滚环扩增技术在病原微生物检测中的应用

滚环扩增（RCA）技术是一种简单的恒温DNA扩增技术,在DNA聚合酶的催化下通过扩增闭合环状模板产生成千上万的重复序列。相较于变温核酸扩增技术如聚合酶链式反应（PCR）,RCA无需昂贵的变温仪器,更适合现场检测。该文介绍了RCA技术的原理和分类,综述了其在细菌、病毒以及其它病原微生物检测方面的应用现状,并展望了RCA检测病原微生物的应用前景。RCA在检测病原微生物领域有着巨大潜力,同时可为新型冠状病毒（SARS－CoV－2）的快速检测提供思路和补充。     

镥铕共发光时间分辨荧光免疫法检测嗜水气单胞菌

建立了共发光时间分辨荧光免疫检测嗜水气单胞菌的新方法,以嗜水气单胞菌菌株B11包被微孔板,与Eu3+标记的兔抗IgG免疫反应后,加入含有共发光离子Lu3+的解离增强剂,由于Eu3+和Lu3+络合物的共发光效应,时间分辨荧光大大增强,有效放大了检测信号,提高了检测灵敏度。优化了共发光体系的条件,方法的检出限为1.0×10³cfu/mL,在1×10³~5×10⁶cfu/mL范围内线性关系良好,相关系数0.994,不同血清型的嗜水气单胞菌以及其它菌株均呈阴性。板内和板间的相对标准偏差分别为2.9%和3.0%。用该法检测了35份人工感染的日本鳗鲡组织样品,阳性检出率为100%,高于直接时间分辨荧光免疫法和ELISA法。共发光时间分辨荧光免疫法检测嗜水气单胞菌,快速灵敏,具有良好的应用前景。     

时间分辨荧光免疫法检测日本鳗鲡的产酸克雷伯氏菌

从皮肤点状出血的日本鳗鲡中分离出产酸克雷伯氏菌菌株B12,经福尔马林灭活后,注射新西兰兔,制备免疫抗血清,G蛋白亲和层析纯化得到抗体（IgG）,以固定于微孔板的IgG作为捕获抗体,Eu³⁺螯合物标记的IgG作为检测抗体,建立了产酸克雷伯氏菌的夹心型时间分辨荧光免疫检测法（TRFIA）,并研究了抗体浓度、免疫时间及离解时间对检测的影响。本方法检出限为5.0×10³ cfu/mL;线性范围5.0×10³～1.0×10⁷ cfu/mL,相关系数达0.99以上。交叉反应表明其具有较高的特异性,板内和板间相对标准偏差分别为5.64%和2.27%。将本方法标准化后,检测了29份人工感染的日本鳗鲡样品,包括鳃、肾、肠、肝和肌肉组织,结果满意。     

时间分辨荧光免疫分析高灵敏检测嗜水气单胞菌

建立了生物素-链霉亲和素时间分辨荧光免疫分析（BAS-TRFIA）高灵敏检测嗜水气单胞菌的新方法.以兔抗IgG包被微孔板,加入嗜水气单胞菌菌株B18和生物素化IgG,生成的夹心复合物用Eu³⁺-链霉亲和素作为示踪物,Eu³⁺可与离解增强液形成时间分辨荧光（TRF）,通过TRF值对病原菌定量.方法的检测限为1.0×10² cfu/mL,在1.0×10~1.0×10⁶ cfu/mL范围内线性良好,相关系数0.9716.用该法检测时,不同来源的嗜水气单胞菌以及其它气单胞菌均呈阴性.板内和板间的变异系数分别小于5.00%和9.00%.所有相关检测试剂37℃恒温放置6 d后,检测性能无明显改变.对60份人工感染的美洲鳗鲡组织样品,包括肝、肾、肠、鳃和肌肉等组织进行检测,阳性检测率为98.33%.结果表明,BAS-TRFIA法检测嗜水气单胞菌,灵敏度高、特异性好、操作简便,该方法为水产养殖病原菌检测提供了新的思路.     

差异蛋白质组学在水生动物免疫研究中的应用

差异蛋白质组学是指依据蛋白质样品在不同时期、不同组织、不同状态或不同外界条件下表达不同,来筛选、鉴定蛋白质,可以通过对差异蛋白质的分析鉴定研究编码该差异蛋白的基因,扩展对该基因功能的研究,也可以结合功能蛋白质组学研究,发现新的蛋白质,完善已有的蛋白质组数据库.     

相分离免疫分析的研究进展

相分离免疫分析通过开展快速的均相反应和简单的异相分离而兼具了均相免疫与异相免疫的优点,方法易于实现自动化.本文介绍了相分离免疫分析的基本原理,对相分离免疫分析载体、固定化方式、标记物、应用及发展方向进行了评述.引用文献60篇.     

两种环境敏感高分子在相分离免疫分析中的比较研究

进行了两种环境敏感高分子在相分离免疫分析嗜水气单胞菌外膜蛋白(outer membrane protein, OMP)中的比较研究. 首先合成温度敏感高分子聚N-异丙基丙烯酰胺和pH敏感高分子聚(N-异丙基丙烯酰胺-甲基丙烯酸), 分别以N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯(NAS)和碳二亚胺(EDCI)作为偶联剂与抗OMP抗体(Ab)偶联形成抗体复合物(Ab-polymer), 在竞争型免疫测定中, OMP标准溶液与异硫氰酸荧光素标记OMP在均相条件下竞争性地与Ab-polymer反应, 调节外界环境分离出高分子免疫复合物沉淀, 重新溶解后荧光法定量, 两种体系的OMP浓度均在400～3000 ng/mL范围内与荧光强度呈良好线性关系, 检出限分别为84.7和39.6 ng/mL. pH敏感高分子相比于温度敏感高分子具有以下优点: 可以在37 ℃的生理温度进行免疫反应, 进一步提高了免疫反应的速度和效率; 可利用高分子本身的活性基团进行Ab的固定, 固定化效率、固定Ab的免疫反应活性较之NAS偶联法得到了提高; 有更高的检测灵敏度. 因此, pH敏感高分子更适合于作为相分离免疫分析的载体.     

pH控制相转变分离-荧光免疫分析嗜水气单胞菌外膜蛋白

以pH敏感高分子作为载体,建立了荧光免疫分析嗜水气单胞菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)的新方法。pH敏感高分子通过碳二亚胺(EDCI)与抗OMP抗体偶联,在夹心型免疫测定中,OMP首先与固定在高分子上的抗体在37℃均相反应,然后进一步与异硫氰酸荧光素标记抗体均相反应,调整pH分离出高分子免疫复合物沉淀,重新溶解后根据荧光强度确定OMP浓度。OMP在0.4~30 mg/L范围内与体系相对荧光强度呈良好线性关系,检出限为31μg/L。方法灵敏、快速且操作简便,抗体通过EDCI活化的羧基与氨基反应固定到高分子上,固定化效率、固定抗体的免疫反应活性较之以前的固定方法均得到了提高。