Bc1-2 基因加强表达对 OA 诱发的细胞编程死亡的效应

ＯＡ能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞进行编程死亡．死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ有控降解成约２００ｂｐ左右的片段，且这一过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制．将编码Ｂｃ１－２全长蛋白质的ｃＤＮＡ植入ｐＸＪ４１ｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒启动子控制．形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达较大量的２６ｋｄＢｃ１－２蛋白，而反义转染子则不表达．增强表达的Ｂｃ１－２基因产物对ＯＡ引ＳＫ细胞编程死亡无抑制效应．     

细胞凋亡与Bcl—2相关基因

细胞凋亡是一种通过内源ＤＮＡ内切酶的激活而发生的细胞自然死亡，是机体的一种正常生理机制。但在病理状态下异常的细胞凋亡又与肿瘤等系统疾病的发生发展有密切关系。     

去除血清诱发细胞凋亡和Bcl—2蛋白的裂解

以过表达原癌基因Bcl-2的HL－60细胞为材料,通过去除血清而诱发凋亡,应用Western blot方法检测细胞凋亡过程中Bcl-2裂解为分子量大约为20kDa的片段,进一步检测Bcl-2的结构变化,结果显示Bcl-2蛋白裂解发生在N端,裂解产物丢失了BH4结构域。通过加入凋亡相关蛋白酶caspase-3抑制剂,可抑制20kDa片段的产生,表明凋亡过程中caspase-3的激活,但细胞生长率测定表明,caspase-3抑制剂并不能阻止去血清诱发的细胞死亡。     

HCAP1基因对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl - 2的作用

目的：研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax／Bcl-2的作用。方法：用脂质体介导的基因转移方法，把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中，用流式细胞术和Hochest 33258荧光染色检测细胞凋亡；用Western blot检测外源HCAP1基因对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2蛋白表达的调节。结果：外源HCAPl基因导入Raji细胞24、48和96h后，细胞凋亡率增加。Western blot显示Bax／Bel-2蛋白表达比值明显增高。结论：转染外源性HCAP1基因可诱导Raji细胞凋亡，使Bax／Bcl-2蛋白表达比例上调可能是HCAP1诱导凋亡的机制之一。     

凋亡调控基因Bcl-2,Bax在正常子宫内膜中的表达及其意义

细胞凋亡（apoptosis）意为“凋落”,又称程序性细胞死亡（programmed cell death,PCD）,指有核细胞在一定的条件下通过启动内部机制,发生死亡的过程。PCD对维持个体组织器官的正常形态和功能起着重要的作用,目前认为Bax主要诱导凋亡,Bcl-2则抑制凋亡。由于子宫内膜在E、P激素刺激下内膜组织进行快速的增生和分化,从而成为很好的研究细胞凋亡的模型,可用来研究激素依赖型的Bcl-2及其相关基因Bax在子宫内膜的表达情况。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1标本来源 标本取自甘肃省妇幼保健医院自19981999年间手术切除的正常子宫内膜标…     

育龄妇女子宫内膜Bcl—2的周期性变化

应用免疫组化方法研究育龄妇女子宫内膜的Ｂｃｌ－２表达,发现子宫内膜腺上皮细胞的Ｂｃｌ－２表达在月经周期中存在周期性变化,从增生早期至分泌早期,腺上皮细胞均呈Ｂｃｌ－２阳性反应,增生中晚期Ｂｃｌ－２表达最强,至分泌中晚期则表达基本消失。子宫平滑肌细胞中的Ｂｃｌ－２表达在月经周期中则不存在明显的周期性变化。腺上皮细胞Ｂｃｌ－２的周期性变化与子宫内膜的周期性增生和脱落是一致的,说明Ｂｃｌ－２可能具有抑制子宫内膜细胞凋亡的作用。此外,子宫内膜腺上皮Ｂｃｌ－２表达的周期性变化可能受雌、孕激素的调控。     

BCL—2和细胞程序性死亡的调控

细胞程序性死亡是一种自杀性细胞死亡,乃多细胞高等生物去除有害及多余细胞之途径,为生物体正常的生长发育及功能维持所必需。本文阐述了BCL—2基因与程序性细胞死亡调控之间的关系。     

RATS1基因对人食管癌细胞c—myc基因表达的降调…

将含有ＲＡＴＳ１ｃＤＮＡ的真核表达载体ｐＣＤＶ１与含有ｎｅｏ抗性基因的表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ法共转染人食管癌细胞系ＥＣ１０９细胞。结果发现：转染ＲＡＴＳ１基因后的抗性克隆细胞生长受到抑制，形态发生明显改变，并且逐渐脱落死亡。经ＲＴ－ＰＣＲ分析发现，转染后有ＲＡＴＳ１基因表达的细胞克隆，ｃ－ｍｙｃ基因表达降低，两者呈反向相关，即ＲＡＴＳ１基因表达愈高，ｃ－ｍｙｃ基因表达降低愈     

重组PAI—2基因在NIH3T3细胞中的活性表达

构建了人ＰＡＩ—２ｃＤＮＡ睥达质粒，以ＮＩＨ３Ｔ３为转染宿主细胞，ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和ＰＡＩ活性扩散试验结果表明人ＰＡＩ—２ｃＤＮＡ可以在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中正确表达出ＰＡＩ—２蛋白，且具有抑制ＰＡ的活性，同时未能检测到ＮＩＨ３Ｔ３细胞表达ＰＡＩ—２蛋白质．为探讨ＰＡ—ＰＡＩ—２系统的调控机制打下基础．     

博莱霉素肺损伤大鼠细胞凋亡及bcl—2／bax基因的表达

目的：探讨细胞凋亡与博莱霉素诱导大鼠早期肺纤维化及bax,bcl-2对博莱霉素大鼠肺纤维化细胞凋亡的作用。方法：通过复制博莱霉素大鼠肺纤维化模型,采用TUNEL、免疫组织化学、原位杂交及透射电镜等技术,观察博莱霉素大鼠肺组织细胞凋亡的变化及bax,bcl-2,bcl-2mRNA和蛋白的表达。结果：博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化细胞凋亡明显增加,肺上皮细胞bax蛋白表达明显上调,bcl-2mRNA及蛋白表达明显减弱,间质细胞bcl-2mRNA及蛋白表达增加。结论：肺组织细胞凋亡及bcl-2表达下调可能参与博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的发生,凋亡相关基因bax,bcl-2mRNA及蛋白参与博莱霉素诱导大鼠肺纤维化细胞凋亡的调控。     

肺癌影像学表现与erbB—2,bcl—2表达相关性的初步观察

为了从基因水平探讨肺癌影学表现的分子生物学基础，利用免疫组化技术及计算机图象系统测定手术病理证实之３３例肺癌标本中癌基因ｃｒｂＢ－２、ｂｃｌ－２的表达水平，系统分析其表达水平影像学表现的相关性。结果显示肺癌的结影像学征象如肿块大小，三级支气管受累、胸膜受侵及肺门纵隔淋巴结转移均与其癌基因ｅｒｂＢ－２、ｂｃｌ－２的表达水平密切相关，而且这两类基因的表达对其影像学征象的影响呈现相互抑制的关系。     

Smad2基因在肺癌组织和细胞中的表达特点

目的 探讨Smad2基因在肺癌组织和细胞中的表达特点.方法 分析Smad2的mRNA和蛋白在肺癌组织和癌旁正常组织中的表达情况;收集患者的临床病理指标,并进行5 a随访,记录患者生存情况,分析与Smad2基因表达的关系.培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B、人肺癌细胞A549,检测Smad2的mRNA和蛋白表达水平;使用10μg/L的3-甲基胆蒽连续染毒培养至第10代、第20代、第30代、第40代,检测Smad2基因表达变化;使用Smad2过表达质粒、Anti-Smad2质粒分别转染A549细胞,比较细胞增殖、迁移和侵袭能力.结果 肺癌组织中Smad2的mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01).人肺癌细胞A549中Smad2的mRNA和蛋白表达水平明显高于人正常肺上皮细胞BEAS-2B(P<0.05).随着3-甲基胆蒽诱导人正常肺上皮细胞BEAS-2B恶性转化传代数的增加,Smad2的mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05).N2～N3期的肺癌患者Smad2基因低表达率明显高于N0～N1期的患者,肿瘤分期Ⅲ～Ⅳ期的肺癌患者Smad2基因低表达率明...     

bcl-2基因反义核酸对HL-60和K562白血病细胞生存的影响

目的：探索ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存的影响。方法：主要应用细胞培养和细胞克隆的方法,检测了ｂｃｌ－２基因反义核酸对ＨＬ－６０和Ｋ５６２白血病细胞系生存的影响。结果：ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度在２～８μｍｏｌ／Ｌ和６～１２μｍｏｌ／Ｌ分别对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的生存有明显的抑制效应,呈剂量－效应关系,二者起效应时间均为第３ｄ;ｂｃｌ－２基因反义核酸浓度为４μｍｏｌ／Ｌ时,对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞集落形成都有明显抑制效应。结论：ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞生存有明显的影响。     

erbB—2表达下调抑制人胃癌细胞增殖与EGF反应性的机制探讨

应用ＤＮＡ重组、基因转染、分子杂交、生长测定、裸鼠成瘤、凝胶迁移率改变分析等方法观察了人胃癌细胞中原癌基因ｃｒｂＢ－２的表达被其反义ＲＮＡ特异抑制后胃癌细胞恶性增殖、ＥＧＦ反应性及相关基因表达的变化。ｅｒｂＢ－２表达下调显著抑制了胃癌细胞的恶性增殖能力、ＥＧＦ的细胞增殖促进效应及对增殖相关基因ｃ－ｍｙｃ，ＥＧＦＲ的促进效应。与此同时，细胞周期蛋白激酶抑制物ｐ２１基因的表达显著增强。对其转录激活机制     

小鼠2—细胞期胚胎细胞电融合的研究

为了探索核移植克隆动物技术中的细胞融合参数，进行了小鼠２－细胞期胚细胞的电融合试验。直流电场强度为２ｋＶ／ｃｍ，脉冲过程４０μｓ时，效果较好，可以获得７０．５％的融合率和６４．５％的发育率，进一步提高电场强度，裂解死亡率也明显提高；采用非电解质溶液作为融合液。     

HER—2基因打靶对HeLa细胞生长的抑制

构建具有正，负筛选特性的ＨＥＲ－２基因打靶载体，ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐＰＮＴ１３０５．用电穿孔法把线法ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐＰＮＴ１３０５导入ＨｅＬａ经Ｇ４１８正筛选及丙氧鸟苷我筛选，选出了敲除了ＨＥＲ－２单等位基因的打靶命中细胞。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交表明，ＨＥＲ－２＾－１     

实验性全脑缺血再灌流CNSbcl—2基因变化研究

目的 探讨ｂｃｌ－２基因表达在全脑缺血再灌流不同时间的变化规律。方法 本试验在对小鼠双侧颈总动脉阻断再灌流后１，３，７，１４，２８，４２ｄ分别取额叶皮层海马区脑组织，采用免疫组织化学染色，逆转录ＰＣＲ技术对ｂｃｌ－２基因表达进行检验。结果ｂｃｌ－２基因在正常神经细胞中有较弱表达，再灌流１ｄ后其表达开始增加，到７ｄ时达高峰并持续到１４ｄ，与对照组有显著差异（Ｐ〈０．０１）。结论 ｂｃｌ－２基因抑制     

人RP2基因在果蝇胚胎细胞中的表达

将质粒pJLA503中的RP2编码cDNA用PCR的方法扩增,并与pIND-3myc质粒上的人c-myc编码序列连接到果蝇转基因载体pUAST上,构建了UAS－RP2－3myc和UAS－RP2(del6)-3myc融合质粒。用脂质体转染的方法,将质粒导入果蝇培养细胞系Schneider line2(S2),并用PCR加以证实,然后通过Western blot检测证明了RP2和RP2 del6的表达。证明了人的RP2基因在果蝇细胞中表达的可能性,说明果蝇系统是可以用来分析人的RP2基因功能的。     

CTLL—2／MTT法快速测定IL—2基因转移效率的研究

应用包装ＩＬ－２基因的逆转录病毒载体，将ＩＬ－２基因导入小鼠成纤维细胞ＮＩＨ－３Ｔ３和小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，建立了ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－２，ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７和Ｂ１６／ＩＬ－２－４等３个转基因细胞株，应用ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法快速测定各转基因细胞株分泌上清ＩＬ－２的浓度．转染效率最高的ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７其ＩＬ－２分泌量高达１４２２ｕ／（１０６ｃ·２４ｈ），表明这一基因转移系统能有效地将外源基因导入靶细胞．ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法能快速、简便、有效地检测ＩＬ－２的表达．