化乙锭为荧光探针,考察了抗菌肽MDL-1结合大肠杆菌DNA的作用方式,探讨其作用模式,即：抗菌肽MDL-1与大肠杆菌DNA骨架的磷酸基团通过静电引力结合,使抗菌肽MDL-1和DNA的空间结构都发生变化,抗菌肽MDL-1进一步与DNA双螺旋的沟槽结合,然后抗菌肽MDL-1以嵌入或部分嵌入方式与DNA相互作用,计算出抗菌肽MDL-1与DNA的结合常数和成键位点数。本试验从分子水平上研究抗菌肽与细菌DNA的作用模式和结构特征,对深入了解抗菌肽的作用机理极为重要。     

国产超声显象诊断仪的现状和展望

一、历史的回顾 B型超声显象始于五十年代的初期,由美国的Howry和BLiSS等首先提出.随着电子学和现代医学科学的发展,超声显象技术近年来已取得了飞速的进展,如果把单探头手动扫查的B型切面显象仪作为第一代;那么快速机械扫查显象仪和线阵电子扫描显象仪可作为第