荧光标记寡核苷酸的反相离子对色谱分析

建立荧光标记寡核苷酸反相离子对色谱分析方法,优化了流动相醋酸三乙胺浓度(0～0.15 mol/L), pH 4.5～7.0和洗脱强度等色谱条件.对5-mer, 10-mer和15-mer非标记和5'-羧基荧光素(5'FAM)标记寡核苷酸的保留进行比较分析,研究荧光标记寡核苷酸的保留机理,并分离TaqMan~(TM)探针等多种常用荧光标记寡核苷酸.结果显示,不同长度荧光标记寡核苷酸在0.01 mol/L醋酸三乙胺,pH 7.0的条件下获得最大分离.荧光标记寡核苷酸的保留与非标记寡核苷酸有明显差异,两者可完全分离.在一定长度范围内非标记寡核苷酸随长度的增加,保留时间增长;相反,荧光标记寡核苷酸的长度增加,保留时间减短.荧光染料疏水性对其标记的寡核苷酸在反相柱中的保留有较大影响,荧光染料疏水性越强,其标记寡核苷酸保留时间越长.但疏水性的影响程度随标记寡核苷酸长度增加而逐渐变小.     

超声波破碎-高效液相色谱法定量检测核酸

采用超声波破碎结合高效液相色谱技术,建立了定量检测质粒DNA的方法,测量结果可以溯源至核苷酸标准物质.采用超声波破碎(功率300 W,频率24 kHz)技术将质粒DNA破碎成200～500 bp的小片段DNA,再用蛇毒磷酸二酯酶将其水解为4种核苷酸(dCMP:3.2 min;dTMP:4.7 min; dGMP:5.3...     

腺嘌呤核苷一磷酸纯度标准物质的研制

以市售腺嘌呤核苷一磷酸为原料经纯化后研制脱氧核糖核苷酸标准物质.用红外光谱法和质谱法对纯化后的腺嘌呤核苷一磷酸样品进行定性鉴定,采用高效液相色谱法对腺嘌呤核苷一磷酸样品进行定量分析.探讨了高效液相色谱法分析腺嘌呤核苷一磷酸的分离和检测条件.实验发现,有机溶剂可以显著改善腺嘌呤核苷一磷酸的出峰时间,酸度和盐离子浓度可以显著改善色谱的分离度.采用多家实验室联合分析的方法对标准物质进行定值,研制的腺嘌呤核苷一磷酸标准物质的纯度为99.61%,定值结果不确定度为0.13%(k=2).     

荧光标记DNA高分辨电感耦合等离子质谱定量分析

建立了基于磷元素测量的高分辨电感耦合等离子质谱定量荧光标记DNA的分析方法,该方法定量测量结果可以溯源到国际基本单位（SI）。采用柱层析、超速离心、透析的技术对样品进行纯化,用芯片电泳和电导率测试仪对其进行了纯度检验。然后利用优化后的微波消解方法对荧光标记DNA样品进行了消解处理。从射频功率、等离子气流速、辅助气流速、雾化气流速、采样深度、获取时间等方面对高分辨电感耦合等离子质谱测量条件进行了优化,从物理性干扰、内标、同位素、元素形态等方面对测量进行了校正。利用优化后的方法对荧光标记DNA样品进行了定量测量,从方法的精密度、标准物质、样品称量、标准和样品稀释等方面进行了定量测量结果不确定度的评估。测量结果的扩展不确定度为8.28%(k=2),远优于现在常规的紫外、荧光、色谱测量核酸含量的不确定度。该方法可用于核酸含量标准物质的定值分析。     

同位素稀释质谱法对溶液中血管紧张素Ⅰ含量的测定

氨基酸分析是一种传统的多肽和蛋白质定量分析方法,通常通过柱前或柱后衍生的方式进行[1-2]:而同位素稀释质谱法作为一种计量权威方法,已经被广泛地应用到无机及有机化合物的计量研究中[3-4].