| Pronase E酶解释放糖蛋白N-糖链的方法及荧光标记衍生物的LC-MS分析 |
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| 引用本文： | 徐莎,张萍,黄琳娟,王仲孚.Pronase E酶解释放糖蛋白N-糖链的方法及荧光标记衍生物的LC-MS分析[J].高等学校化学学报,2010,31(10):1992-1998. |
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| 作者姓名： | 徐莎 张萍 黄琳娟 王仲孚 |
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| 作者单位： | 1. 西北大学生命科学学院,西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,西安,710069
2. 西北大学生命科学学院,西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,西安,710069;咸阳师范学院化学与化工学院,咸阳,712000 |
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| 基金项目： | 国家“八六三”计划项目(批准号:2007AA10Z338,2007AA091601); 教育部新世纪优秀人才支持计划(批准号:NCET-08-0893); 陕西省重点实验室重点科研计划项目(批准号:09JS081)资助 |
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| 摘 要： | 建立了一种用非特异性酶链酶蛋白酶E(Pronase E)从糖蛋白上释放N-糖链的方法.以牛胰核糖核酸酶B(Ribo B)和鸡白蛋白(Chicken Albumin)为材料,用Pronase E代替N-糖苷酶F(PNGase F)释放N-糖链.当蛋白酶质量与糖蛋白质量比为1∶1时,得到只带一个天冬氨酸(Asn)的闭环N-糖链,称其为糖氨酸(gly-can-Asn),这样既为糖链引入了天然的-NH2活性基团,同时还保持了糖链原有的还原端闭环结构.以9-氯甲酸芴甲酯(Fmoc-Cl)为衍生试剂对解离后的糖氨酸进行衍生,采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI/MS)对Fmoc-Cl糖氨酸衍生物进行分析,建立了糖蛋白的Pronase E酶解、微量糖氨酸的Fmoc-Cl衍生以及糖氨酸衍生物的HPLC-ESI/MS分析方法,该方法保持了N-糖链的天然结构,便于以-NH2为功能基团进一步进行荧光标记、分离制备以及糖链与蛋白质的相互作用研究.
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| 关 键 词： | Pronase E 糖蛋白 9-氯甲酸芴甲酯 电喷雾质谱 荧光标记 |
| 收稿时间： | 2009-12-28 |
Pronase E Digestion of N-Glycans in Glycoprotein and Its Fluorescent Derivatives Analysis by HPLC-ESI/MS |
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| XU Sha,ZHANG Ping,HUANG Lin-Juan,WANG Zhong-Fu.Pronase E Digestion of N-Glycans in Glycoprotein and Its Fluorescent Derivatives Analysis by HPLC-ESI/MS[J].Chemical Research In Chinese Universities,2010,31(10):1992-1998. |
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| Authors: | XU Sha ZHANG Ping HUANG Lin-Juan WANG Zhong-Fu |
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| Institution: | XU Sha1,ZHANG Ping1,2,HUANG Lin-Juan1,WANG Zhong-Fu1*(1.Key Laboratory of Ministry of Education for Western China Resource Biology and Biotechnology,College of Life Sciences,Northwest University,Xi'an 710069,China,2.Chemistry and Chemical Engineering School,Xianyang Normal University,Xianyang 712000,China) |
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| Abstract: | A method for non-specific enzymatic digestion of glycopeptides to release N-glycans from glycoprotein was developed.Pronase E instead of the traditional PNGase F was used to release glycopeptides from Ribo B and Chicken Albumin,and under the optimized digestion conditions that the quality ratio of the Pronase E to glycoprotein was 1:1,the closed-ring oligosaccharides named glycans-Asn with a single amino acid(Asn) were obtained.A modified 9-fluorenylmethyl chloroformate(Fmoc-Cl) pre-column derivatization pr... |
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| Keywords: | Pronase E Glycoprotein 9-Fluorenylmethyl chloroformate ESI-MS Fluorescent derivative |
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