消癌平诱导人肺腺癌（ASTC-a-1）细胞内caspase-3活化的荧光光谱分析

采用CCK-8技术检测发现传统中药消癌平(XAP)对人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性具有显著的抑制作用。利用共聚焦扫描荧光显微成像、荧光共振能量转移(FRET)及其受体光漂白技术证实了基于FRET技术构建的SCAT3质粒在ASTC-a-1细胞中的稳定表达。将消癌平加入细胞培养液中培育细胞,并在不同的时间检测活细胞内SCAT3的荧光发射光谱,从而监测细胞中caspase-3的活化状态。实验结果表明:(1)消癌平可以有效抑制人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性并诱导细胞的死亡,消癌平对细胞的抑制作用具有剂量依赖性。(2)消癌平处理细胞72 h后,细胞内大量的SCAT3被切割,表明细胞内caspase-3的活化水平明显升高。(3)将含消癌平的细胞培养液与细胞共同培养24 h,然后采用没有消癌平的细胞培养液培养细胞48和72 h后,细胞内SCAT3的光谱没有明显改变,表明消癌平作用细胞24 h内没有显著激活细胞内的caspase-3。     

紫杉醇诱导不依赖于Caspase-3细胞类似Paraptosis的荧光光谱分析

研究了紫杉醇(Taxol)诱导人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)类似Paraptosis的特征和机理。采用CCK-8技术检测了抑制细胞活性的特性,结果表明大于70μmol.L-1浓度的紫杉醇可以显著抑制细胞活性;采用激光共聚焦扫描荧光成像从形态上检测了紫杉醇诱导细胞死亡的形态特征,表明紫杉醇诱导了类似副凋亡(Paraptosis)特征的细胞肿胀和细胞质空泡化,而且没有细胞膜皱褶、细胞核浓缩等细胞凋亡的特征;通过基因质粒转染在细胞转染稳定表达基于荧光共振能量转移(FRET)质粒SCAT3,并利用FRET受体光漂白技术和荧光光谱检测分析技术研究了紫杉醇诱导细胞类似Paraptosis过程中Caspase-3的活化特性,结果表明在紫杉醇诱导细胞质肿胀和细胞死亡的过程中Caspase-3没有被活化。以上研究结果表明紫杉醇可以通过类似Paraptosis的方式明显诱导细胞程序性死亡,该过程不依赖于Caspase-3的活性。     

基于超高效液相色谱-高分辨质谱技术的水中112种药品和个人护理用品的高通量筛查和定量方法

采用超高效液相色谱-三重四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UHPLC-Q-Orbitrap MS）,建立了水中112种药品和个人护理用品类污染物（PPCPs）的快速筛查及定量分析方法。水样分别在酸性及碱性条件下提取,分别经SPE柱净化,以UHPLC-Q-Orbitrap MS进行分离检测,采用全扫描/数据依赖二级扫描（Full MS/dd-MS²）模式进行扫描,实现了水中112种PPCPs的定性筛查,并基于一级母离子峰面积对其含量进行了定量检测。112种PPCPs的定量限为0.002~0.8 μg/L,在各自的线性范围内均呈良好的线性关系（r²≥0.9901）; 3个水平（0.2、0.4、0.8 μg/L）下的添加回收率为60.1%~129.5%,相对标准偏差为1.1%~17.8%（n=6）。将所建立的方法用于来自大连市7个区的水样中PPCPs的筛查,共筛查出16种污染物,并对其进行了定量分析。本方法简单快速,灵敏度高,筛查范围广,为水质的管理和环境风险监测提供了一种有力的技术手段。