Separation of nucleotides by reversed-phase high-performance liquid chromatography: Advantages and limitations

Summary The determination of nucleotides by reversedphase high-performance liquid chromatography with 0.1 M (NH₄)₃PO₄ as an elution buffer is described. Effects of pH, type of RP packing and column efficiency are discussed. Currently used columns with efficiencies corresponding to 7,000–15,000 theoretical plates, containing 15–20% of bound carbon, have been shown not to be sufficient for the separation of nucleotides from tissue samples in the ionsuppression mode, but they provide excellent separation of 2-, 3-, and 5-monophosphates, deoxytriphosphates or synthetic derivatives of adenosine and guanosine.

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Trennung von Nucleotiden mit der RP-Hochleistungsflüssigkeits-Chromatographie: Vorteile und Beschränkungen

Zusammenfassung Die Bestimmung von Nucleotiden mit reversed-phase HPLC mit 0,1 M (NH₄)₃PO₄ als Elutionspuffer wird beschrieben. Der Einfluß des pH sowie der Art der RP-Belegung wird diskutiert, Säulen mit einer theroretischen Bodenzahl von 7000–15000, die 15–20% gebundenen Kohlenstoff enthalten, erwiesen sich als nicht geeignet für die Trennung von Nucleotiden aus Gewebeproben mittels Ionen-Verdrängung. Sie ergeben aber eine ausgezeichnete Trennung von 2-, 3- und 5-Monophosphaten, Desoxytriphosphaten oder synthetischen Derivaten von Adenosin und Guanosin.