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蛋白质高效分离两维色谱柱的选择优化
引用本文:洪广峰,高明霞,晏国全,关霞,陶芊,张祥民.蛋白质高效分离两维色谱柱的选择优化[J].色谱,2010,28(2):158-162.
作者姓名:洪广峰  高明霞  晏国全  关霞  陶芊  张祥民
作者单位:1. 复旦大学化学系, 上海 200433; 2. 复旦大学生物医学研究院, 上海 200433
基金项目:国家重点基础研究发展规划("973")项目,国家高技术研究发展计划("863")项目,国家自然科学基金项目 
摘    要:为了构建高效的离子交换/反相二维液相色谱(IEC/RPLC)分离平台系统,提高复杂蛋白质样品的分离效率,对色谱柱进行了评价与筛选。通过对实际人肝蛋白质样品的分离效果的比较,选择确定了TSKgel DEAE-5PW弱阴离子交换色谱柱(WAX)作为第一维色谱分离柱;考察了同一规格的10支代表性反相色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm, 30 nm, C4、C8或C18),通过评价其对尿嘧啶、硝基苯、萘和芴的分离性能以及对3种标准蛋白质样品的非特异性吸附、对人肝蛋白质样品的WAX馏分的分离效果,最终确定以Jupiter 300 C4反相色谱柱作为第二维色谱分离柱。对两维色谱柱的选择优化为蛋白质高效分离二维液相色谱平台的搭建提供了可靠基础。

关 键 词:Top-down技术  蛋白质  蛋白质组学  多维液相色谱  
收稿时间:2010-1-5
修稿时间:2010-2-1

Optimization of two-dimensional high performance liquid chromatographic columns for highly efficient separation of intact proteins
HONG Guangfeng,GAO Mingxia,YAN Guoquan,GUAN Xia,TAO Qian,ZHANG Xiangmin.Optimization of two-dimensional high performance liquid chromatographic columns for highly efficient separation of intact proteins[J].Chinese Journal of Chromatography,2010,28(2):158-162.
Authors:HONG Guangfeng  GAO Mingxia  YAN Guoquan  GUAN Xia  TAO Qian  ZHANG Xiangmin
Institution:1. Department of Chemistry, Fudan University, Shanghai 200433, China;2. Institutes of Biomedical Sciences, Fudan University, Shanghai 200433, China
Abstract:In order to optimize two-dimensional liquid chromatographic(2D-LC) columns for highly efficient separation of proteins,several liquid chromatographic columns were investigated and evaluated.Weak anion-exchange(WAX) column was chosen as the first dimension because of its extensive protein separation power.By comparison of different WAX chromatographic columns for human liver protein separation,TSKgel DEAE-5PW column was selected as the first dimension of a 2D-LC system.For the second dimension,ten typical re...
Keywords:proteomics  multidimensional liquid chromatography  intact protein  Top-down
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