| 重组人胰岛素注射液中B3和B3iso脱氨人胰岛素的分析与鉴定 |
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| 引用本文： | 徐军,吴萌,龚庆伟,封启媛,吴岭,陈小锋.重组人胰岛素注射液中B3和B3iso脱氨人胰岛素的分析与鉴定[J].分析测试学报,2015,34(10):1173-1178. |
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| 作者姓名： | 徐军 吴萌 龚庆伟 封启媛 吴岭 陈小锋 |
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| 作者单位： | 东阳光药业研究院生物药研究所 |
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| 摘 要： | 建立了有效分离重组人胰岛素注射液中B3和B3iso脱氨人胰岛素的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,并采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术(HPLC-MS/MS)对其进行氨基酸序列的鉴定。在《中国药典》2010版重组人胰岛素注射液有关物质检查分析方法的基础上,优化流动相p H值,以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(p H 3.6)-乙腈(90∶10)作为A相,乙腈-水(50∶50)为B相,梯度洗脱,分别收集杂质峰1和杂质峰2,脱盐浓缩后,用丝氨酸蛋白酶(V8酶)酶切,取部分酶切溶液经三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)还原,分别得到还原和非还原肽段溶液,利用LC-MS/MS鉴定氨基酸序列,未知杂质分别为重组人胰岛素B3位发生脱氨和异构化的产物,即B3和B3iso脱氨人胰岛素。将优化后的方法与《中国药典》方法对市售重组人胰岛素注射液进行有关物质的对比分析,已上市厂家的重组人胰岛素注射液均有不同程度的B3和B3iso脱氨人胰岛素存在。该方法不影响重组人胰岛素其它有关物质的检测,可用于监控人胰岛素注射液产品储存过程中脱氨类杂质的增长趋势。
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| 关 键 词： | 重组人胰岛素注射液 B3和B3iso脱氨人胰岛素 反相高效液相色谱 液相色谱-串联质谱 |
Separation and Identification of B3 and B3iso Desamido Human Insulin in Recombinant Human Insulin Injection |
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| XU Jun,WU Meng,GONG Qing-wei,FENG Qi-yuan,WU Ling,CHEN Xiao-feng.Separation and Identification of B3 and B3iso Desamido Human Insulin in Recombinant Human Insulin Injection[J].Journal of Instrumental Analysis,2015,34(10):1173-1178. |
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| Authors: | XU Jun WU Meng GONG Qing-wei FENG Qi-yuan WU Ling CHEN Xiao-feng |
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| Keywords: | recombinant human insulin B3 and B3iso desamido human insulin RP-HPLC LC-MS/MS |
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