不同病程的结核病患者的血浆代谢组学研究

结核病(tuberculosis,TB)是第二大由单一病原菌感染引起的致死性疾病,致死率仅次于艾滋病.与疾病进展相关的代谢标志物的发现有利于病情的防治,而代谢组学研究则是发现代谢标志物的重要手段之一.目前与TB病人相关的代谢组学研究还不多.该文利用基于核磁共振氢谱(1H NMR)的代谢组学技术,对不同病情程度TB患者的血浆代谢组进行了研究.正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)结果显示TB各组与健康对照组均可明显分离.统计分析发现,缬氨酸、丙氨酸、肌酸和3-羟基丁酸等代谢物在TB各组含量普遍高于对照组;乳酸、丙酮酸、N-乙酰糖蛋白、亮氨酸和谷氨酸等代谢物在疾病进展过程中呈逐渐增加的趋势,而三羧酸(tricartexylic acid,TCA)循环的中间产物——柠檬酸则呈逐渐降低的趋势,表明了代谢紊乱随疾病的逐渐变化过程.这些差异代谢物的变化表明TB患者体内能量代谢与糖酵解增强、脂肪酸生酮作用增强、TCA循环受阻、氨基酸代谢紊乱.     

高效液相色谱-串联质谱法测定食品添加剂中蛇床子素含量

蛇床子素(osthole)又名甲氧基欧芹酚或欧芹酚甲醚,其化学名称为7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素,是最先从伞形科植物中提取分离出的天然香豆素类化合物[1].     

单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构的确证

建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法.用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N-末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素2融合蛋白一级结构表达的正确性,同时为单克隆抗体-白介素2融合蛋白的质量标准研究奠定了基础.     

用尺寸排阻色谱法研究蛋白质的热稳定性

用尺寸排阻色谱ＺｏｒｂａｘＧＦ－２５０凝胶过滤柱研究了核糖核酸酶Ａ,马心肌红蛋白和溶菌酶的热稳定性。测定了蛋白质在尺寸排阻系统中的分配系数Ｋｄ并用荧光检测器分析了加热引起的蛋白质内源性荧光的改变,从而计算出了蛋白质的热变性转化点温度,测定了蛋白质天然态、热变性和盐酸胍诱导变性状态下的斯托期斯半径,实验结果进一步证帝了热变性后蛋白质不是呈真正的随机线状,而是保留了部分紧密的结构区域。用本方法研究了Ｐ     

水热法制备质谱专用提取多肽的金属螯合纳米磁珠

应用水热法合成质谱专用提取血清多肽的金属螯合纳米磁珠, 可用于质谱对血清中多肽分布情况的研究, 获得血清多肽谱. 对磁珠进行透射电镜(TEM), 原子力显微镜(AFM)和傅立叶红外光谱FT-IR的表征, 显示该粒子粒径在70～90 nm. 并通过质谱验证该金属螯合磁珠能有效提取血清中的多肽, 该磁珠为质谱进行疾病诊断解决样品制备的技术难题, 具有广阔应用前景.     

基于GC-TOF/MS技术的转Bt基因大米代谢组学研究

基于GC-TOF/MS技术对来源于两个不同产地的转Bt基因及其亲本大米进行了代谢组学研究。从大米样本中共检出774个色谱峰,鉴定出278种代谢产物,包括糖、氨基酸、脂肪酸及有机酸等代谢产物。对转Bt基因及其亲本大米进行主成分分析,结果表明,转Bt基因与亲本大米的代谢组之间无明显差异性,进一步对数据进行偏最小二乘判别分析和方差分析,仅甘油和鼠李糖两种代谢产物浓度在转Bt基因大米及其亲本大米间存在一定差异(分别升高1.55和3.32倍);考察了不同产地对大米代谢组的影响,结果表明武汉和海南两个产地的大米代谢组之间存在明显差异,有15种代谢产物在不同产地的亲本大米之间以及不同产地的转基因大米之间均发生显著变化。应用GC-TOF/MS技术对来源于不同产地的转Bt基因大米及其亲本大米的代谢组进行比较研究,结果表明引入外源Bt基因对实验中的水稻机体内代谢未产生明显影响,产地差异造成的大米间代谢组差异比引入外源Bt基因造成的大米间代谢组差异更为显著。     

重组人粒—巨噬细胞集落刺激因子去折叠过程的高效液相色谱动态监测

建立了用反相高效液相色谱分析重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｈｒＧＭ－ＣＳＦ）在二硫苏糖醇 （ＤＴＴ）作用下去折叠的方法。分离了ｈｒＧＭ－ＣＳＦ去折叠变化过程中的异构体，实现了对这一过程的动态监 测，从色谱分析的角度提供了结构信息，并用二极管阵列检测器和基质辅助激光解吸附飞行时间质谱对结 果进行了验证。     

牛胰岛素去折叠过程的高效液相色谱法分析

 建立了反相高效液相色谱法动态监测牛胰岛素在二硫苏糖醇存在下去折叠的过程。牛胰岛素在二硫苏糖醇作用下，首先发生构象变化，形成稳定的中间体后进一步断裂分子间的二硫键，形成Ａ链和Ｂ链。去折叠过程通过基质辅助激光解吸附质谱得到了鉴定。     

毛细管区带电泳监测牛胰岛素的去折叠过程

用毛细管区带电泳监测了二硫苏糖醇作用下二硫键还原引起的牛胰岛素去折叠全过程,同时用离线的基质辅助激光解吸／电离飞行时间的质谱配合确证。从毛细管电泳谱图能直接观察胰岛素去折叠过程中发生的变化,获得蛋白质去折叠信息。结果表明,毛细管区带电泳作为监测蛋白质构象变化的一种有效手段,方法简便、快速、灵敏度高、样品消耗量少。     

小鼠血清中内源性代谢物的GC/TOF-MS分析

采用气相色谱/飞行时间质谱(GC/TOF-MS)联用仪建立了小鼠血清的代谢组学分析方法. 通过对硅烷化试剂的优化和去卷积分析, 共检测到269个峰, 其中相似度在800以上的代谢产物有46个; 以核糖醇为内标, 任意选取18种内源性代谢产物考察此方法的精密度和稳定性, 并通过14种标准氨基酸的混标溶液进行定量分析考察本方法的线性关系. 结果表明, 14种氨基酸在2.78~113.20 ng/ SymbolmA@ L浓度范围内线性关系良好; 18种内源性代谢产物的变异系数均在15%以内, 具有较好的稳定性; 并利用8种标准单糖, 通过肟化反应解决了糖在多个位置出峰的难点. 该方法可用于代谢组学研究, 并通过相关数据处理找出生物标志物, 为疾病诊断提供了新的思路.