| [B10G1u,B24-Asp-B25]人胰岛素类似物的制备、鉴定与性质研究 |
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| 引用本文： | 怀文辉,孙庭万,俞梅敏,茹炳根.[B10G1u,B24-Asp-B25]人胰岛素类似物的制备、鉴定与性质研究[J].高等学校化学学报,2004,25(6):1060-1064. |
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| 作者姓名： | 怀文辉 孙庭万 俞梅敏 茹炳根 |
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| 作者单位： | 北京大学生命科学学院,蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室,北京,100871;北京大学生命科学学院,蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室,北京,100871;北京大学生命科学学院,蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室,北京,100871;北京大学生命科学学院,蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室,北京,100871 |
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| 摘 要： | 采用PCR方法, 将人胰岛素分子B链B10位His突变为Glu, 在B24和B25位之间插入Asp, 构建了\胰岛素原基因. 利用通用型质粒pBV220构建表达载体, 在大肠杆菌DH5α中表达, 表达蛋白为包含体形式, 约占菌体总蛋白的20%～30%. 经过复性和凝胶过滤得到胰岛素原融合蛋白. 用胰蛋白酶和羧肽酶B酶切, 经DEAE离子交换和RP-HPLC纯化得胰岛素突变体类似物. 用凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质, 用圆二色谱测定了构象变化. 放射性免疫活性及受体结合活性测定结果表明, 突变体分子缔合性明显下降, 放免活性和受体结合活性分别约为人胰岛素的73.6%和146%.
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| 关 键 词： | 胰岛素类似物 单体胰岛素 原核表达 生物学活性 |
| 文章编号： | 0251-0790(2004)06-1060-05 |
Preparation, Identification and Properties of [B10G1u,B24-Asp-B25] Human Insulin Analogues |
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