Oligo诱导突变的改进方法

介绍一种改进的Ｏｌｉｇｏ诱导ＤＮＡ定点突变方法，此法制备的含Ｕ野生型模板ＤＮＡ在ＪＭ１０７中的存活率从５％～１０％下降至１％～２％；诱变反应终产物转染ＪＭ１０７产生的斑数比原法提高１５～２０倍，诱导连续４个核苷酸替换产生的突变频率达８０％～８５％，即使诱导连续１２个核苷酸的缺失，也能获得４０％～５０％的突变频率．     

小菜蛾颗粒体病毒DNA限制性酶切分析及基因组DNA片段克隆

小菜蛾颗粒体病毒ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ酶切，经０．７５％琼脂糖凝胶电泳，分别得到１２条带和８条带，平均分子量为１１３．０ｋｂ．用Ｓｕｐｅｒｃｏｓ１Ｃｏｓｍｉｄ作载体，将Ｓａｕ３ＡＩ部分消化的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ随机片段插入该载体的ＢａｍＨＩ酶切位点，转化于ＸＬ１－Ｂｌｕｅ受体菌，经Ａｍｐ平板筛选转化子，挑出２５６个Ａｍｐ＋菌落，以３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ为探针，斑点杂交筛选得到５９个阳性重组体，再经电泳检测，得到了５９个不同大小的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ片段克隆．     

对虾肽Penaeidin-2在大肠杆菌中的融合表达及其抗细菌活性

采集南美白对虾血淋巴,从血细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增编码penaeidin-2成熟肽的开放阅读框cDNA序列,将其克隆至pGEM-T载体,进行序列测定,然后克隆至pET-32a(+)表达载体中,在E.coliOriga-mi B(DE3)pLysS中表达含6个His的重组对虾肽融合蛋白Pen-24,通过His Band resin Ni2+层析柱纯化获得Pen-24蛋白,采用纸片扩散法和液体生长抑制法检测该蛋白的抑菌活性.经SDS-PAGE分析,Pen-24蛋白的分子量为24.1×103.1μg对虾肽融合蛋白Pen-24与5 U的氨苄青霉素活性相当,对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和抗氨苄青霉素大肠杆菌均具有抑菌活性.     

人丙型肝炎病毒研究进展

扼要介绍了近年来ＨＣＶ研究的进展，包括病毒形态、基因组结构、病毒蛋白质及其加工、病毒流行病学、病毒与肝癌关系、病毒抗体检测试剂的发展及疫苗研究，并对抗体检测试剂的发展趋势和目前疫苗研究中的问题进行了分析．     

丙型肝炎病毒包膜蛋白E1在小鼠和家兔中免疫应答研究

探讨丙型肝炎病毒包膜蛋白E1作为丙肝候选疫苗的可行性．用大肠杆菌表达的非糖基化HCV(丙型肝炎病毒)E1包涵体蛋白免疫小鼠和家兔，分析该包涵体蛋白在小鼠和家兔中所引起的免疫应答及其安全性．该E1蛋白具有良好的免疫原性，能诱导小鼠和家兔产生针对E1的特异性体液免疫应答．小鼠CD8^ T细胞数量在免疫后有明显升高．免疫小鼠未见明显的毒副作用．推测HCV E1这种包涵体结构可能有利于E1抗原的呈递．而HCV E1蛋白的糖基化并不是其免疫原性所必须的．     

蝎神经毒素AaIT的表达及功能分析

在不改变氨基酸编码序列的情况下，根据大肠杆菌密码子偏爱性，设计并人工合成了适合于大肠杆菌表达的蝎神经毒素AaIT基因．将该基因插入到大肠杆菌表达载体PET32a＋中，得到重组质粒PET32a-AaIT，将该质粒转入带有trxB／gor双突变的大肠杆菌Origami（DE3），重组菌株经IPTG诱导后，获得町溶性表达产物，但该表达产物没有生物学活性．把此基因插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC6αA构建重组质粒pPIC6αA-AalT，转化毕赤酵母（X-33），经甲醇诱导后，获得高水平的分泌表达（20mg／L）．表达产物喂食银纹夜蛾及甜菜夜蛾没有表现出生物活性，经注射有活性．     

小菜蛾颗粒体病毒增效因子的研究

小菜蛾颗粒体病毒（ＰｌｕｔｅｌａｘｙｌｏｓｔｅｌａＧｒａｎｕｌｏｓｉｓＶｉｒｕｓ简称ＰｘＧＶ）ＤＮＡ与苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ简称ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ共转染Ｓ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ细胞，经空斑测定，ＰｘＧＶ－ＤＮＡ提高ＡｃＮＰＶ游离病毒粒子的产量达２～１３倍．这表明ＰｘＧＶ－ＤＮＡ对提高ＡｃＮＰＶ病毒粒子产量具有促进作用，并为ＰｘＧＶ增效因子的研究提供了重要的依据     

人丙型肝炎病毒核心抗原基因的表达和纯化

人丙型肝炎病毒Ｉ型（ＨＣＶ－Ｉ）核心抗原编码区ｃＤＮＡ，全长５７３ｂｐ，编码１９１个氨基酸，被克隆到一种新的表达质粒ｐＲＳＥＴＨｉｓＢ中，转化大肠菌ＢＬ２１菌株，在１ｍｍｏｌＬ－１ＩＰＴＧ诱导３７℃培养５ｈ，核心抗原表达水平达到高峰，表达出分子量２６×１０３的融合蛋白，并在细胞内形成微小晶体．表达水平达到细胞总蛋白的４０％左右，通过纯化，获得的核心抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查为均一分子量２６×１０３的蛋白，用酶联免疫法进行血清学初步检查，纯化的核心抗原与ＨＣＶ阳性血清显示出强烈的阳性反应，对慢性丙肝病人血清中抗ＨＣＶ抗体的阳性检出率达９３％，而与正常人血清则无阳性反应     

蚯蚓纤溶酶基因的cDNA克隆及其序列分析

从粉正蚓成体中提取总RNA，以寡核苷酸Oligo(dT)2v为引物合成cDNA第一条链；用RT-PCR的方法扩增蚯蚓纤溶酶的cDNA，将其克隆到pUCm-T载体上进行DNA序列测定．结果表明，所克隆的蚯蚓纤溶酶cDNA长度为747bp，其中编码区段为738bp．共编码246个氨基酸．将该序列与GenBank中其它的4种蚯蚓纤溶酶序列(Lumbricus rubellus EFE-III-1、Lumbricus rubellus lumbrokinase-3(1)precursor、Lumbricus bimastus lumbrokinase、Lumbricus rubellus lumbrokinase-1 T4 precursor)相比．同源性分别为99％，97％，89％，88％；与同源性最高的序列相比，本序列有7个碱基、3个氨基酸与该序列不同．     

墨胸胡蜂毒腺基因cDNA文库的构建及鉴定

从墨胸胡蜂毒腺中提取总RNA，经Oligo(dT)磁珠纯化mRNA后，用AMV反转录酶合成第一链cDNA．完成第二链cDNA合成后，过柱纯化50bp以上的片段，与载体pUC118连接，转化E．coli JM109，建立了cDNA文库．得到的780个阳性克隆中，重组率达到98．5％．大部分插入片段在500～900bp．随机挑选10个短序列测序，一个为蜂毒激肽基因序列．