整合药效团及共价对接用于虚拟筛选JAK3抑制剂

大量研究表明JAK3与炎症疾病的发生、发展具有密切的关系,使得JAK3成为一个极具潜力的药物靶点。其中,JAK3共价抑制剂因其选择性高、活性强的特点受到广泛关注。但是,JAK3与其家族的其他成员同源性高,使得开发JAK3选择性抑制剂充满挑战。计算机虚拟筛选方法可以在分子水平对JAK3的结构特征进行针对性筛选,但是传统的共价对接方法效率较低、准确度欠佳,因此本文提出了一种结合药效团和共价对接的虚拟筛选策略。该联用方法从DrugBank数据库成功地筛选出已报道的JAK3临床抑制剂,表明了这种虚拟筛选不仅具有较高的效率,同时具备了较强的筛选准确性,为JAK3共价抑制剂的虚拟筛选提供一定的指导作用。     

两种谷胱甘肽亲和层析介质的制备及其对谷胱甘肽转移酶融合蛋白的纯化

以国产交联琼脂糖6FF为基质,分别以环氧氯丙烷(ECH)、1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDGE)为活化剂,偶联谷胱甘肽(GSH)得到两种连接臂长度不同的GSH亲和层析介质,并以两种自制介质对融合蛋白GST-ADAM15进行了纯化。结果表明:GSH-ECH-琼脂糖凝胶和GSH-BDGE-琼脂糖凝胶的配基密度分别达到了30～35μmol/mL和15～18μmol/mL,经两种介质纯化后的GST融合蛋白,纯度均达到95%以上,BDGE活化对目标蛋白的回收率占总蛋白26%,ECH活化为13%。相对而言,由于连接臂长度的不同,BDGE活化的介质纯化效果优于ECH。     

高分子-镍络合物在硝基化合物及醛酮类加氢反应中的催化活性

本工作制备了数种高分子-镍(Ⅱ)配合物并用NaBH_4、LiAlH_4、甲醛氨水溶液或分子氢使之还原。研究结果表明,高分子—镍(Ⅱ)配合物难以用LiAlH_4或甲醛还原,而用氢气或NaBH_4还原后的配合物在较高温度(100～120℃)及一定的压力(3～6MPa)下还原硝基化合物及醛、酮类化合物时具有一定的催化活性,其中以NaBH_4还原的配合物活性最高。硝基化合物被还原为相应的胺,无副产物,醛、酮类还原为相应的醇,未发现氢解产物,说明催化剂有较高的选择性。此外还研究了腈类的加氢反应。     

吖啶酯标记的化学发光免疫分析优化参数评价

以睾酮-3-羧甲氧基肟-牛血清白蛋白为免疫原,免疫家兔产生抗血清,10-甲基吖啶-9-羧酸[4-(N-睾酮-3-羧甲氧基肟)-氨乙基]苯酯为示踪化合物,采用平衡法建立睾酮化学发光免疫分析,数据用四参数Logistic函数处理。方法学考核标准曲线稳定,R为0.9967;ED50为82.15ng/L;批内和批间CV分别为5.78%和3.3%;平均回收率为107.28%;可测范围为19.3～264.6ng/L,与雌酮、雌二醇、雌三醇和孕酮的交叉反应率均小于1.35%;非特异结合率为9.64%.“桥效应”分析表明同位点、“桥”结构相同亲和力最大.     

睾酮—吖啶酯化学发光示踪剂的制备及评价

本文报道了10-甲基-吖淀-9-核酸[4-(N-睾酮-3-羧甲氧基肟)-氯乙基]苯酯(To-3-AEPMAC)的合成、理化鉴定和免疫学评价.制备方法类似于以往甾体激素全抗原的合成,产品的化学发光信号与噪声比高,可测限为0.18fmol,线性可测范围可达6个数量级以上,与抗睾酮血清结合不改变吖啶酯的化学发光动力学和发光效率;免疫化学最高结合率和非特异结合稳定,抗血清稀释曲线比较证明产品的免疫反应性基本无损失,优于鲁米诺及其衍生物制备的示踪剂,符合建立超微量免疫化学分析中标记化合物的要求.     

稀土离子与乳铁蛋白结合的光谱研究

用紫外示差光谱、荧光光谱及圆二色谱等方法研究了 Tb3+ 和 Eu3+ 在 p H 7.4的条件下与乳铁蛋白及脱铁乳铁蛋白的结合作用 .结果表明 ,Tb3+及 Eu3+可特异性地结合在脱铁乳铁蛋白的两个 Fe3+结合部位 ,但不能从已经结合铁的乳铁蛋白中把铁置换出来 .测得 Tb3+与这两个部位结合的条件平衡常数为 lg K1 =8.4 8± 0 .2 4和 lg K2 =6.72± 0 .1 8( 2 5℃ ,0 .1 0 mol/L Na Cl,0 .1 0 mol/L Hepes,p H=7.4 ) . Tb3+ 在这两个位点结合时 ,蛋白质的构象发生变化 .在 Tb3+ 与蛋白质的浓度比低时 ,构象趋于紧缩 ,色氨酸残基进入疏水的环境 ;当 Tb3+ 结合得较多时 ,构象转而开放 ,色氨酸残基转向亲水性环境 .但无论哪种情况 ,Tb3+ 与脱铁乳铁蛋白的结合都不影响蛋白的二级结构 .     

单分子水平的酶催化与基因表达研究

近半个多世纪以来生命科学取得了非凡的进展, 从DNA双螺旋结构的提出, 到第一个酶晶体结构的被解析, 都得益于像X射线衍射、核磁共振、质谱这样的物理化学工具的发展. 如今, 在深入细致地定量研究生物活体系统中我们正面临新的挑战, 例如:了解酶及其他大分子复合物在体内是如何实时工作的, 它们在分子数很少时是怎样工作的, 在活细胞中大分子复合物是如何协调工作的, 以及不同的基因在活细胞中分子数很少的情况下是如何实现表达和不表达的等等. 近十多年来, 单分子成像, 超高分辨率显微镜和单分子操纵技术在世界范围内被广泛地运用于生物医学研究, 对生物化学和分子生物学的发展产生着深远的影响, 因为运用这些单分子、超高分辨技术, 使很多如上述的令人感兴趣的生物学问题实现了单分子层面上的研究和理解. 本文拟就近年来相关的物理化学方法特别是单分子方法和技术在生物医学中的应用做一个简要介绍.     

利用铕鳌和试剂建立超灵敏的胃蛋白酶原I时间分辨荧光免疫分析法

采用时间分辨荧光测量技术,以稀土离子为示踪材料,建立了PGI的时间分辨荧光免疫分析法(TR-FIA),该方法具有测量灵敏度高、操作简便、示踪物稳定、定量分析量程宽、无放射性污染和应用范围广等优点。研究用北京佳瑞生物技术公司提供的抗PGI单克隆抗体8003#和8016#,PEI参考标准。结果表明,方法的特异性PGII对PGI-TRFIA无交叉反应。精密度和回收率:本方法的批内和批间CV分别为1.9%和4.7%,精密度图显示可测范围为3.5~328 KU.L-1;回收率为102.65%。灵敏度和稳定性:以零剂量点发光值均值加2 s后的发光值在标准曲线上得到的相应值为0.2 KU.L-1。8条不同时间进行的PGI-TRFIA的效点均值ED20,ED50和ED80分别为(11.34±0.2)KU.L-1,(38.73±0.8)KU.L-1和(132.3±2.9)KU.L-1。