LDS与肌酸激酶结合对酶活性的影响

本文用等速电泳技术测定了25℃时LDS对肌酸激酶分子的饱和紧密结合数为87。Hill作图法和Scatchard作图法分析的结果表明,这种结合呈正协同效应。当LDS对酶的高亲和位点充分饱和时,酶完全丧失活力;但部分饱和时,酶的剩余活力却明显地大于被认为是游离酶所能提供的活力。这表明还存在着一些仅被LDS部分饱和的活性酶分子。ATP的存在会导致LDS对酶分子紧密结合的减少和酶活力的部分恢复。     

羧甲基甘油醛-3-磷酸脱氢酶光照产生新萤光物质的研究——生成条件与性质

本文报道兔肌和猪肌GAPDH经碘代乙酸修饰活性部位半胱氨酸巯基后,在有NAD~+存在下,经紫外光照射可以产生一萤光新峰,其发射波长为410nm,激发光谱为双峰形,峰值分别为293nm和325nm。形成新峰的最适光照波长为280—290 nm,说明新萤光物的形成与芳香族氨基酸的激发有关.在光照过程中,随410nm萤光的增强,由295nm紫外光激发的340 nm蛋白萤光则明显降低,这说明在色氨酸与新生成的萤光发色团之间有能量转移.生成萤光新峰的光化学反应具有高度特异性,用碘代乙酰胺和四硫硫酸钠代替碘代乙酸对Cys-149进行修饰不能产生新峰.在NAD⁺类似物中,ADPR,AMP,ATP和NADH不能生成新峰.而β-NMN⁺和NADP⁺在加大浓度的情况下,可代替NAD⁺与CM-GAPDH生成新的萤光斗句质.文中对新峰发色团与酶蛋白的关系也进行了初步探讨。     

不同修饰剂对D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶产生新荧光物影响的研究

本文研究了GAPDH经不同修饰剂修饰后,光照能否产生新荧光物,其结果表明,酶经L-α-BPA、D-α-BPA、DL-α-BPPA及β-BPA修饰后,均和IAA修饰酶一样生成类似的荧光物。而经NEMI和O-IBA修饰的酶,却和经碘代乙酰胺和四硫硫酸钠修饰的酶一样,不能在同样条件下生成新荧光物,以上结果表明,在活性中心引入带羧基的基团是生成新荧光物所必需的。IASA和以上修饰剂都不相同,它和活性中心巯基反应后直接产生荧光。     

D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶新荧光发色团的圆二色性光谱研究

本文比较了GAPDH,CM-GAPDH以及经紫外光照射并带有新荧光团的GAPDH的圆二色性光谱。在200—250毫微米区域三者基本相同,加入SDS也没有显著影响。在250—300区域光照酶的CD光谱与每分子带有2个NAD⁺的GAPDH相似,加入SDS使酶在这一区域的CD光谱基本消失。在300—360毫微米光照酶与GAPDH-NADH络合物类似有一平缓的CD正峰。与后者不同的是,即使加入过量的SDS也不能使光照酶的这一平缓正CCD峰完全消失。这一事实指示新荧光团与肽链的结合是牢固的,它所处的微环境也是比较稳定的。