海洋硫酸多糖911的荧光标记研究

硫酸多糖（911）的性末端的半缩醛基,通过还原胺化反应与酪胺（Tyr)的氨基共价偶联,911－Tyr中酪胺引入的仲氨基通过与异硫氰酸酯荧光素（FITC）进行亲核反应,实现对911还原末端的选择性荧光标记。用UV－Vis吸收光谱,^1H NMR和HPSEC对偶联与标记结果进行确证,从^1H NMR谱推测911与酪胺的偶联率及FITC为911－Tyr标记率分别为60％和80％。由于采用的是911末端选择性标记,对911的抗凝活性无明显影响,也无明显细胞的毒性。以荧光标记的911作为探针,对淋巴细胞有较强的选择性标记染色。该法适用于具有还原末端的多糖及寡糖的荧光标记。     

一种糖生物传感芯片制备的新方法

建立了一种用于SPR生物传感器分析的糖生物传感芯片制备新方法。在已二胺大量过量的情况下，海洋硫酸多糖911还原末端的半缩醛基与已二胺的一个氨基进行还原胺化反应，引入一个伯氨基，该伯氨基进一步与sulfo-NHS-biotin反应，使911的还原末端生物素化，通过预偶联到GM5芯片上的链酶抗生素抗体，以俘获法将生物素化的911固定到芯片表面。该方法避免已有固定方法对糖内部结构的破坏，减少了非特异性耦联，能更好地反映糖类与其它分子的相互作用特性，且操作简单，适应于多数具有还原末端的糖类。911经该方法固定后，利用SPR生物传感器，研究了其与HIV gp120蛋白V3区的相互作用动力学，初步证明两者之间存在强烈的相互作用，KA与KD分别为：2.25e5与4.44e-6。