金堂黑山羊血液蛋白遗传多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）研究了金堂黑山羊血液运铁蛋白（Tf)、后白蛋白(Pa）及白蛋白(Alb)三个基因座的遗传多态性,并计算了金堂黑山羊与成都麻羊、湘东黑山羊等七个山羊群体的欧氏遗传距离。结果表明：金堂黑山羊群体中Tf和Pa两个基因座均表现出多态性、Alb基因座呈单态;Tf和Pa两个基因型分布均符合Hardy-weinberg定律;金堂黑山羊群体内的基因一致度高、基因多样度低、平均等位基因有效数少,是宝贵的山羊遗传资源。     

川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊PRLR基因cDNA克隆及序列分析

根据GenBank中绵羊的PRLR基因序列设计引物,以川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊垂体总RNA为模板,通过RT-PCR技术对川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊PRLR基因cDNA克隆及进行序列分析,以期为进一步研究该基因与山羊的繁殖性能奠定理论基础.结果表明:川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊PRLR基因编码区均长1746bp,均编码581个氨基酸.川中黑山羊(金堂类群)PRLR基因编码区与藏山羊、绵羊、牛、牦牛野猪和人的同源性分别为99.71%、99%、95%、95%、83%和80%.以核苷酸序列构建分子系统进化树,川中黑山羊(金堂类群)先与藏山羊聚为一类,再与绵羊聚为一类,后与牛和牦牛聚为一类,然后与野猪聚为一类,最后与人聚为一类.     

金堂黑山羊数量性状主基因的研究(一)

以偏离正态分布检测法分析了金堂黑山羊体重、体高、体长、胸围、胸深、胸宽和管围七个数量性状。结果表明：体重、体高、体长、胸围和胸深五个数量性状有主基因的作用。     

金堂黑山羊与白玉黑山羊生态特征的比较研究

采用生态地理比较方法研究金堂黑山羊与白玉黑山羊的生态特征,结果表明,金堂黑山羊与白玉黑山羊在生态地理条件、饲养管理、外貌特征和生长性能等方面存在较大的差异.金堂黑山羊的产肉性能高,繁殖性能好,是一个优良的地方肉用山羊品种.白玉黑山羊产绒性能较好.     

乐至黑山羊催乳素受体基因cDNA克隆及序列分析

根据GenBank中绵羊催乳素受体（PRLR）基因序列（AF041257.1）设计1对引物,以乐至黑山羊脑垂体总RNA为模板,通过RT-PCR技术对乐至黑山羊PRLR基因cDNA克隆测序和序列分析.结果表明：扩增出的乐至黑山羊PRLR基因cDNA序列长为1743bp,编码581个氨基酸.乐至黑山羊与绵羊、牦牛、欧洲牛、野猪和人的核苷酸同源性分别为：98.34％、94.67％、94.27％、77.48％、74.33％.以核苷酸序列构建分子进化树,乐至黑山羊先与绵羊聚为一类,再与欧洲牛和牦牛聚为一类,而后与野猪聚为一类,最后与人聚为一类.     

绿色荧光蛋白基因在裂殖酵母中的表达

将绿色荧光蛋白基因编码区序列克隆到大肠杆菌－裂殖酵母穿梭质粒ｐＲＥＰ３的ＢａｍＨⅠ￣ＳｍａⅠ位点,使之位于一个受硫胺素抑制的启动子和终止子的控制之下,用该质粒转化裂殖酵母,转化菌落于阳光下呈绿色,在３９５ｎｍ紫外光下发出强烈绿色荧光,在荧光显微镜下,用蓝光激发,可见该基因的表达明显受硫胺素的抑制,在没有选择压力的条件下,质粒丢失现象很严重,在完全培养基上,只有２０％的细胞发光,在丰富培养基上,发光     

突变型绿色荧光蛋白基因在昆虫细胞和幼虫中的表达

用细菌－杆状病毒穿梭系统将一套含有绿色荧光蛋白基因和完整多角体蛋白基因的表达盒转座到ＡｃＮＰＶ－Ｂａｃｍｉｄ的Ｔｎ７转座接受位点,从而构建出一种带有ｇｆｐ基因和完整多角体基因的重组杆状病毒,用这一重组病毒感染细胞能稳定地殂多角体。     

以UPS构建的酿酒酵母表达载体及GFP的表达

利用通用载体质粒融合系统UPS构建出了以GFP（绿色荧光蛋白）为报告基因的酵母表达载体，经PCR、电泳、测序等手段证明了构建的准确性，同时验证了UPS的高效性及简便性。     

绿色荧光蛋白基因在烟草植株中的表达

用冻融法将含有绿色荧光蛋白基因的质粒ｐＧＬ２－ＧＳ导入农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４（ｐＴＯＫ２３３），两个质粒发生同源重组，形成一个元载体ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ，农杆菌菌株ＬＢＡ４４０２４（ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ）经叶盘法转化烟草，筛选具有卡霉素抗性的愈伤组织，诱导成苗、ＰＣＲ扩增发现，绿色荧光蛋白基因在９０％的再生存在，在荧光显微镜下，使用蓝色激发光观察再生植株的徒手切片和压片发现，８０％以上的再生植株     

ADK基因在酿酒酵母中的表达和ATP合成研究

采用基因工程技术,将催化ＡＴＰ合成的酶－ＡＤＫ的基因克隆进表达载体ＹＥｐＮ１８１Ｐ２获得重组质粒ＹＥｐＮ－ＡＤＫ,转化酿酒酵母ＧＲＦ１８后,ＡＤＫ基因获得表达。用重组菌株ＧＲＦ１８（ＹＥｐＮ＿ＡＤＫ）发酵合成ＡＴＰ其产率比对照菌株ＧＲＦ１８提高７５％。     

Expression of the SOD gene from Trichoderma harzianum in Saccharomyces cerevisiae

Superoxide dismutases are metalloproteins which play a major role in defense against oxygen radicalmediated toxicity in aerobic organisms. Such proteins are important endogeneity cytoprotection factor involving defence. A 751-bp full-length cDNA sequence of an SOD gene was isolated from the Trichoderma harzianum. The full-length cDNA of the SOD gene consists of one 465-bp open reading frame nucleotide, which encodes a 15.7-kDa polypeptide consisting of 154 amino acid residues. Sequence analysis revealed that SOD gene has more than 72%-86% amino acid sequence homology with those of other fungi. The SOD gene was integrated into the genomic DNA of pYES2 by insertion into a single site for recombination, yielding the recombinant pYES2-SOD. SOD expressed by pYES2-SOD was induced by galactose. We test whether SOD could offer abiotic stress resistance when it was introduced into yeast ceils. A transgenic yeast harboring T. harzianum SOD was generated under the control of a constitutively expressed GAL promoter. The results indicated that SOD yeast transformants had significantly higher resistance to salt and drought stress.     

从椭圆酿酒酵母中提取核酸

采用正交设计试验等方法研究了从椭圆酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中提取RNA的适宜条件为NaOH浓度1．5％,SDS浓度2％,NaCl浓度4％,抽提温度95℃,抽提时间2h。RNA粗品收率85．1％,纯度90．5％,可满足核苷酸的生产要求。     

蓝藻光合基因psaC在酵母中的转化和表达

聚球蓝藻（Synechococcus sp.PCC 7002）的psaC是光系统I的FA/FB脱辅基蛋白基因,其分子量8.9kD蛋白中含有2个4Fe-4S中心,构建了psaC基因的表达载体pYES2-psaC,将表达载体转化到酵母（Saccharomyces cervisiae）中,Southern杂交证明psaC基因已被转化,诱导培养后的蛋白电泳显示psaC基因获得高效表达。     

重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原过程的限制性步骤

考察了重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原（HBsAg）的限制性步骤，发现在对数生长期的中后期，与发酵初期相比，外源质粒的拷贝数下降了40%，此后质粒烤贝数在低水平保持稳定。在发酵过程中添加乙醇胺，抗原基因启动子的转发效率下降了24%，但抗原效价上升了31%，说明HBsAg表达的主要限制步骤在抗原多肽的翻译和颗粒形成的后加工过程。     

酿酒酵母金属硫蛋白的表达、纯化及活性检测

通过PCR从酿酒酵母基因组DNA上扩增得到酿酒酵母基因CUP1编码的金属硫蛋白序列.将其编码序列克隆到质粒pTWIN1构建重组表达质粒pTWIN1-MT,转化大肠杆菌感受态细胞ER2566.重组融合蛋白CBD-intein1-MT在IPTG的诱导下得到表达,经SDS-PAGE和蛋白质印迹鉴定.用重组菌分别进行铜离子耐受...     

Heterologous Expression of Amylase Gene from Saccharomycopsis fibuligera in an Industrial Strain of Saccharomyces cerevisiae

0IntroductionBeoefr y ehaarss baenedn bar epwoperusla orft beenv edreasgceri bfoer b trheowuisnagnadssthe oldest biotechnological process[1]. During thebarley malting and mashed operationin the produc-tion of wort , the lower maltooligosaccharides arehydr…     

人类超氧化物歧化酶在酿酒酵母系统中的高效表达

超氧化物歧化酶(SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用．对一从人类胎肝cDNA文库中筛到的SOD基因片段进行重组、克隆,并得到带有启动子PADHZ—GAPDH和终止子TADHI的高效稳定的酿酒酵母表达载体pHC11-hSOD．转化酿酒酵母DCO4后获得工程菌DCO4／pHC11-hSOD．表达产物经破壁后SDS-PAGE电泳检测为20ku的条带;酶活性测定结果表明发酵液有40万U／L的hSOD活性．此外,还研究了工程菌的发酵条件和hSOD产物的纯化方法．纯化产物在SDS-PAGE上和Superdex分子筛检测显示,所得产物的纯度已达95％以上．     

两种葡萄糖氧化酶基因分别在酿酒酵母及毕赤酵母中的重组表达

从Aspergillus niger CICC 40179中克隆得到了葡萄糖氧化酶(GOD)基因,并在酿酒酵母AS2.489中通过载体p2μRCMB进行重组表达.合成来源于A.niger的一段GOD基因(美国专利号为5094951),同时对其进行了少量密码子的同义替换以避免部分酶切位点,将该段合成的序列通过甲醇诱导型载体p PICZαA在毕赤酵母X33中进行了重组表达.比较分析两种葡萄糖氧化酶的分泌表达情况.