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一种用于核酸绝对定量检测的高鲁棒性液滴式数字PCR芯片
作者姓名:彭伙  高则航  廖承悦  王晓冬  周洪波  赵建龙
作者单位:1. 中国科学院上海微系统与信息技术研究所, 传感技术联合国家重点实验室, 上海 200050;2. 中国科学院大学, 北京 100049;3. 上海科技大学信息科学与技术学院, 上海 201210;4. 北京旌微医学工程研究院有限公司, 北京 100176
基金项目:国家重点研发计划项目(批准号:2017YFA0205303,2017ZX10302201005006)、中国科学院青年创新促进会(批准号:2018267)、中国科学院科研装备研究项目(批准号:YJKYYQ20170043)、上海市科学技术委员会科技支撑计划(批准号:17441904300)、国家自然科学基金(批准号:61804158)和上海市青年科技英才扬帆计划(批准号:18YF1428300)资助.
摘    要:为满足液滴式数字聚合酶链式反应(PCR)技术对扩增反应过程中稳定保存液滴以及反应后高效检测的核心需求,构建了一种具有过滤气泡和增强荧光信号功能的液滴式数字聚合酶链式反应芯片.该芯片可在10 min内产生20多万个半径约为21μm的液滴.利用"玻璃天花板"的方式构建了独立于芯片主体材料的液滴收集腔,为液滴提供稳定的保存与反应环境;还构建了过滤结构,可有效过滤混入液相中的空气,提高芯片鲁棒性.同时,在液滴收集腔中引入反射层,增强荧光信号,使单个视野荧光成像时间缩短约40%,提高了检测效率.利用该芯片定量检测EGFR基因第21号外显子,检测信号与DNA浓度在101~105copies/μL范围内呈现良好的线性关系(R2=0.998).该方案在载玻片大小的芯片上实现了液滴产生、PCR扩增和荧光信号读取,并具有较高的鲁棒性与检测效率,在核酸检测等方面具有应用潜力.

关 键 词:数字聚合酶链式反应  液滴微流控芯片  核酸定量检测  脱氧核糖核酸
收稿时间:2020-05-29
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