三种藻胆蛋白对人乳腺癌Bcap-37细胞的光动力杀伤效果

从高等红藻坛紫菜中提取R-藻红蛋白(R-PE)、R-藻蓝蛋白(R-PC),从低等蓝藻钝顶螺旋藻中提取C-藻蓝蛋白(C-PC).研究10、25、50和100 μg/mL的R-PE、R-PC和C-PC介导的光动力效应对乳腺癌细胞Bcap-37的生存率的影响,MTT法测定结果,探讨这三种藻胆蛋白对癌细胞的光动力杀伤效应与其光敏性质差异的相关性.三种藻胆蛋白的光动力作用对Bcap-37细胞具有显著杀伤并显示出剂量效应,质量浓度在25 μg/mL以上时,杀伤效果依次为:R-PE＞R-PC＞C-PC;仅用激光处理(497 nm,632.8 nm),Bcap-37细胞的生存率达到88.6%和91.3%;仅用藻胆蛋白处理,培养24 h后,R-PE＜25 μg/mL,R-PC、C-PC＜50 μg/mL时,对Bcap-37细胞具有一定的促进生长作用,R-PE≥25 μg/mL,R-PC、C-PC≥50 μg/mL时,抑制细胞生长.     

坛紫菜中R-藻红蛋白的色谱纯化及性质研究

从坛紫菜藻胆蛋白粗提液中分离纯化R-藻红蛋白,经过两次不同柱长规格的自制羟基磷灰石柱层析和一次DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析,获得了较高纯度的R-PE(A565 nm/A280 nm＞5.3),测定了R-PE的紫外可见吸收光谱和荧光光谱,用SDS-PAGE测定了组成R-藻红蛋白各亚基的分子量.对R-PE在不同的pH和温度环境协同影响下的荧光稳定性进行了研究,摸索了R-PE的长期有效保存的方法并探讨了(NH4)2SO4的保护机理.     

坛紫菜中R-藻红蛋白的色谱纯化及性质研究

从坛紫菜(Porphyrahaitanensis)藻胆蛋白粗提液中分离纯化R 藻红蛋白(R phycoerythrin,R PE),经过两次不同柱长规格的自制羟基磷灰石柱层析和一次DEAE SepharoseFastFlow离子交换层析,获得了较高纯度的R PE(A565nm A280nm>5.3);测定了R PE的紫外可见吸收光谱和荧光光谱,R PE的吸收峰在565和498nm,在540nm有一吸收肩,荧光发射峰在573nm;用SDS PAGE测定组成R PE各亚基的相对分子质量,α β亚基约为18～20kDa,γ亚基约为35kDa;对R PE在不同的pH和温度环境协同影响下的荧光稳定性进行了研究,摸索了R PE的长期有效保存的方法并探讨了(NH4)2SO4的保护机理。     

穿心莲内酯诱导胃癌细胞周期抑制和内源性凋亡

研究了穿心莲内酯诱导胃癌细胞SGC-7901生长抑制、周期阻滞与细胞凋亡的作用机制.用梯度浓度的穿心莲内酯作用于SGC-7901细胞,以MTT法检测药物对细胞的生长抑制情况;以流式细胞技术检测SGC-7901的周期分布状况、胞内的ROS水平以及线粒体膜电位的变化;以Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡的水平;以Western blot检测不同加药浓度处理后的细胞内相关蛋白水平的变化.可知穿心莲内酯对SGC-7901细胞具有时间依赖和浓度依赖的抑制效果,48h的IC50约为24μg·mL-1;并且能够有效抑制G2/M期的周期进展,随后诱发内源性凋亡途径;与此同时,细胞内的ROS水平上升,线粒体膜电位下降;再加入NADPH之后,细胞内的GSH水平有所回升,周期阻滞得到缓解.细胞内的p53、p-CDC2、cleaved caspase-3/9、Bax等上调;bcl-2等水平下调.穿心莲内酯是通过上调胞内ROS水平并使线粒体膜电位崩溃而诱发G2/M期的周期阻滞与内源性凋亡,最终抑制SGC-7901细胞的生长.     

钝顶螺旋藻Fe-SOD的结构与进化 钝顶螺旋藻Fe-SOD的结构与进化

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是一类重要的具有抗氧化损伤功能的金属酶.利用生物信息学手段,分析了钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)Fe-SOD的结构与进化,结合此蛋白的功能,揭示了两者的内在联系:在结构上,此蛋白的中间区域(26 AA～160 AA)结构紧凑,为酶的活性中心,两端区域离活性中心较远;在进化上,此蛋白两端区域较中间区域更倾向于发生突变.并且通过Fe-SOD,首次对以上三者间特殊关系的形成机制进行了猜想与假设.     

钝顶螺旋藻Fe-SOD基因的克隆及序列分析

参照GenBank中Fe-SOD基因序列,根据SOD的保守区域设计引物,以钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)基因组DNA为模板,PCR扩增获得大小为528 bp的片段.序列分析表明,其与集胞藻(Synechocystis sp.PCC 6803)、念珠藻(Nostoc commune DRH1)等物种的Fe-SOD基因的同源性分别为75%、71%,且由该序列推导的氨基酸序列与集胞藻、念珠藻等种属的Fe-SOD相比,同源性为68%、67%.表明该片段为钝顶螺旋藻Fe-SOD基因的部分序列.     

人乙醇脱氢酶ADH1B2在毕赤酵母中的表达及活性分析

根据GeneBank中人乙醇脱氢酶ADH1B2基因序列设计引物,以人肝脏总RNA为模板,反转录获得人乙醇脱氢酶基因.将克隆基因与表达载体pPICZB连接,测序正确的pPICZB-ADH1B2电转化毕赤酵母GS115;重组毕赤酵母工程菌经0.5%（v/v）甲醇诱导72 h后目的蛋白以可溶形式表达,经DEAE-Sepharose FF纯化后蛋白酶活性可达8 000 U·mg^-1.同时构建重组质粒pCDNA3.1-ADH1B2转染HepG2人肝癌细胞,发现细胞内ROS/GSH水平降低,Akt磷酸化水平降低,细胞活性下降.为临床酒精中毒预防和治疗药物的研发以及ADH在肝脏肿瘤方面的研究提供了理论基础.     

螺旋藻C-藻蓝蛋白亚基分离及抗肿瘤活性研究

为解决C-藻蓝蛋白分子较大,难以直接与细胞发生作用的问题,对藻蓝蛋白亚基的分离纯化方法进行研究,并初步探讨了其对肿瘤细胞的抑制作用.对通过热变性、盐析和自制的羟基磷灰石吸附层析,从钝顶螺旋藻中获得高纯度的藻蓝蛋白(C-PC,A620/A2804.5).C-PC用8 mol.L-1的尿素溶液变性,过CM-Sepharose F.F.阳离子交换层析、透析、复性,获得具活性的C-PC亚基.用CCK-8试剂盒分别研究了C-PC、α和β亚基对一个肺腺癌细胞株SPC-A-1的生长的影响,结果表明藻蓝蛋白及其亚基对该细胞株的生长具有抑制作用,β亚基效果最好,预示着它们具有一定的抗肿瘤潜力.