脱辅基神经红蛋白热稳定性的光谱法研究

采用酸丙酮法制备了脱辅基神经红蛋白(apo-Ngb)。利用紫外-可见吸收光谱和圆二色光谱(CD)对apo-Ngb的热稳定性进行了研究。结果表明,在高温下apo-Ngb发生了变性,其二级结构遭到破坏,α-螺旋的含量减少。计算得到了apo-Ngb热变性的中点温度(61.8℃)和热力学参数(ΔH=93.1 kJ·mol-1,ΔS=277.8J·mol-1·K-1)。与Ngb相比,由于血红素辅基的去除,apo-Ngb蛋白肽链结构变得疏松无序,从而使apo-Ngb的热稳定性有所降低。     

神经红蛋白突变体H64V与叠氮离子的作用

将64位组氨酸(His64)突变为缬氨酸(Val),构建了神经红蛋白(Ngb)突变体H64V基因并进行了蛋白的表达纯化,突变使Ngb的血红素Fe由六配位结构变成五配位结构.利用光谱法研究了突变体H64V与叠氮离子(N_3~-)的相互作用.紫外-可见吸收光谱表明,H64V与N_3~-键合后其Soret带吸收峰由406 nm红移至418 nm;荧光光谱表明N_3~-可使H64V的荧光发生静态猝灭.计算得到了H64V与N_3~-键合的平衡解离常数和热力学参数.另外,还研究了不同阴离子对H64V与N_3~-结合的影响,发现阴离子的存在减弱了N_3~-与H64V之间的结合力.     

铜(Ⅱ)离子与神经红蛋白的相互作用

利用紫外可见吸收光谱、荧光光谱、同步荧光光谱及圆二色(CD)光谱研究了铜髤离子与神经红蛋白(NGB)的相互作用。结果表明,Cu2+离子使NGB在280nm处的紫外吸收增强,说明Cu2+与NGB发生了相互作用;Cu2+使NGB内源性荧光发生猝灭,其猝灭机制为静态猝灭;同步荧光光谱表明,Cu2+使色氨酸微环境的疏水性有所降低,Cu2+对NGB的作用位点更接近于色氨酸;CD光谱显示Cu2+没有引起NGB二级结构明显的变化。