| 石油烃厌氧降解基因masD和bamA实时荧光定量PCR方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 宋本如,甄梅楠,刘小妹,唐景春.石油烃厌氧降解基因masD和bamA实时荧光定量PCR方法的建立及应用[J].分析化学,2019,47(2):207-213. |
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| 作者姓名： | 宋本如 甄梅楠 刘小妹 唐景春 |
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| 作者单位： | 南开大学环境科学与工程学院;南开大学环境科学与工程学院;环境污染过程与基准教育部重点实验室;天津城市环境诊断与污染修复工程中心, 天津 300071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;天津市科技计划;天津市科技计划;天津市科技计划;CNPC科技发展计划;高等学校学科创新引智计划计划) |
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| 摘 要： | masD和bamA基因分别是烷烃和芳烃厌氧降解的关键基因。本研究建立了这两种基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。通过参考相关石油烃厌氧降解菌株的Gen Bank序列,利用Primer express软件设计烷烃和芳烃厌氧降解基因的扩增引物masD-f、masD-r和bamA-f、bamA-r。经过常规PCR扩增分别得到片段大小为389和354 bp扩增产物,经测序并在NCBI数据库查询,确定为masD和bamA片段。通过实时荧光定量PCR构建测定这两种基因的标准曲线。优化后的扩增体系(25μL)为:12.5μL 2×Trans Start Top Green qPCR Super Mix,引物浓度为0. 2μmol/L,masD和bamA基因最适退火温度分别为52℃和56℃。建立的两种基因的实时荧光定量PCR检测方法具有非常好的重复性,其灵敏度比传统PCR技术高100倍。对于氧化石墨烯促进石油烃的厌氧降解体系中厌氧基因的定量检测显示,添加不同浓度的石墨烯均促进了bamA拷贝数的增加,但对masD的拷贝数无显著影响。
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| 关 键 词： | 石油烃 厌氧降解基因 masD基因 bamA基因 实时荧光定量聚合酶链式反应 |
Real-time Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction for Anaerobic Degradation Genes masD and bamA in Petroleum Hydrocarbons |
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| SONG Ben-Ru,ZHEN Mei-Nan,LIU Xiao-Mei,TANG Jing-Chun.Real-time Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction for Anaerobic Degradation Genes masD and bamA in Petroleum Hydrocarbons[J].Chinese Journal of Analytical Chemistry,2019,47(2):207-213. |
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| Authors: | SONG Ben-Ru ZHEN Mei-Nan LIU Xiao-Mei TANG Jing-Chun |
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| Institution: | (College of Environmental Science and Engineering,Nankai University;Key Laboratory of Pollution Processes and Environmental Criteria,Ministry of Education;Tianjin Engineering Center of Environmental Diagnosis and Contamination Remediation,Tianjin 300071,China) |
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| Abstract: | SONG Ben-Ru;ZHEN Mei-Nan;LIU Xiao-Mei;TANG Jing-Chun(College of Environmental Science and Engineering,Nankai University;Key Laboratory of Pollution Processes and Environmental Criteria,Ministry of Education;Tianjin Engineering Center of Environmental Diagnosis and Contamination Remediation,Tianjin 300071,China) |
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| Keywords: | Petroleum hydrocarbon Anaerobic degradation gene masD gene bamA gene Real-time quantitative polymerase chain reaction |
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