液相色谱-同位素稀释串联质谱法定量分析重组N末端B型利钠肽原

N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)是心力衰竭临床诊断的重要生物标志物之一。目前，国际上尚没有NT-proBNP标准物质，无法在溯源链顶端开展量值传递，不利于下游测量结果的统一和对比。为了实现NT-proBNP的标准化检测，本研究针对重组NT-proBNP开展了溯源技术研究。首先采用蛋白免疫印迹和质谱法对被测物进行了分析。在绝对定量分析方法研究中，采用两种同位素稀释质谱法对NT-proBNP样品进行了定值。结果表明，重组NT-proBNP具有良好的抗体结合活性，并且分子量与理论值一致，可用于后续的定量分析方法研究。在氨基酸同位素稀释质谱法中，NT-proBNP水解48 h后达到平衡，通过对水解样品中缬氨酸、异亮氨酸和精氨酸的测量，计算得到NT-proBNP溶液的质量分数为79.62μg/g(RSD=0.89%);在肽段同位素稀释质谱法中，当NT-proBNP与蛋白酶质量比为25∶1、酶解24 h后，通过检测两条特征肽段，计算得到NT-proBNP溶液质量分数为76.04μg/g(RSD=1.85%)。两种方法测量结果基本一致。由于定量氨基酸是具有计量学溯源性的国家一级标准物质，因此...