体积排阻色谱法测定低分子量肝素抗凝血因子Xa的活性

发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法。利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa(FXa)抑制作用的原理,通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定LMWH的活性。首先将含有一定浓度LMWH的缓冲溶液与ATⅢ溶液混合,然后依次加入FXa和生色底物,分别孵育一段时间。底物被FXa水解,产生游离的pNA。体积排阻色谱可将小分子产物pNA与其他大分子分离开,因而可以在pNA的最大吸收波长下得到高灵敏度的测定,并且不再受其他成分的干扰。该方法重复性好,灵敏度高,极大地减少了样品的消耗量,降低了成本,并且还可进行各种复杂样品(如血浆)中LMWH抗FXa活性的监测。     

电动胶束色谱中弱酸性化合物的柱上浓缩富集技术的研究

提出一种电动胶束色谱（ＭＥＫＣ）中弱酸性化合物的柱上浓缩富集技术,并得到实验证实。以七种弱酸性巴比妥类药物的ＭＥＫＣ分离为例,考察了样品溶剂中表面活性剂浓度、ｐＨ值和离子强度等对富集作用的影响。表面活性剂浓度,ｐＨ值对富集效应的影响较大。采用低浓度（略高于ＣＭＣ点）表面活性剂、低浓度缓冲液作样品溶剂,调节溶剂ｐＨ值小于待测化合物的ｐＫａ－１,就可以对弱酸性化合物进行柱上富集。采用这种富集技术,可以压缩样品带的宽度从而提高柱效,在此基础上可通过加大进样量提高化合物的检测灵敏度。     

胶束电动毛细管色谱在柱富集和分离7种植物激素

利用胶束电动毛细管色谱在柱样品电堆积的预富集方法,以十二烷基硫酸钠胶束作准固定相,对七种植物激素进行了富集和分离。研究了各种分离条件的影响,并分别在高电渗流和聚丙烯酰胺涂层抑制电渗流条件下对植物激素进行在柱电堆积富集,各种植物激素的检出限比文献报道降低1～2个数量级。在最佳条件下对植物样品中的脱落酸进行了测定,其相对标准偏差为2．4％;回收率为75％。     

电中性物质的毛细管胶束电动色谱

在自制的高效毛细管电泳装置上,使用内径为0.05毫米,长为450毫米的熔融石英毛细管,十二烷基硫酸钠胶束溶液,254nm检测波长,进行了电中性化合物的毛细管胶束电动色谱研究。并将乙醇-水混合溶剂引入体系,成功地进行了多环芳烃的分离。考察了电场强度,SDS浓度及乙醇含量对柱效的影响。     

蛇床子及其制剂中香豆素类活性成份的胶束电动毛细管色谱含量测定

建立了胶束电动毛细管色谱分离和测定蛇床子及其制剂中3种香豆素类活性组分的方法.系统考察了背景电解质pH、表面活性剂浓度、有机改性剂种类和浓度对分离的影响.实验结果表明:在缓冲液浓度为10 mmol/L、缓冲液pH为10.5、SDS浓度为20 mmol/L、甲醇浓度为10%时的优化条件下,蛇床子及其制剂中3种香豆素类活性组分得到基线分离.且方法具有较好的重现性.     

市售大黄及三黄片中蒽醌类活性成分的胶束电动毛细管色谱含量测定

建立了胶束电动毛细管色谱分离和测定大黄及其制剂三黄片中蒽醌类活性组分的方法．考察了背景电解质pH、表面活性剂浓度、有机改性剂种类和浓度对分离的影响．实验结果表明：在缓冲液pH为9．5、SDS浓度为25mmol／L、乙氰浓度为20％时的优化条件下,大黄及三黄片中蒽醌类活性组分得到基线分离且方法具有较好的重现性．     

电动流动分析-胶束电动毛细管色谱联用测定食品防腐剂

采用电动流动分析(EFA)和胶束电动毛细管色谱(MEKC)联用系统测定了食品中的防腐剂.EFA系统设备简单便携、易于实现自动化.EFA由一台自制电渗泵、5个电磁切换阀(由计算机通过自制接口卡和自编VC语言程序控制)和一个固相萃取微柱组成,采用EFA-MEKC低试剂消耗接口,可减少含贵重试剂的缓冲液消耗.MEKC缓冲溶液为100 mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS) 20 mmol/L Na2B4O7(pH 9.3).使用对羟基苯甲酸(PBA)为内标物,方法可在15 min内分离测定6种防腐剂,峰面积相对标准偏差小于3.4%;检出限范围为0.04～0.1 mg/L;实际样品的回收率为91.4%～104%.     

几种核苷的毛细管胶束电动色谱分离

在胶束电动色谱模式下,考察了影响核苷分离的缓冲溶液、SDS浓度、pH、表面活性剂、有机添加剂、分离温度及外加电压等重要因素,并优化了关键的分离条件,建立了一种简单快速的利用毛细管胶束电动色谱DAD检测器分离分析核苷的新方法。当缓冲溶液为36 mmol/L硼酸缓冲液(pH 9.0)、30 mmol/L SDS和3%(V/V)乙腈,分离电压为25 kV和分离温度为25℃时,5种核苷在6 m in内实现了令人满意的基线分离。在优化的条件下,对其线性范围、检出限和重现性进行了测定。结果表明,核苷的迁移时间的重现性<1%;面积的重现性<3%。所建立的分离方法的线性范围宽,检出限低,重现性好。     

胶束电动毛细管色谱分离测定嘌呤衍生物

用胶束电动毛细管色谱(MECC)分离测定了咖啡因、茶碱、次黄嘌呤、黄嘌呤及尿酸五种嘌呤衍生物。研究了背景缓冲液浓度、pH值、十二烷基硫酸钠(SDS)浓度、分离电压、温度及进样时间等因素对五种嘌吟衍生物分离的影响。在选定的实验条件下,五种化合物在8min内达到基线分离。该方法具有快速、准确、重现性好等优点,已用于尿样、茶叶及复方茶碱片等样品的测定,结果满意。     

油田水中烷基酚的胶束电动色谱分离

采用硼酸盐-十二烷基硫酸钠胶束电动色谱对油田水中存在的烷基酚进行了分离分析。考察了影响分离的各种不同因素：缓冲液浓度、体系的pH值、胶束溶液浓度、分离电流、管住温度及有机添加剂β-环糊精等。在恒流100μA下,38min内可分离20种烷基酚。采用Cl－TBP萃淋树脂对油田水样进行了浓缩富集预处理。     

毛细管电泳法测定肝素和低分子量肝素平均硫酸化程度

肝素和低分子量肝素(LMWHs)作为临床上常用的抗凝血药物,其抗凝血活性与硫酸化程度(SD)密切相关。然而,肝素类药物的生产需经历一系列复杂的工艺过程,在制备和储存过程中,肝素的硫酸基团容易水解丢失,影响抗凝血活性,这将直接影响肝素药物的使用安全性。为保证产品质量,需要发展一种快速检测肝素硫酸化程度的技术,以监测原料质量和工艺条件的稳定性。虽然已有一些测定肝素硫酸化程度的报道,但这些方法均有局限性,不适用于肝素生产的质量控制。为此,开发了一种基于毛细管电泳技术(CE)检测肝素和低分子量肝素的平均硫酸化程度的方法。首先,用肝素酶混合液彻底消化未分级肝素(UHF)和低分子量肝素,然后用毛细管电泳分离酶解得到的所有寡糖和二糖构建模块,并对它们进行定性和定量分析。随后,根据每种寡糖和二糖的峰面积及其硫酸酯基团的数量,便可计算出每个构成肝素二糖单元硫酸化程度的平均值。使用该方法对来自两个生产商各4个批次依诺肝素(低分子量肝素)和5个批次肝素原料进行检测,并计算了各批次样品的相对标准偏差(RSD),对不同厂家生产的依诺肝素平均硫酸化程度进行了比较,验证了该方法的实用性。该方法灵敏度高,准确可靠,分...     

胶束电动毛细管色谱法检测红曲米中的莫纳可林K

建立了测定红曲米中莫纳可林K含量的胶束电动毛细管色谱(MEKC)方法。考察了运行缓冲液的种类、pH及其浓度、有机添加剂、十二烷基硫酸钠(SDS)的浓度和分离电压等实验条件对电泳分离效果及检测灵敏度的影响。在优化的实验条件下,以20 mmol/L硼砂(pH 10.6,含10%(体积分数)乙醇和40 mmol/L SDS)作为缓冲溶液,莫纳可林K能在23 min内实现很好的基线分离,线性范围为5.00～100.00 mg/L,线性相关系数为0.9976,检出限(以信噪比(S/N)为3计)为0.13 mg/L,加标回收率为98.5%～99.5%。精密度和稳定性试验中,峰面积和迁移时间的相对标准偏差均小于3%,表明重复性良好。该方法简便、快速、灵敏,可用于红曲米中莫纳可林K含量的测定。     

离子液体对胶束电动色谱胶束微结构以及分离效果的影响

考察了离子液体对胶束电动色谱胶柬微结构以及分离效果的影响.研究结果表明,离子液体使胶束的表面电荷密度变小、粒径变大及其内核极性增大.以泼尼松、氢化可的松和泼尼松龙为分析对象,氢化可的松与泼尼松龙在十二烷基硫酸钠(SDS)胶束体系中不能实现分离.而在SDS-离子液体混合介质(20 mmol/L SDS-10 mmol/L...     

胶束电动毛细管色谱法同时测定西洋参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1

建立了西洋参中人参皂苷Rg1、Re及Rb1同时分离测定的胶束电动毛细管色谱新方法,以解决西洋参样品中难溶于水的3种人参皂苷的准确定量问题。以40.2 cm(有效长度30 cm)×50 μm的熔融石英毛细管柱为分离柱,分离缓冲液的组成为V(15 mmol/L Na2B4O7+30 mmol/L H3BO3 (pH 9.0)+100 mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)+30 g/L聚乙二醇35000):V(甲醇):V(异丙醇)=2:1:1,于214 nm下检测。详细研究了影响分离的因素。Rg1、Re及Rb1检出限(信噪比(S/N)为3)分别为30、40及30 mg/L,定量限(S/N=9)分别为90、120及90 mg/L,加标回收率为87.4%～95.2%。用该法测定了西洋参标准物质,并与高效液相色谱法的检测结果进行了比对,结果吻合。应用该方法分别测定了中国、加拿大及美国的西洋参,获得满意的结果。     

邻苯二甲酸为背景吸收电解质的毛细管电泳法测定低分子量肝素中的阴离子

在生产和贮存低分子量肝素的过程中,糖链上的硫酸酯基团会被水解而损失活性,因此肝素样品中常可以检测到游离的硫酸根离子,此外在生产过程中还会引入其他阴离子。为了检测低分子量肝素的质量稳定性,常用离子色谱检测低分子量肝素中游离的阴离子。但是相对分子质量较大的低分子量肝素会污染离子色谱柱和抑制器。为此发展了一种灵敏的毛细管电泳方法用于测定低分子量肝素中游离的SO~(2-)_4、Cl~-、F~-、PO~(3-)_4和OAc~-。不同于常用的背景吸收离子铬酸根,采用邻苯二甲酸根作为背景吸收电解质。与铬酸根相比,邻苯二甲酸根与所有待测阴离子电泳淌度匹配得更好,因此可以获得较窄的峰形。而且邻苯二甲酸根在230 nm检测波长下的摩尔吸光系数(4 754 L/(mol·cm))比铬酸根(254 nm,2 400 L/(mol·cm))高。因此,可以将毛细管电泳检测阴离子的灵敏度提高到与离子色谱法相当的水平。通过验证,该方法在0.002~1 mmol/L的浓度范围内具有较好的线性关系,日内(n=6)和日间(n=3)迁移时间和峰面积的相对标准偏差均小于3%。所测阴离子的检出限(S/N=3)和定量限(S/N=10)分别为0.4~0.8μmol/L和2~4μmol/L。该方法可用于监测低分子量肝素的稳定性。     

阴离子耗尽进样胶束扫集毛细管电动色谱法在线富集测定甘草黄酮类化合物

建立了一个毛细管胶束电动色谱(MEKC)在线富集阴离子耗尽进样(ASEI)联用扫集(sweeping)技术测定3种甘草黄酮化合物(异甘草素、甘草素和甘草苷)的方法。考察了MEKC的分离条件和富集体系的优化条件,其中样品基质、水塞进入时间、进样时间对目标化合物的富集效果有较大的影响。在优化实验条件下,异甘草素、甘草素和甘草苷的富集倍数分别提高了110、120、300倍,检出限分别为0.015、0.014、0.011mg/L。该方法用于中药制剂中甘草素、异甘草素和甘草苷含量的测定,回收率在90.6%～107%之间,相对标准偏差(RSD)均小于4.5%(n=3)。实验证明,该方法可成功地应用于实际样品中甘草素、异甘草素和甘草苷含量的测定     

Determination of doxycycline in pharmaceuticals and human urine by micellar electrokinetic capillary chromatography

Micellar electrokinetic capillary chromatography (MEKC) was performed at 25 °C and 30 kV (under a pressure of 15 mbar), using 30 mM borate buffer containing 60 mM sodium dodecysulfate (SDS) and 5% (v/v) methanol as background electrolyte (pH 9.0) to determine doxycycline. UV detection was at 350 nm. The method was shown to be specific, accurate (recovery was 100.3 ± 1.0%), linear over the tested range (correlation coefficient 0.9995) and precise (RSD <1.9%). The method was used to determine doxycycline in tablets, capsules and human urine after oral application.     

Determination of ethinylestradiol and gestodene in oral contraceptives by micellar electrokinetic chromatography

Summary A micellar electrokinetic chromatographic method is presented which permits quantification of ethinylestradiol and gestodene in pharmaceutical products. Separation was carried out at 25°C and 25 KV, using a 20 mM borate buffer (pH 9.2), 15 mM sodium dodecylsulfate in 30% acetonitrile-water (v/v). Under these conditions analyses were carried out in 7 min. Four different oral contraceptives were analysed and the results compared favourably with those of a reference liquid chromatographic method.     

毛细管胶束电动色谱法分离测定中药半枝莲中的7种有效成分

建立了毛细管胶束电动色谱同时分析检测中药半枝莲药材及其膏剂中黄芩素、柚皮素、汉黄芩素、野黄芩苷、芹菜素、木犀草素和原儿茶酸7种有效成分的方法。半枝莲样品中7种有效成分经甲醇超声提取。实验考察了运行缓冲溶液的pH值和浓度、添加剂、检测波长、分离电压和进样时间等重要参数对目标物分离的影响。得到的优化条件为: 运行缓冲液50 mmol/L硼砂-0.20 mol/L硼酸溶液(pH 8.4),含8.5 mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS),分离电压25 kV,检测波长260 nm和335 nm。在此条件下,7种组分于12 min内达到基线分离。各组分在8×10~6～3.2×10~4mol/L范围内呈良好的线性关系,相关系数(r2)为0.9965～0.9999;检出限为7.0×10~8～2.0×10~6mol/L;回收率均大于85%。该方法提取简便、准确可靠、重复性好、灵敏度高,可以用于中药半枝莲中7种有效成分的定量检测。