基于可断裂三功能探针的酪氨酸磷酸化蛋白质复合物的规模化分析

在细胞的信号转导过程中，磷酸化酪氨酸（Phosphotyrosine, pTyr）信号在许多通路中起着重要的调控作用。受pTyr信号调控的蛋白质复合物是信号传递早期过程中的关键分子机器，分析该类动态蛋白质复合物具有重要的意义。Photo-pTyr-scaffold是一种结合了化学探针与pTyr识别蛋白质结构域的化学蛋白质组学分析策略，采用该策略已经实现了对表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor, EGFR）通路相关的pTyr信号蛋白质复合物的规模化分析。但是，该方法无法解析所鉴定复合物的一一对应关系，增加了后续复合物解析的复杂性。本研究在Photo-pTyr-scaffold探针设计的基础上，将可断裂基团引入至其生物素富集端，设计合成了新型的可断裂三功能探针，以实现对富集产物的可控洗脱。基于pTyr信号蛋白质复合物在化学交联后的分子量差异，利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳实现了对洗脱的pTyr蛋白质复合物的分离，进一步将不同分子量区域的蛋白质进行胶内酶解和质谱分析。理论上，发生化学交联的pTyr蛋白质复合物将在高于原蛋白质分子量的区域被...