基于催化发夹组装和荧光共振能量转移的生物传感器检测EV71病毒

以肠道病毒71型(EV71)为检测对象，建立了基于催化发夹组装(CHA)和荧光共振能量转移(FRET)的生物传感器。设计了检测EV71 VP1基因的CHA信号放大策略，该体系由一对发夹探针(H1、 H2)构成，H1和H2分别标记了荧光基团Cy3和Cy5。当体系中有VP1基因时，可引发H1和H2催化自组装反应，从而使得Cy3和Cy5相互靠近并发生FRET,导致Cy3荧光信号降低，Cy5信号增强；当体系中没有VP1基因时，H1和H2则稳定存在于反应体系中，不发生FRET,只检测到Cy3的荧光信号。优化了缓冲液浓度、 H1与H2的比例、反应温度和反应时间。在最优条件下，所构建的传感器的Cy5与Cy3的荧光强度比值与EV71 VP1基因浓度在0.5～20 nmol/L范围内呈良好的线性关系，检出限为73 pmol/L(3σ)。咽拭子样品的加标回收率为99.6%～103.1%,相对标准偏差在0.3%～1.7%之间。本方法具有较好的特异性及抗干扰能力，在EV71监测和手足口病早期诊断方面具有良好的应用前景。