植物乳杆菌真空冷冻干燥保护剂配方优化

采用单因素实验和Box-Behnken响应面实验设计联用的方法,筛选和优化植物乳杆菌NCU116真空冷冻干燥的保护剂配方.单因素实验结果表明:海藻糖、D-山梨醇和脱脂奶粉3种保护剂效果好,能够显著提高菌种对冷冻干燥环境的耐受能力.响应面实验以上述3种保护剂为自变量,细胞存活率为响应值,结果表明:以脱脂奶粉、海藻糖和D-山梨醇的浓度分别为9.24%、4.47%和13.42%作为冻干保护剂配方进行验证试验,细胞存活率达到91.76%±1.82%,与理论预测值相符.     

极端嗜盐菌冻干保藏及其质检稳定性的研究

采用优化组合保护剂冷冻干燥２０株极端嗜盐菌，于４℃冷库保存２年，经复水测定，全部菌株保持较高存活性．用ＴＥＮＳ法对其中９株菌Ｒ１，ＲＦ１，Ｊ７，Ｓ９，Ｔ４～１，Ｊ６，Ｒ６～１，Ｒ６～７和Ｒ６～５作质粒稳定性检测，含质粒的菌株ＲＦ１，Ｊ７，Ｓ９，Ｔ４～１，Ｒ６～５于４℃保存２年后，质粒稳定存在；而菌株Ｒ１，Ｊ８，Ｒ６～１和Ｒ６～７冻干保存前后均末检测到质粒．结果表明：优化组合保护剂不仅能有效地用于极端嗜盐菌的冷冻干燥保藏，还能保持宿主质粒的稳定性．     

盐生盐杆菌灭活原生质体融合的研究

通过双亲灭活方法将二株具不同遗传学特性的盐生盐杆菌Ｊ７（含质粒，不产紫膜）和Ｒ１（产紫膜，不含质粒）进行原生质体融合试验．结果表明，在以３０％ＰＥＧ６００为助融剂，加２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ条件下，４０℃保温１ｍｉｎ，获得融合率为０．７６×１０－５的融合子．这些融合子具有双亲菌株的某些特征，其中２２％的融合子既含有质粒又产紫膜，这些融合子对于进一步研究质粒与紫膜的关系，以及筛选高产紫膜的优良菌株，均有十分重要的价值．     

盐生盐杆菌启动子DNA片段的特征序列及其功能分析

利用启动了探针质粒pKK232－8从古菌盐生盐杆菌中分离到许多具有细菌基因启动子功能的DNA片段,对其中3个片段RM07、RM08和RM13的序列测定,发现这3个片段上均具有典型的细菌基因启动子的保守序列（－35和－10区）,其中的2个片段RM07和RM13还分别具有古菌或真核生物启动子的典型特征序列,利用大肠杆菌－酵母菌启动子探针梭载体pYLZ－2将3个片段分别导入大肠杆菌和酵母菌中,通过检测（－半乳糖苷酶活性,进一步从功能上获得了确证,这是首次从结构和功能上发现并证实了来自古菌的DNA片段上具有二界或三界生物的特征,从而为进一步揭示古菌之谜和丰富生物的 进化关系提供了新的信息和途径,并有可能为构建双功能表达载体提供新的启动子来源。此外,在所获得的3个片段上还发现了类似于细菌σ^54启动子的典型,这是否暗示古菌为了适应极端环境所进行的转录调控有关,还有待进一步的研究。     

具有真细菌基因启动子活性的古生菌DNA片段

以大肠杆菌启动子探测质粒pKK232-8 为载体,用4 组限制性内切酶分别消化古生菌盐生盐杆菌R1(Halobacterium halobium )的染色体DNA,在体外进行重组,转化E.coliDH-5α感受态细胞,得到12 个转化子(T1～T12),其抗性水平分布在10～500 m g/L的区间内. 将这些转化子所含质粒分别命名为pSX1～pSX12,限制性酶切分析表明,这些质粒各插入了一段不同的外源DNA 片段,杂交分析表明,抗性最强的转化子T11 所含质粒pSX11 上插入了一段来源于盐生盐杆菌R1 染色体的DNA 片段. 该DNA 片段在大肠杆菌中具有启动子功能.     

嗜盐嗜碱芽孢杆菌NTT76启动子和信号肽序列的克隆及表达

利用启动子信号肽探测型质粒pGPB14,从嗜盐碱芽孢杆菌NTT76的总基因组中克隆具有启动子和信号肽功能的NDA片段,共得到41个转化子,其氨苄青霉素抗性水平在1000－12000mg/L之间,从3个不同抗性不平的转化子中提取重组质粒,酶切显示,外源插入片段在100－500bp之间,将重组粒质转化枯草芽孢杆菌,也同样使枯草芽孢杆菌具有分泌β－丙酰胺酶的功能,β－丙酰胺酶活力测定表明,大肠杆菌产生的酶主要积累在周质空间,而枯草芽孢杆菌产生的酶主要分泌在胞外,对外源插入片段进行定列测定发现,所有片段均含有启动子区、核糖体结合位点和信号肽编码区域。     

基于正交试验法的管桩离心工艺优化

通过正交试验法探索管桩最佳离心工艺,找出了离心工序影响混凝土密实度的主要因素,从而优化了离心工艺参数,保证了管桩质量,提高劳动生产率,降低生产成本,同时为优化管桩离心工艺提供1种方法和经验．     

一株嗜盐严格厌氧细菌S191的分离与系统发育分析

采用Hungate滚管法,从东北太平洋结壳区深海沉积物中分离纯化得到中度嗜盐、严格厌氧发酵细菌S191,通过扩增及测定其16S rDNA基因序列,利用“Clustalx”和“Mega”软件对该序列作同源性分析及系统发育分析,建立了嗜盐严格厌氧细菌属的系统发育树,表明菌株S191的16S rDNA基因序列与Halanarobium属菌株的最高同源性为98．5％,革兰氏染色呈阴性、直杆状、0．3～0．6μm×1．8～3．0μm、无运动、不产生芽孢,生长NaCl质量浓度为5％～25％,最适NaCl质量浓度为7．5％～10％,生长PH值6．0～8．9,最适pH值为7．8～8．0,生长温度15～42℃,最适温度为32～37℃,最佳条件下代时约3．2h,初步鉴定为Halanarobium属内的一个新成员．     

新疆吐鲁番盆地的嗜热细菌

从新疆吐鲁番盆地分离出十二株嗜热(生长温度为:25℃～73℃,最适温度为:45℃～60℃)、革兰氏阳性芽孢杆菌,经鉴定为Bacillus spp。     

嗜盐古生菌AJ6的分离及系统发育分析

从新疆阿尔金山国家自然保护区阿牙克库木湖分离纯化得到嗜盐古生菌AJ6,革兰氏染色呈阴性、杆状、少数球形、菌体大小为0.2～0.6 μm×1.6～4.2 μm,最适NaCl和Mg2+质量浓度分别为15%和0.6%,在pH为6.0～7.0条件下生长良好.在此基础上,进一步通过PCR方法扩增了菌株AJ6的16S rRNA基因(16S rDNA),测定了该基因的核苷酸序列,并利用"Clustalw"软件和"PHYLIP"软件包分析16S rDNA序列,对其进行同源性比较和系统发育学分析,建立了嗜盐古细菌的系统发育树.结果表明菌株AJ6与Nnm.pallidum、Nnm.pellirubrum和Nnm.versiforme分在同一类群中,16S rDNA序列同源性分别为97.47%,96.44%和98.12%,菌株AJ6是Na-trinema属中的一个新成员,命名为Natrinema altuensis.菌株AJ6的1 6S rDNA序列已登陆到GenBank,其序列号为AY277584.