稀土离子与乳铁蛋白结合的光谱研究

用紫外示差光谱、荧光光谱及圆二色谱等方法研究了Tb³⁺和Eu³⁺在pH7.4的条件下与乳铁蛋白及脱铁乳铁蛋白的结合作用.结果表明,Tb³⁺及Eu³⁺可特异性地结合在脱铁乳铁蛋白的两个Fe³⁺结合部位,但不能从已经结合铁的乳铁蛋白中把铁置换出来.测得Tb³⁺ 与这两个部位结合的条件平衡常数为lgK₁=8.48±0.24和lgK₂=6.72±0.18(25℃,0.10mol/L NaCl, 0.10mol/LHepes,pH=7.4). Tb³⁺在这两个位点结合时,蛋白质的构象发生变化.在 Tb³⁺ 与蛋白质的浓度比低时,构象趋于紧缩,色氨酸残基进入疏水的环境;当Tb³⁺结合得较多时,构象转而开放,色氨酸残基转向亲水性环境.但无论哪种情况,Tb³⁺与脱铁乳铁蛋白的结合都不影响蛋白的二级结构.     

吖啶酯化学发光测量参数和睾酮抗体工作浓度的最佳化

10-甲基吖啶-9-羧酸[4-(N-睾酮-3-羧甲氧基肟)-氯乙基]苯酯(To-3-AEPMAC)发光测量的时间参数在低浓度区域测量十分重要.本文报道在0.00～0.21s间有一占发光总面积4.10±2.21%(x±s)的溶剂峰;峰发光的起始和终点在0.32～3.915间,峰时间参数位于0.43～2.22s间,反应速率分析也证实时间参数的实验结果.选择0.30s延迟时间和10s积分时间的化学发光积分参数测量既可排除溶剂发光的干扰,又可较精密地采集到T0-3AEPMAC的全部发光信号.而单位时间的发光峰高测量因随剂量增加峰时间参数延长不能满足建立超微量化学发光免疫化学分析测量的要求.本文根据化学发光免疫化学高灵敏和高精密的分析要求,通过抗体稀释曲线极值的优选、最大反应变化的标定和最小反应标准误点分析使睾酮抗体的工作浓度最佳化,即稀释度为1:18000.     

高效离子交换色谱法测定埃本膦酸钠

 采用高效离子交换色谱法,在流动相中加入二价铜离子,利用埃本膦酸钠通过流动相时与铜离子能形成紫外吸收的络合物的性质,在240nm波长下检测,所用柱为DEAE离子交换柱。方法的最低检测质量浓度为6mg/L线性回归系数为0.9989。方法简便,重现性好。同时考察了pH及有机溶剂对平衡分配的影响。