基于ConA富集和LTQ-FT质谱鉴定的小鼠肝脏内质网N-糖蛋白质组研究 |
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引用本文: | 宋丽娜,王京兰,刘金凤,卢庄,隋少卉,贾伟,杨兵,迟浩,王乐珩,贺思敏,蔚文峰,孟令燕,陈硕,彭旭,梁毅敏,蔡耘,钱小红.基于ConA富集和LTQ-FT质谱鉴定的小鼠肝脏内质网N-糖蛋白质组研究[J].中国科学:化学,2010,40(5):591-591. |
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作者姓名: | 宋丽娜 王京兰 刘金凤 卢庄 隋少卉 贾伟 杨兵 迟浩 王乐珩 贺思敏 蔚文峰 孟令燕 陈硕 彭旭 梁毅敏 蔡耘 钱小红 |
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作者单位: | ① 蛋白质组学国家重点实验室, 北京蛋白质组研究中心, 军事医学科学院放射与辐射医学研究所, 北京, 102206
② 中国科学院计算技术研究所, 北京, 100190 ③ 北京理工大学生命学院, 北京, 100081 |
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摘 要: | 糖基化修饰是生物体内复杂和重要的蛋白质翻译后修饰方式之一.N-糖基化蛋白质在内质网中进行合成的过程中,所有的N-糖链都以甘露糖和葡萄糖结尾,而凝集素ConA对以甘露糖结尾的糖链有较高的亲和性,可以用来富集在内质网中合成的N-糖蛋白质.本文据此提出了一种基于内质网分离和凝集素ConA富集的复杂样品N-糖基化位点研究策略.通过使用高准确度的质谱线性离子阱-傅立叶变换回旋离子共振质谱对N-糖蛋白质进行鉴定,并对N-糖基化位点进行确定.我们采用模式生物C57BL/6J肝脏作为生物样本,在生物水平和质谱水平分别进行了3次重复,共鉴定了212个N-糖蛋白质的323个N-糖基化位点.在这些蛋白中,131个是Swissprot库中已确认的N-糖蛋白质.此方法富集的糖蛋白,糖型统一,有利于样品的分离和PNGaseF酶切作用,提高了鉴定的效率.对鉴定的212个N-糖蛋白质的定位和功能进行了分析,本文鉴定的N-糖蛋白质对现有的鼠肝N-糖蛋白质数据库进行了有效的补充.
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关 键 词: | 糖基化修饰 粗面内质网 凝集素亲和层析 ConA LTQ-FT质谱 |
收稿时间: | 2010-01-07 |
修稿时间: | 2010-02-07 |
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