竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒五种磷脂酶A2的分离纯化和氨基酸序列分析

用超细Sephadex G-75凝胶色谱和C4反相高效液相色谱从竹叶青（Trimeresurus stejnegeri）蛇毒中分离纯化5种磷脂酶A2，并分别命名为PLA2－I（SWISS－PROT，P82892）、Ⅱ（SWISS-PROT，P82893）、Ⅲ（SWISS－PROT，P82894）、Ⅳ（SWISS－PROT，P82895）、V（SWISS－PROT，P82896）。SDS－PAGE测定它们的分子量分别为14．0、15．8、15．0、14．0和14．0kDa。等电聚焦电泳测得PLA2－I、Ⅱ、Ⅲ呈碱性，等电点大于8．8；PLA2－Ⅳ和V呈酸性，等电点分别为5．2和4．7。PLA2－Ⅳ和V有水解卵磷脂活性。用自动Edman降解法测定了PLA2－V的全部氨基酸序列和PLA2－I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的N－端部分氨基酸序列。PLA2－V由122个氨基酸残基组成，有14个Cys，并与其它来源的PLA2的氨基酸序列进行了比较。     

竹叶青蛇毒5‘—核苷酸酶对血小板聚集功能的抑制机制…

本文报道了竹叶青蛇毒中分离的５＇－核苷酸酶对家兔血小板的聚集抑制机制探讨。该酶能抑制ＡＤＰ、ＡＡ、ＴＭＶＡ、凝血酶诱导的血小板聚集，且对ＡＤＰ诱导的血小板聚集有明显的解聚作用。其抑制率与剂量增加成正比。该酶在抑制ＡＡ和ＴＭＶＡ诱导的血小板聚集的同时，对于血小板中５－羟色胺（５－ＨＴ）释放亦有明显抑制，抑制率同样与剂量相关，不能抑制ＴＸＢ２的生成。洗涤血小板抑制作用实验表明对竹叶青蛇毒５＇－核苷酸酶     

白唇竹叶青蛇毒类凝血酶基因的克隆和序列分析

通过分析多种已知的毒蛇蛇毒类凝血酶（SVTLEs）基因序列同源性,以保守的N和C末端氨基酸序列设计引物,克隆得到白唇竹叶青（Trimeresurus albolabris）SVTLE基因并分析其序列。以毒腺总RNA为模板进行RT—PCR,纯化并克隆至pMD18-T。结果表明,该酶基因大小为777bp;推测出其相应氨基酸序列含258个氨基酸残基,分子量为28．02kD,pI值为6．07;其3个可能糖基化位点为NDT103～105、NNS121～123和NRT251～253;与其它毒蛇的已知SVTLEs基因比较分析,推测出其含6对二硫键即Cys31—162、Cys50-66、Cys98．256、Cys142—210、Cys174—189和Cys200—225;其催化活性中心氨基酸残基为His65、Asp110和Ser204。分子进化树分析表明,毒蛇SVTLEs一级结构的进化具有一定种属特征,可为蛇的系统分类提供参考。     

蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定

采用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０、ＣＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ３２柱层析，从中华眼镜蛇中分离出神经生长因子（Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｅｒ，ＮＧＦ）。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法证明所得以的ＮＧＦ为单一组分，相对分子质量约为１．３×１０＾４。经凝胶等电聚焦电泳测得ＮＧＦ等电点ＰＩ约为７．０左右。经ＨＰＬＣ及电泳图像分析系统测得纯度为９８％。此ＮＧＦ等８ｄ鸡胚背     

蛇毒蛋白质毛细管高效液相色谱分离

利用高分离效能、高灵敏度的毛细管高效液相色谱法, 实现皮摩尔级微量蛇毒蛋白质的组分分离同时利用自行充填的毛细管高效液相色谱柱替代昂贵的原装柱, 既能较好分离复杂的蛇毒蛋白质, 又可满足不同的分离纯化要求     

蛇毒中生物活性酶的研究进展

蛇毒是一类包含蛋白质、多肽和金属离子等成份的混合物.蛇毒中的多种生物活性酶决定了其功能的多样性,例如凝血、溶栓、止痛和抗肿瘤作用等.然而,由于蛇粗毒免疫原性强和副作用多等缺点,其临床应用受到了一定的限制.随着新技术和分离纯化方法的发展,越来越多蛇毒产品的新功能被开发出来.针对蛇毒成分的分离纯化技术和分析鉴定方法,对研究...     

蛇毒蛋白质组学研究进展

就蛇毒蛋白质组学研究的主要方法、所取得的成就及存在的问题进行了综述.利用高通量质谱技术对蛇毒组分进行全方位研究,是近年来蛋白组学研究中的一个热点.蛇毒蛋白质组学研究包括粗毒分离、质谱分析及生物信息学鉴定三个部分.粗毒分离的主要方法包括双向电泳、凝胶过滤及反相-高效液相色谱;质谱分析的方法包括基质辅助激光解离-飞行时间质谱、液相色谱质谱联用、电喷雾离子化串联质谱和电喷雾离子化傅立叶变换离子回旋共振质谱;而利用MS-Fit或Mascot搜索引擎访问相应的蛋白质专门网站对质谱所获肽序进行查询则是生物信息学鉴定的主要方法.迄今,利用蛋白质组技术已经对游蛇科、眼镜蛇科、蝰科中的58个属100多种（亚种）蛇毒的毒物进行了研究,鉴定出了十多个蛋白质家族.这些结果不仅有助于增强人们对毒素进化与分化以及中毒机理的了解,并对新药设计中的先导化合物寻找具有重要意义.未来,蛇毒蛋白质组学研究在与高通量蛇毒组的绝对定量及所鉴定蛋白的功能表征有关的方法技术方面仍有待突破.     

硫酸铵盐析在蕲蛇毒凝血酶样酶分离中的应用

探讨了硫酸铵沉降对蕲蛇毒中凝血酶样酶的初步分离效果的影响 ,确定出最佳处理条件 :2 .0 %的蕲蛇毒在pH 5 .0及 4 5 %饱和度的硫酸铵溶液中盐析沉降蕲蛇毒中非凝血酶样酶杂蛋白 ,上清液即为所分离的凝血酶样酶组分     

蛇毒及其基因克隆研究进展

对蛇素及其基因克隆研究进行了综述.蛇毒是一种天然蛋白质,蛇毒制剂可抗凝、去纤、溶 栓、扩血管、降血压、治疗神经性疾病和各种中、晚期癌症,是目前治疗疾病的理想药物.随着分子生 物学技术的迅猛发展,克隆蛇毒基因的方法也日臻成熟.通过基因工程技术使获得大量的高纯度的 蛇毒各组分成为可能.     

蛇毒抗肿瘤活性成分的研究进展

癌症严重威胁人类健康,寻找有效的抗癌药物与方法,彻底攻克癌症,是世界医学界重要的研究课题.目前治疗癌症常用的药物一般为合成药物,但合成药物在治疗中可能会出现明显的毒副作用,天然药物越来越受到人们的重视.天然毒素在生物学、医学及药学等许多领域有广阔的应用前景,其中蛇毒的研究最为广泛.蛇毒的成分复杂且毒性较大,但研究发现蛇毒的许多组分可以抑制肿瘤生长,对肿瘤的治疗有很好的临床效果.概述了近年来关于蛇毒抗肿瘤的活性成分及机制的研究进展.     

蛇毒组学与抗毒素组学:蛋白质组学技术在抗蛇毒血清效价评估中的应用

蛇毒组学以蛋白组学研究方法为基础,实现了大规模解析蛇毒全蛋白组构成特征,为深度探讨蛇毒功能与进化提供了有力支持.为探索更为优化的抗蛇毒血清效价评估方法,以蛇毒组学为基础的抗毒素组学策略应运而生,极大地提高了评估结果的精准度与可靠性.文章主要介绍了蛇毒组学研究与相关策略的发展以及抗蛇毒血清效价评估方法的迭代,旨在为蛇毒组...     

国产六种小型蝰科毒蛇蛇毒免疫原性比较

以国产小型蝰科毒蛇短尾蝮（Gloydius brevicaudus）、岩栖蝮（Gloydius saxatilis）、乌苏里蝮（Gloydius ussuriensis）、山烙铁头（Ovophis monticola）、原矛头蝮（Protobothrops mucrosquamatus）和竹叶青（Trimeresurus stejnegeri）蛇毒为对象，用国产商用抗蝮蛇毒血清和抗五步蛇毒血清分别检测这6种蛇毒的免疫原性。间接ELISA和western blot两种方法的检测结果表明：6种蛇毒有共同的抗原组分，且在免疫反应中大部分组分表现出免疫原性；同种蛇毒和抗血清之间显示出最高的免疫结合强度；近缘物种间的免疫结合强度更接近；随着抗体浓度的升高，免疫结合强度增加。抗蝮蛇毒血清对短尾蝮、乌苏里蝮和岩栖蝮蛇毒的免疫中和效价高于抗五步蛇毒血清；两种抗蛇毒血清中和山烙铁头、原矛头蝮和竹叶青蛇毒的效价相近。     

短裙竹荪（Dictyophor a duplicata）多糖的研究（I）：Dd多糖的分离…

竹荪子实体经热水提取，乙醇沉淀，蛋白酶法和Ｓｅｖａｇ法相结合去蛋白，再通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００柱层析纯化，得到竹荪多糖（简称Ｄｄ）纯品，经凝胶过滤法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定表明，Ｄｄ多糖为均一的物质，Ｄｄ经紫外扫描，无核酸和蛋白质的特征吸收峰，ＩＲ－４００扫描表明典型多糖吸收峰，Ｄｄ的相对分子质量约为１９６０００。     

精制蛇毒乳膏治疗痤疮的疗效观察

选用中国医科大学老年病防治中心研制的精制蛇毒乳膏治疗100例额面痤疮患者。痊愈率65 % ,有效率99 % ,疗效满意     

蛇毒类凝血酶研究进展

对有关蛇毒类凝血酶(SVTLEs)的分布分类、理化性质、酶学性质、结构特征、基因克隆表达、临床应用等方面的研究资料进行了概括和综述.结果发现:SVTLEs主要分布在蝮亚科和蝰科毒蛇的毒液中;根据SVTLEs水解纤维蛋白原释放FPA和FPB的速度不同,可将其分为SVTLE-AB、SVTLE-A和SVTLE-B等3类;多数SVTLEs的分子量在30~50 kD,含6个二硫键,pI较低,部分SVTLEs的pI较高;SVTLEs可水解TAME和BAEE,其活性可被DFP和PMSF所抑制,但不被胰蛋白酶trypsin及凝血活性中心His的专一抑制剂TLCK和EDTA抑制;对SVTLEs的一级结构和二级结构研究较多,对高级结构研究有待深入;很多SVTLEs基因在大肠杆菌中成功获得了表达,但表达物不能被糖基化和正确折叠,故没有活性或活性不高,而其在真核表达系统中表达活性较高;部分碳水化合物具有稳定SVTLEs结构及提高SVTLEs的酶活力的作用;SVTLEs的临床应用涉及心肌梗塞、缺血性中风、血栓性疾病等疾病的治疗.SVTLEs未来的研究重点将集中于其在真核表达系统的表达和对其高级结构的解析.     

同步荧光法研究白眉蝮蛇蛇毒酶发色团的微环境

利用同步荧光技术对长白山白眉蝮蛇蛇毒中纯化得到的４ 种酶： 磷脂酶Ａ２ （ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２ , ＰＬＡ２） 、精氨酸酯酶（ａｒｇｉｎｉｎｅ ｅｓｔｅｒａｓｅ,ＡＥａｓｅ） 、纤溶酶（ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅ,ＦＥａｓｅ） 和Ｌ－ 氨基酸氧化酶（Ｌ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｏｘｉｄａｓｅ, Ｌ－ ａ ａ ｏｘｉｄａｓｅ） 进行了研究． 结果表明： 当Δλ＝ ２０ｎｍ 时, 酶的荧光主要由酪氨酸（Ｔｙｒ） 残基所贡献; 当Δλ≥７５ｎｍ 时, 酶的荧光主要由色氨酸（Ｔｒｐ） 所贡献． 而且, 长白山白眉蝮蛇蛇毒４ 种酶的Ｔｙｒ 和Ｔｒｐ 残基所处的微环境并不相同．     

长白山白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶的荧光淬灭研究

交替使用ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘ Ａ－ ５０ 离子交换和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－ ７５ 凝胶过滤层析技术, 从长白山白眉蝮蛇蛇毒（ Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｂｌｏｍｈｏｆｆｉｉ Ｕｓｓｕｒｅｎｓｉｓ） 中纯化得到了一种分子量为２９４５８ ±１５Ｄａ 的精氨酸酯酶活性组分． 本文研究了碘离子（Ｉ－ ） 和丙烯酰胺（Ａｃｒ） 对这种精氨酸酯酶的荧光光谱的淬灭作用,Ｉ－ 和Ａｃｒ 对精氨酸酯酶荧光的淬灭符合Ｓｔｅｒｎ － Ｖｏｌｍｅｒ 公式． Ｉ－ 仅能淬灭精氨酸酯酶约５４ ％ 的荧光, Ａｃｒ 可以将精氨酸酯酶荧光淬灭殆尽． Ｉ－ 和Ａｃｒ 对长白山白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶荧光淬灭作用的结果表明： 在精氨酸酯酶中含有两种类型的色氨酸残基, 而且处于不同的微环境当中．     

中华眼镜蛇血清对自身蛇毒中主要酶类活性的抑制作用

【目的】探究中华眼镜蛇(Naja atra)血清对自身蛇毒中主要酶类活性的抑制作用。【方法】不同稀释倍数的中华眼镜蛇血清与蛇毒于37℃孵育30min后,检测蛇毒中磷脂酶A2、透明质酸酶、乙酰胆碱酯酶、L-氨基酸氧化酶和5′-核苷酸酶活性的变化情况。【结果】中华眼镜蛇血清对自身蛇毒中磷脂酶A2和5′-核苷酸酶具有明显的抑制作用:当血清稀释2倍时,可以使蛇毒磷脂酶A2活性降低28.44%(p<0.001);当血清稀释8倍时,可以使蛇毒中5′-核苷酸酶活性活性降低23.44%(p<0.001)。中华眼镜蛇血清对自身蛇毒中的透明质酸酶、乙酰胆碱酯酶和L-氨基酸氧化酶均无抑制作用。【结论】中华眼镜蛇血清中存在蛇毒磷脂酶A2和5′-核苷酸酶的抑制剂,该结果为后期蛇毒抑制剂的筛选提供了理论依据。