| 不同结构的DNA激活序列对Cas12a反式切割活性的影响 |
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| 引用本文： | 费心蕊,刘晓玲,刘成辉.不同结构的DNA激活序列对Cas12a反式切割活性的影响[J].分析测试学报,2022,41(4):610-617. |
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| 作者姓名： | 费心蕊 刘晓玲 刘成辉 |
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| 作者单位： | 应用表面与胶体化学教育部重点实验室,陕西省生命科学分析化学重点实验室,陕西师范大学化学化工学院,陕西 西安 710119 |
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| 基金项目： | the National Natural Science Foundation of China（22104077）；the Fundamental Research Funds for the Central Universities（GK202101001，GK202103044）；the Natural Science Foundation of Shaanxi Province（2021TD－42，2020JQ－407） |
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| 摘 要： | CRISPR－Cas12a系统的反式切割活性在其识别特定的DNA激活序列后被激活，这不仅能实现特定DNA靶标的直接定量分析，同时也为构建针对多种生物标志物的体外传感体系带来了新的思路。然而，已有文献中所采用的双链DNA（dsDNA）和单链DNA（ssDNA）激活序列结构多种多样，缺乏全面、系统的设计指导原则。针对该问题，该文系统研究了不同结构的DNA激活序列对LbaCas12a反式切割活性的影响。通过对比研究，得出以下结论：（1）前间区序列邻近基序（PAM）位点有助于LbaCas12a更高效地靶向结合dsDNA激活序列和ssDNA激活序列；（2）PAM近端区域缺少序列片段会降低Cas12a-crRNA定位激活序列的效率；（3）删除PAM远端序列片段有利于增强LbaCas12a的反式切割活性；（4）由于省略了dsDNA解链过程，ssDNA激活序列在激活LbaCas12a的反式切割活性方面普遍比dsDNA激活序列产生的效果更好。根据这些发现，该文提出了一种LbaCas12a所青睐的高效激活序列结构，其激活的LbaCas2a反式酶切活性较采用含PAM位点的标准dsDNA激活序列高出3.7倍。研究结果为构建基于CRISPR-Cas12a的高效体外生物传感系统提供了重要支撑。
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| 关 键 词： | Cas12a 前间区序列邻近基序(PAM) 双链DNA激活序列 单链DNA激活序列 体外传感 Cas12a protospacer adjacent motif(PAM) dsDNA activator ssDNA activator in vitro biosensing |
Effect of Different DNA Activator Structures on the trans-Cleavage Activity of Cas12a |
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| FEI Xin-rui,LIU Xiao-ling,LIU Cheng-hui.Effect of Different DNA Activator Structures on the trans-Cleavage Activity of Cas12a[J].Journal of Instrumental Analysis,2022,41(4):610-617. |
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| Authors: | FEI Xin-rui LIU Xiao-ling LIU Cheng-hui |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cas12a protospacer adjacent motif(PAM) dsDNA activator ssDNA activator in vitro biosensing |
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