高效液相色谱-柱后同位素稀释质谱法定量分析人血清中转铁蛋白及白蛋白 |
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引用本文: | 张丹,冯流星,王军,熊金平.高效液相色谱-柱后同位素稀释质谱法定量分析人血清中转铁蛋白及白蛋白[J].分析化学,2014(2):179-185. |
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作者姓名: | 张丹 冯流星 王军 熊金平 |
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作者单位: | 北京化工大学材料科学与工程学院;中国计量科学研究院; |
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基金项目: | 国家质检总局公益性行业科研专项(No.201110008)资助项目 |
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摘 要: | 建立了高效液相色谱(HPLC)与电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)联用,同时结合柱后同位素稀释法,通过直接测定硫及铁元素,实现蛋白质绝对定量的分析方法。选取分子量不同的4种标准蛋白:转铁蛋白、β乳球蛋白、肌红蛋白和溶菌酶作为混合蛋白,34S或54Fe同位素稀释剂与液相色谱洗脱液经三通混合后,在线进入ICP-MS检测。根据同位素稀释法公式及蛋白中硫、铁的含量计算混合蛋白中每种蛋白的浓度,与天平称量结果一致,对方法进行了验证。将方法应用到人血清转铁蛋白、白蛋白的定量分析,针对两种蛋白含量差别大导致的信号差异,通过改变同位素稀释剂的流速,成功测定了人血清中转铁蛋白、白蛋白的含量。采用34S及54Fe同位素稀释剂分别定量的血清中转铁蛋白浓度为(2.35±0.01)g/L和(2.22±0.13)g/L,结果基本吻合。方法精密度RSD均小于10%,可用于基体样品中含硫蛋白及金属蛋白的定量分析。
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关 键 词: | 同位素稀释 蛋白质定量 电感耦合等离子体质谱 转铁蛋白 白蛋白 |
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