抗IgG-Fc蛋白ssDNA适配体的筛选与鉴定 |
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引用本文: | 杨叶民,胡文进,何庆华.抗IgG-Fc蛋白ssDNA适配体的筛选与鉴定[J].南昌大学学报(理科版),2020,44(4):340. |
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作者姓名: | 杨叶民 胡文进 何庆华 |
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作者单位: | 上海叶民生物技术有限公司 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室 |
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基金项目: | 江西省主要学科学术与技术带头人项目 |
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摘 要: | 传统的抗IgG-Fc单克隆抗体制作过程繁琐、耗时长且批间差异大,极大的限制了其应用。因此寻找一种抗IgG-Fc单克隆抗体的替代元件是十分必要的。本研究基于微孔板指数富集的配体系统进化技术(微孔板-selex),设计了针对抗IgG-Fc蛋白ssDNA适配体的筛选方案。交替包被5种IgG单克隆抗体于酶标孔作为筛选靶分子,将从靶分子上洗脱的核酸适配体作为模板进行PCR扩增,生物素-链霉亲和素ELISA测定第3,7,13,14,16,18轮筛选获得ssDNA文库与内酰胺酶单克隆抗体的结合能力,并将第19轮筛选获得的ssDNA文库进行TA克隆验证、高通量测序。经过19轮筛选,得到69796条抗IgG-Fc蛋白的适配体,选取出现频率最高的ap-1(178次)、ap-2(129次)、ap-3(58次)体外合成并在其5,端标记生物素,经ELISA鉴定3条适配体分别与5种IgG单克隆抗体有着较强的结合能力,并与3%BSA几乎不结合。Ap-1结合能力最强,被认为是本次筛选得到最佳抗IgG-Fc蛋白核酸适配体。实验结果表明本文筛选获得抗IgG-Fc蛋白的核酸适配体,具有成为抗IgG单克隆抗体替代元件的潜力。
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关 键 词: | 抗IgG-Fc单克隆抗体 指数富集的配体系统进化技术 适配体 IgG-Fc蛋白 ELISA |
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