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| 昆虫细胞凋亡蛋白酶caspase-1的表达纯化及活性分析 | |
| 引用本文： | 曾宪东,宋建华,梁昌镛,陈新文. 昆虫细胞凋亡蛋白酶caspase-1的表达纯化及活性分析[J]. 武汉大学学报(理学版), 2010, 56(1) |
| 作者姓名： | 曾宪东 宋建华 梁昌镛 陈新文 |
| 作者单位： | 1. 中国科学院武汉病毒研究所/病毒学国家重点实验室,湖北,武汉,430071;中国科学院研究生院,北京,100049 2. 中国科学院武汉病毒研究所/病毒学国家重点实验室,湖北,武汉,430071 |
| 基金项目： | 国家基础研究重点项目(2003CB1140); 国家自然科学基金(30325002,30670077); 荷兰皇家艺术和科学院资助项目(KNAW,Program Strategic Scientific Alliances Project 04-PSA-BD-0) |
| 摘 要： | 依赖于天冬氨酸的半胱氨酸蛋白酶(caspase)在细胞凋亡途径中起着不可替代的关键酶作用.本研究采用原核表达载体pET32a表达和纯化了家蚕细胞Bm-caspase-1及粉纹夜蛾细胞Tni-caspase-1蛋白酶,序列分析表明二者具有相同的内部剪切识别序列,且酶活性位点均为QACQ↓G.纯化获得大量可溶性蛋白酶,Western-blotting分析表明Bm-caspase-1在大肠杆菌中已自我剪切活化,而Tni-caspase-1没有自我剪切,无酶活性;活性Bm-caspase-1蛋白酶对caspase-3特异性底物Ac-DEVD-AMC的降解酶活性可被Z-VAD-FMK呈剂量依赖性抑制,半抑制浓度约20nmol/L.此外,活性Bm-caspase-1蛋白酶能够转活化无活性的Tni-caspase-1蛋白酶原.结果揭示了昆虫细胞caspase同样具有与哺乳动物细胞caspase相似的底物降解活性并可相互剪切激活,为进一步研究昆虫细胞凋亡的分子途径奠定了基础. |
| 关 键 词： | Bm-caspase-1 Tni-caspase-1 表达 纯化 活性分析 |
Expression and Activity Analysis of Caspase-1 from Insect Cells |
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| ZENG Xiandong,SONG Jianhua,LIANG Changyong,CHEN Xinwen. Expression and Activity Analysis of Caspase-1 from Insect Cells[J]. JOurnal of Wuhan University:Natural Science Edition, 2010, 56(1) | |
| Authors: | ZENG Xiandong SONG Jianhua LIANG Changyong CHEN Xinwen |
| Affiliation: | ZENG Xi,ong1,2,SONG Jianhua1,LIANG Changyong1,CHEN Xinwen1(1.Wuhan Institute of Virology,Chinese Academy of Sciences/State Key Laboratory of Virology,Wuhan 430071,Hubei,China,2.Graduate University of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100049,China) |
| Abstract: | Caspase,aspartate-specific cysteine proteases,play an irreplaceable role in apoptosis pathways as key proteinases. Two insect caspases,Bm-caspase-1 from Bombyx mori (domestic silkworm) and Tni-caspase-1 from Trichoplusia ni,were expressed and purificated in E. coli with the prokaryotic expression vector pET32a. There are the same active sites of pentapeptide QACQG in their amino acid sequences. Western blotting analysis indicated that Bm-caspase-1 could be activated by self-cleavage in E.coli,but not Tni-ca... |
| Keywords: | Bm-caspase-1 Tni-caspase-1 expression purification activity analysis |
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