基于磁微粒的荧光免疫分析法测定人血清中DNA甲基转移酶1

DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferases1,DNMT1)负责维持DNA甲基化遗传稳定性,其表达量与多种肿瘤的发生发展密切相关,是一种重要的肿瘤分子标志物。DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)的现有检测方法大多基于原核生物酶建立,且局限于实验室研究,因此建立一种高灵敏、高通量测定人血清中DNMT1含量的荧光免疫分析方法(FLISA),以期为癌症早期筛查及临床应用提供新思路。以Fe3O4磁珠为固相载体,采用碳二亚胺/N-羟基硫代琥珀酰亚胺(EDC/Sulfo-NHS)键合法分别制备磁性免疫捕获探针Fe3O4@DNMT1小鼠单克隆抗体(Fe3O4@McAbDNMT1)及荧光免疫检测探针5-羧基四甲基罗丹明@DNMT1兔多克隆抗体(5-TAMRA@PcAbDNMT1)。用红外光谱、紫外-可见(UV-Vis)光谱、 Zeta电位、免疫活性分别表征偶联产物的结构与活性。在此基础上,采用双抗体夹心法,检测黑色96微孔板中反应产物的荧光强度,根据荧光强度与DNMT1浓度的关系进行定量分析,并进行方法学评价与比较。实验结果显示,双探针偶联成功,并保持了原抗体的免疫活性。该方法的线性方程y=222.046+48.323x,线性范围0.05~80 ng·mL-1,相关系数为0.991 4,检出限为0.005 ng·mL-1,板内、板间的RSD分别为4.7%~8.8%, 1.6%~10.0%(n=6);板内、板间的回收率分别为91.3%~102.4%, 88.0%~98.8%(n=6);方法特异性良好。与酶联免疫吸附法(ELISA)和磁酶免疫吸附法(MELISA)相比, FLISA法的检出限最低,灵敏度最高,所需分析时间最短;FLISA法与商品化ELISA试剂盒对15例人血清样品进行分析,差异无统计学意义(p>0.05)。表明本研究所建立的FLISA方法灵敏快速,适用于大批量人血清样品中DNMT1的快速测定,在临床诊断方面具有重要的应用价值和广阔的应用前景。     

野生葛不同部位铜、锌、铁、钙、镁含量测定

用硝酸、高氯酸混合酸消解样品，采用原子吸收光谱法，测定了河南大别山区野生葛不同部位即葛根、葛藤、葛叶及花蕾中铜、锌、铁、钙、镁的含量，并对其结果进行了分析。结果显示：葛根、葛藤、葛叶及葛花中含有丰富的宏量元素钙、镁和有益的微量元素铜、锌、铁。铜的分布量依次为：叶〉花蕾〉葛藤〉葛根；锌的分布量依次为：叶〉花蕾〉葛藤〉葛根；铁的分布量依次为：葛根〉葛藤〉叶〉花蕾；钙的分布量依次为：叶〉葛根〉花蕾〉葛藤；镁的分布量依次为花蕾〉葛根〉叶〉葛藤。测定结果为探讨中草药中宏量、微量元素与治疗心脑血管疾病功效的关系提供了有用的数据；测定结果还显示：葛叶中铜、锌、钙含量居其他部位含量之首，适宜大力开发葛叶产品。     

荧光及ESI质谱法研究溶菌酶与磷酰化黄酮的相互作用

分别用荧光法和ESI质谱法研究了磷酰化黄酮和溶菌酶的相互作用 .结果均显示磷酰化黄酮能够和溶菌酶发生弱相互作用 ,与黄酮相比它对溶菌酶更具亲和力 .根据荧光猝灭双倒数图计算了磷酰化黄酮与溶菌酶之间的结合常数为k2 0℃ =1.68× 10 4L/mol,k3 7℃ =1.0 6× 10 4L/mol,实验证明随着温度的升高 ,磷酰化黄酮与溶菌酶的结合常数逐渐降低 ,说明了两者之间形成了复合物 ,此荧光猝灭过程为静态猝灭 .根据F ster能量传递原理计算出磷酰化黄酮在溶菌酶上的结合距离 ,并根据热力学参数确定了磷酰化黄酮与溶菌酶之间的作用力类型为电荷作用力     

具有双活性序列的新型抗菌肽的设计及性质

设计合成了具有2个活性序列的线性和环状多肽及具有单个活性序列的短链多肽,研究了它们的杀菌活性、细胞毒性及溶血性.结果表明,线性肽和环状肽的杀菌活性高于短链肽.利用计算模拟的方法计算了多肽与细菌细胞膜中一种重要的成分磷脂酰甘油(DMPG)的结合能.结果表明,多肽-DMPG的结合能与多肽的杀菌活性具有较高的相关性,线性和环状多肽与DMPG的结合能大于短链肽.线性和环状多肽均含有2个活性序列,可提供多个荷正电氨基酸与荷负电的磷脂结合,结合能较大,杀菌活性较强.采用模拟生物膜对其中几条多肽的作用机理进行了初步研究.结果表明,该类多肽有可能使正常哺乳动物细胞的细胞膜产生孔洞;而对于细菌细胞膜,多肽并未在膜上产生明显孔洞,而是引起了细菌细胞膜的聚集.