DNA氧化损伤评价模型的构建及其中药保护剂的筛选

香烟烟气含有上千种化合物,其中60多种证明具有致癌作用.另外香烟烟气含有高水平活性氧基团,例如超氧自由基、羟基自由基等,能够对细胞DNA造成氧化损伤~([1,2]).近年来研究表明:8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)已成为检测DNA损伤的一种重要标志物.本研究以8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)为DNA氧化损伤的标志物,构建了Fenton试剂(Fe~(2+)+H_2O_2)及吸烟产生的活性自由基对DNA的氧化损伤评价体系,并利用该体系筛选对DNA具有保护作用的中药单体.     

以二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶为基质的铝荧光传感层

本文基于Ａｌ＾３＋离子对电价键固定在二乙氨基乙基交联葡聚糖凝胶上的水杨基荧光 酮的可逆荧光淬灭作用，研制了测定Ａｌ＾３＋离子浓度的荧光传感层。     

基于金纳米微粒的化学发光金属免疫分析

建立了基于金纳米微粒溶解的化学发光反应体系,并探讨了金纳米微粒溶解及化学发光测定的最佳条件。首次将金纳米微粒引入生物素和IgG的化学发光金属免疫分析,比较了不同粒径金纳米微粒、不同检测系统对IgG测定的影响。在(一抗-IgG-二抗修饰金纳米微粒)检测系统中,基于10 nm和30 nm金纳米微粒测定IgG的线性范围分别为1~75 ng和0.5~25 ng,检出限分别为0.5 ng和0.1 ng。在(一抗-IgG-生物素化抗体-链霉亲和素修饰金纳米微粒)检测系统中,5 nm和10 nm金纳米微粒测定IgG的线性范围分别为10~250 ng和1~250 ng;检出限分别为5 ng和1 ng。     

化学发光消耗型锰传感器

化学和生物发光是由化学反应产生的一种光辐射,不需要任何光源。又由于它们具有高灵敏度、宽线性范围和相对比较便宜的仪器等优点,因而在化学和生物传感器领域引起了广泛的兴趣。已用于H_2O_2、乳酸和胆固醇等多种生物活性物质的测定,但未见有金属离子传感器的报道。本文发展了一种新型的全固态模式的消耗型锰离子化学发光传感器。该传感器将除待测物外的所有化学发光反应试剂全部固定在阴离子交换树脂Amberlyst A-27上,于化学发光反应之前,将一定量化学发光试剂从固定化试剂柱上洗脱,与样品中的锰离子产生化学发光。已成功地应用于水样中痕量锰离子的测定。每个固定化试剂柱可连续使用100次以上。 1 实验部分 1.1 仪器和试剂 化学发光传感器由流动系统和检测系统两部分组成。其中流动系统主要由蠕动泵、六通阀、固定化试剂柱和流通池组成。检测系统由光电信增管、负高压、放大器和记录仪组成(图1)。     

化学发光新技术的研究——外参比校正法识别生物样品中的叠氮化钠

针对大多数化学发光反应选择性差的缺陷,建立了一种基于外参比校正的化学发光新技术,从而实现了化学发光法对待测物的选择性识别.区别于以前常用的单个化学发光反应,偶合两个相似的化学发光反应,进行样品中叠氮化钠的选择性识别.两个相似的化学发光反应所用的氧化剂和催化剂相同,但化学发光增强剂不同.实验结果证明:偶合下列两个反应:H₂O₂-CH₃CN-四环素(工作反应)和H₂O₂-CH₃CN-N-乙酰-5-甲氧基色胺(参比反应),我们能够从多种相似的自由基淬灭剂中选择性地识别出叠氮化钠.这是因为叠氮化钠仅淬灭"工作反应"的化学发光信号,而其它的自由基淬灭剂则同时淬灭"工作反应"和"参比反应"的化学发光信号.作为应用示例,已利用该技术选择性识别并定量分析了商品化胰岛素试剂盒中各种试剂、人血清白蛋白和羊抗人IgG抗体样品中的叠氮化钠.     

一种新的流动型镍离子光纤反射传感器

本设计了一种新的流动型镍离子光纤反射传感器，原理基于固定于阴离子交换树脂上的亚硝基红盐与镍离子的络合反应，从而引起探头表面反射光强度发生变化，可进行１．０×１０＾－７－１．０×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ范围内镍离子的测定，并具有良好的可逆响应，出限为１．０ｎｇ／ｍｌ。     

2,9-二甲基-1,10-菲罗啉荧光光度法测定痕量铟

本文报道了以2,9-二甲基-1,10-菲罗啉(DMPH)荧光光度法测定痕量铟的新方法。实验表明,钢能很快与DMPH在pH4.0～8.7形成1:1的络合物。络合物的激发和发射波长分别为312nm,423nm。量子产率为0.35。检出限为1.0ng/g,铟量在0～1.0嵋/25mL呈线性关系。该法已成功应用于纯锡和纯铅中痕量铟的测定。     

脂质体荧光衰减技术预测10种中药单体的被动吸收

制备了DPH荧光脂质体,选用10种药理活性较好的中药单体,测定了这些中药单体进入荧光脂质体后引起的荧光衰减百分率,评估中药单体的细胞膜通透性。采用大鼠在体肠单向灌流实验测定了中药单体的小肠有效透皮系数(Peff),与中药单体引起的脂质体荧光衰减数据对比,两者相关性良好,从而证明荧光脂质体模型可以应用来预测中药单体的被动吸收。用DPH标记红细胞膜,测定了以上10种中药单体对荧光标记的红细胞膜的荧光衰减百分率,发现荧光脂质体与红细胞膜相关性良好,荧光脂质体模型的确可以一定程度上替代制备繁琐的红细胞膜,用来研究中药单体在真实细胞膜中的通透性。综合而言,荧光脂质体模型简单易行、重现性好、所需样品量少,适合于中药早期研究的高通量筛选。     

荧光法和分子对接研究4种黄酮与血清白蛋白的相互作用

结合分子对接理论和荧光法研究4种黄酮类天然产物与白蛋白的相互作用及作用机理。用FlexX软件研究了黄芩素、黄芩苷、汉黄芩素、灯盏乙素和白蛋白的分子对接,然后用荧光法研究这4种黄酮类天然产物与牛血清白蛋白的结合反应,测定了结合常数KA、结合位点n等参数。研究表明:4种天然产物与牛血清白蛋白结合位点n≈1,温度对结合位点影响不大;黄芩素和汉黄芩素主要通过疏水作用力与白蛋白结合,而黄芩苷和灯盏乙素主要通过氢键和范德华力与白蛋白结合。荧光实验和分子对接理论研究结果一致,两者相互补充,能够从实验和理论两方面协同研究天然产物与蛋白之间的相互作用。