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相似文献
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1.
摘要: 目的 研究胰腺癌患者血清肿瘤相关胰蛋白酶原-2在胰腺癌初筛中的意义。方法 收集北京军区总医院23例胰腺癌住院患者的治疗前血清标本和35 例正常对照者(健康体检者)血清标本。采用酶联免疫吸附法检测血清胰蛋白酶原-2含量。结果 血清胰蛋白酶原-2含量在正常对照组中位数为0.8ug/L,四分位间距0.6~1.2μg /L; 胰腺癌患者中位数为13.8μg /L,四分位间距2.3~60.7μg/L。胰腺癌组和正常对照组血清胰蛋白酶原-2水平有统计学差异( P<0.01) 。以1.85ug /L为临界值作为诊断胰腺癌界定值的敏感度为91.4%,特异度为95.7%。结论 血清胰蛋白酶原-2检测可作为胰腺癌的一种初筛试验。  相似文献   

2.
将人胰岛素原基因序列(human proinsulin, PI)经密码子优化后与TrxA蛋白融合表达,构建原核表达载体TrxA-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、TransB(DE3)和Rosetta-gami(DE3)中。SDS-PAGE显示融合蛋白在3种表达菌株中均有表达,在Rosetta-gami(DE3)中表达量最高,是普通大肠杆菌BL21(DE3)表达量的10倍。通过优化诱导温度等发酵条件,可溶性重组融合蛋白TrxA-PI在Rosetta-gami(DE3)菌株中表达量为3.5 g/L,比未优化时提高约10倍。TrxA-PI用肠激酶酶切后,利用HisTrap FF柱分离纯化PI,经Western-blot检测重组PI具有免疫原性。  相似文献   

3.
为研究急性水肿型胰腺炎时胰蛋白酶的活化情况,以40微克/公斤体重的雨蛙肽腹腔内注射给大白鼠诱发急性水肿型胰腺炎。一小时后采血并处死。测定胰湿重量,血清淀粉酶、脂肪酶和血浆胰蛋白酶原活化肽。实验组胰湿重量、血清淀粉酶、脂肪酶均明显增高,与对照组相比,均有显著性差异。实验组血浆胰蛋白酶原活化肽浓度为2.55±0.82nm,对照组为0.62±0.32nm,二者间有显著性差异(p<0.05)。实验结果证明,单剂雨蛙肽腹腔内注射可诱发大白鼠急性水肿型胰腺炎,此型急性胰腺炎的发生与胰蛋白酶的活化有关。  相似文献   

4.
 胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶类超家族成员之一,在动物蛋白消化中起着重要作用。为深入研究胰蛋白酶在鱼类中的蛋白结构和生理功能,利用RT-PCR和RACE方法,成功获得了斑马鱼3种胰蛋白酶原cDNA序列(zftry1a、zftry1b和zftry2)。结果表明,zftry1a和zftry1b均有242个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和5个氨基酸(LDDDK)的激活肽。zftry2由247个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和9个氨基酸(APLGDDDDK)的激活肽。氨基酸序列比对结果显示,三者具备胰蛋白酶原的保守结构特征,如含有催化三联体氨基酸(His-57、Asp-102和Ser-195),12个半胱氨酸,位于底物结合口袋底部Asp-189和口袋开口处的Gly-216、Gly-226等。进化树结果显示,斑马鱼zftry1a和zftry1b属于group I,为阴离子胰蛋白酶原;斑马鱼zftry2属于group II,为阳离子型胰蛋白酶原。RT-PCR结果显示,三者组织分布模式类似,且在肠中有最高表达量。这些结果为研究鱼类胰蛋白酶原的基因进化和功能以及进一步探讨鱼类消化生理的分子机制奠定了基础。  相似文献   

5.
人血管内皮生长因子165(VEGF165)可有效促进血管新生和增加血管通透性,在伤口愈合方面有重要医疗价值。建立获取高纯度、高活性的优质重组VEGF165蛋白的方法具有重要意义。研究利用带有6组氨酸标签的二硫键形成蛋白A(Dsb A)的E.coli表达系统实现了Dsb A-VEGF165融合蛋白的可溶性表达;诱导过程中添加5%(v/v)的乙醇可显著提高工程菌中可溶性融合蛋白表达水平。融合蛋白通过Ni亲和层析粗纯,并经牛肠激酶酶切去除标签蛋白。随后利用肝素亲和层析精纯获得重组人VEGF165蛋白。非还原及还原SDS-PAGE电泳检测到分子量为约40 k Da的同源二聚体蛋白,促HUVEC细胞增殖实验显示重组蛋白具有较优的活性,EC50为13 ng/m L。研究实现了Dsb A-VEGF165的在E.coli中可溶性表达,建立了经济、高效的纯化方法,获得了高质量、高活性的重组人VEGF165蛋白。  相似文献   

6.
采用荧光猝灭法对原花青素B2与牛胰蛋白酶之间的相互作用进行研究,同时利用分子模拟方法研究二者之间的相互作用机理.实验结果表明,原花青素B2可以有效地猝灭牛胰蛋白酶的荧光发射,二者之间可以形成1∶1型复合物.分子对接结果表明,原花青素B2对接在牛胰蛋白酶表面的一个疏水口袋中,并与His57,Va1213,Trp215等残...  相似文献   

7.
人Sox2基因的克隆表达和纯化   总被引:1,自引:0,他引:1  
应用RT-PCR方法从人胚胎十细胞中扩增出Sox2基因,构建pET28b-Sox2表达载体.用IPTG诱导转化pET28b-Sox2表达载体的大肠杆菌BL21(DE3).并优化表达条件为37℃ 1PTG0.8 mmol/L诱导4 h.以Ni-NTA亲和层析法纯化Sox2重组蛋白,对变性蛋白进行柱上和透析复性,复性后蛋白得率为0.7 mg/g湿菌重.  相似文献   

8.
人Endostatin cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
Endostatin是一种新发现的血管生成抑制因子,具有很强的抗肿瘤活性,为了研究人Endostatin的生物学功能和作用机制,作者从人胎肝组织中克隆到人EndostatincDNA,然后将其插入到pSQE表达质粒中,转化Escherichia,coli BL21(DE3),获得了pSQE-END/BL21(DE3)表达工程菌,对其诱导表达产物hEndostatin进行了分离、纯化和复性的研究,结  相似文献   

9.
为研究急性水肿型胰脂炎时胰蛋白酶的活化情况,以40微克/公斤体重的雨蛙肽腹腔内注射给大白鼠诱发急性水肿型胰腺炎。一小时后采血并处死。测定胰湿重量、血清淀粉酶、脂肪酶和血浆胰蛋白酶原活化肽。  相似文献   

10.
构建AhAO2基因片段原核表达重组质粒pPROEX-Hta-AhAO2,表达质粒在E.coliBL21中诱导表达,获得His-AhAO2融合蛋白,采用亲和层析与电泳纯化His-AhAO2免疫,新西兰大白兔,获得抗His-AhAO2抗体,West-ern blot检测显示其只与His-AhAO2融合蛋白结合.实验成功制备了抗AhAO2特异抗体.  相似文献   

11.
心肌肌钙蛋白I(cTnI)是检测心肌损伤的理想标志物,具有很高的特异性,在病人体内可停留较长时间.以人心肌cDNA为模板,通过PCR方法克隆了人的cTnI和cTnC基因,将cTnI和cTnC基因插入到原核表达载体pBV220中,转化E.coli DH5α菌株并诱导表达,经SDS-PAGE分析,分别发现分子质量为28ku和18ku的特异性蛋白条带.cTnI经Western blotting检测,结果与天然蛋白一致.将纯化得到的cTnI免疫小鼠后,用人天然标准抗原检测小鼠的抗血清效价在1:16000以上,并且呈高度特异性,与cTnC无交叉反应.而表达的cTnC可以在一定条件下和cTnI结合,证明2种基因工程蛋白是具有天然构象和结合功能的.cTnI和cTnC的表达及2种蛋白结合试验的研究结果为进一步研发免疫诊断试剂奠定了良好的基础.  相似文献   

12.
利用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织中扩增了OB基因,并利用定向克隆技术克隆至原核表达载体pTO-T7.将构建好的质粒导入表达型大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行Western-blot检测.表达产物利用亲和层析技术进行纯化.结果显示:表达的带有his标签的小鼠leptin融合蛋白,分子量约为20 ku.0.5 mmol/L的IPTG在37℃诱导2.5 h时,leptin融合蛋白的表达量达到最大,达菌体总蛋白50%以上.表达产物经过纯化,纯度可达90%以上.Western-blot杂交显示,小鼠leptin融合蛋白有很强的抗原特异性.  相似文献   

13.
对丙型肝炎病毒(HCV)截短型包膜糖蛋白E2-661基因进行原核表达和纯化.利用PCR法扩增出661 bp的截短型HCV E2区基因片段,并将测序正确的E2-661基因克隆入原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定.结果表明目的蛋白分子量约为35 kDa,主要以包涵体形式大量存在.Western-blot结果显示目的蛋白与抗His标签单抗及HCV阳性血清均具有良好的反应原性.并通过镍离子亲和层析方法获得纯化的重组蛋白.以上结果为HCV E2功能的进一步研究奠定了基础.  相似文献   

14.
以人外周血淋巴细胞基因组DNA为模板,用PCR方法扩增出神经营养素-4基因(NT-4)成熟蛋白的DNA序列,并将其克隆到表达载体pET32a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经异丙基-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后高效特异表达了分子量约为35kD的蛋白,诱导表达的蛋白主要存在于包涵体中,经Ni^2 -NTA树脂亲和层析纯化,得到了纯度达94%的NT-4成熟蛋白的融合蛋白.为进一步研究NT-4的生物学活性及在临床治疗中的作用打下了基础.  相似文献   

15.
应用基因工程方法构建了含人肿瘤坏死因子CDNA衍生物的重组体.转化大肠杆菌后酶切鉴定.转化菌经摇瓶培养及温度调控,获得高效表达.SDS-PAGE结果表明,表达的TNF分子量约为17kD,蛋白量约为菌体可溶性蛋白的20%.用L929细胞毒性测定法测得菌液TNF的表达为2×108u/mL.抗TNF的单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的TNF对L929细胞的细胞毒性.  相似文献   

16.
通过改变异丙醇-β-D硫代半乳糖苷诱导浓度、诱导温度及诱导培养时间,优化含重组人附睾特异蛋白BDFx工程菌的表达条件.运用DEAE阴离子与CM阳离子交换层析及S-100分子筛层析纯化重组蛋白,用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外扫描等方法鉴定目的蛋白.结果显示,缩短诱导培养时间、降低IPTG浓度等可提高重组蛋白的表达量,表明适当提高诱导表达温度不会形成包涵体,并可缩短表达时间.  相似文献   

17.
人神经珠蛋白(hNGB)是新发现的人类脑特异的携氧蛋白.为对其结构和功能进行深入的研究,首先,利用分子生物学实验辅助设计软件BioSun1.0分析了hNGB基因与pBV221载体连接处的二级结构和hNGB基因的局部密码子偏爱性,并依据原核系统外源基因高效表达数学模型对hNGB基因进行了高效表达设计;其次,构建了hNGB基因编码区原核表达载体pBV221-hNGB;最后通过转化大肠杆菌JM109,热激诱导,获得了hNGB基因的高效表达.表达水平约为12%,从而为进一步研究hNGB基因的结构和功能奠定了重要基础.  相似文献   

18.
GST—EGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化   总被引:1,自引:0,他引:1  
将小鼠EGF基因克隆至谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-2T,转化大肠杆菌DH5α,获得高效表达,融合蛋白GST-mEGF经Sepharose4B-GSH亲和层析柱纯化和凝血酶消化获得有免疫活性的mEGF,表明GST融合基因表达系统不仅能提高表达产物的稳定性也有利于产物的纯化  相似文献   

19.
用Trizol提取人骨髓总RNA,通过RT-PCR扩增人干细胞因子DNA,克隆到pMD18-T载体中并测序.将其定向连入原核表达载体pET32a( ),获得了重组表达载体pET32a( )/hSCF,其cDNA长度为504bp,测序结果与已知序列吻合.然后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,获得37kD的融合蛋白,约占菌体总蛋白量的30%.经Ni^2 -NTA树脂亲和层析柱纯化获得纯度大约90%的重组蛋白.  相似文献   

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